HCV vérvizsgálat: mi ez?

Share Tweet Pin it

A modern orvostudomány fogalmai szerint a világon a prevalencia prevalenciája a vírusok közé tartozik. Az emberiségnek sok erőt és erőforrást kellett használnia a harcot. Rendkívül fontos szerepet tartozik a diagnózis vírusos máj elváltozás, különösen a hepatitis C helyes dekódolása laboratóriumi paraméterek kimutatására a betegség miatt nehéz a nagyszámú álpozitív egy vérvizsgálat. Ezért a tanulmány helyes megválasztása és értelmezése annyira fontos.

Módszerek vírus kimutatására

A hepatitis C vírus (hcv) egy kis RNS lánc a vírusburkolaton belül, amely a májsejtek genetikai anyagát használja reprodukálására. Közvetlen kapcsolatuk az alábbiakhoz vezet:

  • A gyulladásos folyamat kialakulása a májban;
  • Májsejtek megsemmisítése (citolízis);
  • Az immunmechanizmusok elindítása specifikus antitestek szintézisével;
  • Immun komplexek autoimmun agressziója a gyulladásos hepatocyták ellen.

A hepatitis C vírus, amely bejut a szervezetbe, nagyon lassú immunválaszt vált ki, amely hosszú ideig nem észleli. A betegséget gyakran csak a májcirrózis szakaszában találják meg, bár a vírusrészecskék és azok megfelelő antitestjei folyamatosan keringenek a vérben. Ez az alapja a hcv fertőzés diagnosztizálásának minden ismert módjának. Ezek a következők:

  1. Laboratóriumi körülmények között végzett szerológiai vizsgálatok;
  2. PCR-diagnosztika (polimeráz láncreakció);
  3. Expressz tesztek otthoni betegség meghatározására.

Videó a hepatitis C-ről:

A tanulmány lehetséges indikációi

Bárki megy kipróbálni a hcv-fertőzést. Különleges bizonyság erre nem szükséges, kivéve egy személy vágyát ennek a vérvizsgálatnak. De vannak olyan személyek, akiket kötelezően meg kell vizsgálni. Ezek a következők:

  • Véradók;
  • Azok a személyek, akik vérátömlesztést kaptak, annak összetevőit vagy készítményeit;
  • A máj transzaminázszintjének (ALT, ASAT) szintjének emelkedése, különösen a korábbi műtéti beavatkozások, a munkaerő és más orvosi manipulációk után;
  • A vírusos hepatitis C gyanúja vagy a diagnózis kizárásának szükségessége;
  • Negatív tesztek a vírusos hepatitis B-re a májgyulladás tüneteinek jelenlétében;
  • Ellenőrizze a hcv-fertőzés kezelésének hatékonyságát, és kezelje a további kezelés taktikájával kapcsolatos kérdéseket.

A szerológiai diagnózis jellemzői és az eredmények értékelése

Laboratóriumi vizsgálat a vér HCV magában foglalja a antitestek (immunglobulin) osztályokba M és G antigénkomponensként Hepatitis C vírus használnak erre a reakcióban főleg kapcsolt immunszorbens vizsgálattal (ELISA) és radioimmun (RIA). Laboratóriumi módszerek antitestek detektálására a legjelentősebb, mert lehetővé teszik a használatát, mint néhány reagensek antigén komplexek a leggyakoribb típusú hepatitis C vírus

A vizsgálathoz körülbelül 20 ml vénás vért gyűjtünk a perifériás vénából. Centrifugáljuk és üledzük el plazmát (folyadék átlátszó rész). Az űrlapelemeket és az üledéket eltávolítják. A hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében a reggeli étkezés előtt jobb vért venni. Néhány nappal korábban kívánatos kizárni a gyógyszerek használatát, különösen az immunrendszer állapotát.

Az elemzések eredményei így bemutathatók:

  1. Hcv - negatív. Ez azt jelenti, hogy a hepatitis C vírus ellen nem észleltek antitesteket a szervezetben. Nincsenek betegségek;
  2. Hcv - pozitív. Ez azt jelzi, hogy a vizsgált vérmintákban a hepatitis C vírus elleni antitestek jelenléte van, vagy ha ez a betegség, betegségben vagy krónikus formában van;
  3. Anti-hcv IgG-t detektáltunk. Ebben az esetben érdemes a krónikus vírusos hepatitis C-t gondolni;
  4. Anti-hcv IgM-t detektáltunk. Elszigetelt jelenléte akut folyamatról szól, és anti-hcv IgG-vel - krónikus exacerbációval kombinálva.

A gyors tesztelés jellemzői

Bárki végezhet vérvizsgálatot egyedül a hcv-nél. Ez tette lehetővé a létrehozását speciális teszt rendszerek gyors diagnózis hepatitis C és hatékonyságuk rosszabb laboratóriumi szerológiai módszerekkel, de tökéletes egy hozzávetőleges meghatározása esetleges fertőzés rövid időn belül.

Vásárolhat vagy rendelhet tesztrendszert bármely gyógyszertárban. Ide tartozik mindaz, ami szükséges a teszthez. Az elemzés a steril tartály nyitásával és az összes komponens előkészítésével kezdődik. Egy fertőtlenítő ujjal ellátott speciális szalvétával végzett kezelés után gyengéden átszúrja a rongyosítót. Pipettával 1-2 csepp vért gyűjti és áthelyezi a tesztlemezen lévő bemélyedésbe. A vérhez adjunk 1-2 csepp reagenst az injekciós üvegből, amely része a vizsgálatnak. Az eredményt 10 perc elteltével kell értékelni. Rendkívül fontos, hogy ne értékeljük az eredményt 20 perc után a hamis pozitív eredmény miatt.

Az elvégzett vérvizsgálat a következőképpen tekinthető:

  1. A tabletta ablakában egy lila csík jelent meg (a teszt negatív). Ez azt jelenti, hogy a tesztvérben a hcv ellenes antitesteket nem észleltek. A személy egészséges;
  2. A tabletta ablakában két lila csík jelent meg (a teszt pozitív). Ez azt jelzi, hogy az ellenanyagok jelen vannak a vizsgált vérben és az organizmusnak a vírusos hepatitis C-vel való kapcsolatát. Ezeket az embereket a szerológiai diagnózis alaposabb módszerei követik el;
  3. A tabletta ablakában egyetlen szalag sem jelent meg. A tesztrendszer sérült. Ajánljuk újraeszteni.

A PCR diagnosztika jellemzői

A polimeráz láncreakció a sejtek genetikai anyagának kimutatásának legmodernebb módja. A vírusos hepatitis C tekintetében a módszer lehetővé teszi a vírusrészecskék RNS-molekuláinak kimutatását. Ezt kvalitatív és mennyiségi szempontból lehet elvégezni. Az első módszer nem feltétlenül tájékoztató jellegű, ha a vizsgált vérben lévő vírusrészecskék száma nem éri el a küszöbértéket. A második módszer lehetővé teszi az észlelt RNS vírusláncok számának pontosítását és érzékenyebbé tételét.

Az elemzést az alábbi eredményekkel lehet bemutatni:

  1. A Hcv RNS-t nem detektáltuk. Ez azt jelenti, hogy nincsenek vírusrészecskék a tesztvérben;
  2. RNS hcv detektálható. Ez jelzi a hepatitis C fertőzést;
  3. Kvantitatív hcv-PCR-tesztet végzünk a páciens vér fertőzésének mértékére és a vírusszaporodás aktivitására a testben. A magas vírusterhelés 600-700 NE / ml értéket vesz figyelembe. Az ábrán túlmutató jelzőket nagyon magasnak nevezik, alatta - alacsony vírusterhelés.

A vírusos hepatitis C diagnózisában a hcv vérvizsgálata az egyetlen informatív, hozzáférhető és ártalmatlan módszer a diagnózis igazolására. A helyes értelmezés és a különféle módszerek kombinációja minimálisra csökkenti a diagnosztikai hibák számát.

A legjobb anti-HCV (kit 2) 12x8

Cat. № 0772

ár: kérésre

Hozzáadhatja az elemet a kosárba a mennyiség meghatározásával

Csomagolás típusa: karton doboz

A reagensek készletek immunoenzyme azonosítani osztályok immunglobulinok G és M a hepatitis C vírus szérum / plazma az emberi vér és vérkészítmények (immunglobulinok, interferonok, krioprecipitátum, albumin). A 2 készletet 96 meghatározásra tervezték, ideértve a kontrollokat is - 4 kút elemzésenként, valamint egy szalag részenkénti használata vizsgálatonként. Kézi beállításhoz, nyílt típusú automatikus ELISA analizátorokhoz. A technika szilárd fázisú ELISA-n alapul, amely rekombináns antigéneket alkalmaz. Lehetőség van kiszámítani a pozititási együtthatót. A kontrollok és a minták térfogati egyenlősége. A kromogénnel végzett enzimes reakció termelésének feltételei standardizálása termosztátban 37 ° C-on A reakció időtartama: 1 óra 20 perc

Funkcionális cél

Ajánlott a vér, szervek, humán szövetek adományozóinak, a vírusos hepatitis differenciál diagnózisának vizsgálatához

Műszaki adatok

A készlet tartalma:
1. Összecsukható tabletta - 1 db.
2. Pozitív és negatív kontrollok - 2x1 fl.
3. Konjugátum és oldat hígításához (PK) - 2x1 fl.
4. Szérumhígító oldat (PC) - 1 fl.
5. Foszfáttal pufferolt sóoldat, koncentrátum (PBS) - 2 fl.
6. Substrate pufferoldat (SBR) - 1 fl.
7. Tetrametil-benzidin, koncentrátum (TMB) - 1 fl.
8. Stop reagens - 1 fl.
9. Használati utasítások.
10. Film a tömítéshez.
Vizsgálati minta: szérum vagy vérplazma, legfeljebb 40 μl térfogattal.
ELISA - eljárás lefolytatásához szükséges protokollok száma: legalább 4.
Tárolási feltételek: +2 ° C-on. 8 ° C a címkén feltüntetett teljes eltarthatósági időtartamra.
A készlet eltarthatósága 12 hónap.
Regisztrálva a Roszdravnadzorral

HCV vérvizsgálat

A betegség elterjedésének módja csoportokra bontható:

  • Parenterális - azaz a fertőzés az orvosi eszközök, a tűk és a steril manikűr eszköz megosztásán keresztül történik;
  • Szexuális - vírus átkerül egyik partnertől a másikba a nem védett szexuális kapcsolat során;
  • A függőleges út a magzat fertőzése a beteg anyától.

A hepatitisre vonatkozó elemzést olyan személyeknek kell átadniuk, akik:

  • Készüljön fel a tervezett kórházi ápolásra;
  • Tervezik, hogy van egy kisbaba;
  • A bilirubin, az ALT vagy az AST emelkedését a klinikai vizsgálatban észlelték;
  • Tüneti kép, hasonló a hepatitis C jeleihez;
  • Gyakran megváltoztatják szexuális partnereiket, vagy inkább védtelen nemet szeretnek;
  • Drogfüggőek;
  • Adományozóként fognak lenni;
  • Az orvosi vagy óvodai intézményekben dolgozó munkavállalókat évente átfogó vizsgálatnak kell alávetni, beleértve az ilyen elemzést is.

A HCV vérvizsgálat laboratóriumi módszer a hepatitis C diagnosztizálására, hatásmechanizmusa olyan antitestek azonosításán alapul, mint az IgG és az IgM, amelyeket aktívan állítanak elő, amikor a vírus ellenanyagai megjelennek a vérben. Mi ez? Ezek olyan kórokozó mikroorganizmusok, amelyek a fertőzés után több héttel vagy akár hónapokkal jelentkeznek.

Az elemzés magyarázata

A HCV felépítésének tanulmányozása során a tudósok arra a következtetésre jutottak, hogy ez a kórokozó egy genom, amely mind állatokkal, mind növényi vírusokkal kapcsolatos. Ez egy génből áll, amelybe kilenc fehérje információ férhet. Az első feladat a vírus bejutása a sejtbe, a második felelős a vírusrészecske kialakulásáért, míg mások ebben az időben átkapcsolják a sejt természetes funkcióit magára. Ezek a fehérjék strukturális csoportjába tartoznak, amikor a másik hat nem strukturális.

A HCV-genom egy egyetlen RNS-szál, amelyet egy saját kapszulában (kapszid) helyeztek el, amelyet egy nukleokapszid fehérje képezett. Mindezt fehérjékből és lipidekből álló héj borítja, lehetővé teszi, hogy sikeresen megköti a vírust az egészséges sejthez.

Amint a vírus bejut a véráramba, a véráramon keresztül kezd eljárni a szervezetben. A májban a genom aktiválja a funkciókat és csatlakozik a májsejtekhez, fokozatosan áthatolva őket. A hepatocyták (az úgynevezett sejtek) zavart okoznak működésük során. Fő feladata a "vírusért dolgozni", amelynek során virális fehérjéket és ribonukleinsavat kell szintetizálniuk.

A HCV számos genotípust különböztet meg, azaz törzseket. Jelenleg 6 genotípus van, míg minden fajnak saját alfajja van. Mindegyikük az 1-től 6-ig terjedő számozás szerint van kijelölve. Jelentések vannak a globális földrajzi hely vagy a vírus lokalizálásáról. Például az 1., 2. és 3. genotípus az egész világon, míg 4 - több a Közel-Keleten és Afrikában, 5 - Dél-Afrikában és 6 - Délkelet-Ázsiában.

A kezelés kijelölésének alapja a HCV vérvizsgálatának pozitív eredménye, valamint egy specifikus genotípus.

A HCV analízis dekódolása:

  • Az anti-HCV Ig M a hepatitis C vírus aktív replikációjának markere;
  • Az anti-HCV IgG a hepatitis C vírus valószínű jelenléte;
  • Ag HCV - pozitív eredmény, jelezve a hepatitis C vírus jelenlétét;
  • HCV RNS - Hepatitis C vírus jelen van a szervezetben és aktívan halad.

Hamis pozitív eredmény

Kevésbé valószínű, hogy hamis negatív eredményekről beszélnek, amelyeket az immunszuppresszánsokat szedő betegeknél regisztráltak, vagy ezt az immunrendszer jellemzői befolyásolják. Ugyanaz az eredmény várható, ha a hepatitis C a fejlődés korai szakaszában van.

Abszolút félreértés esetén a hepatitis C PCR-tesztjét igénybe veheti, ha pozitív eredményt ad, majd további elemzést ad a vírus genotípusának meghatározására.

Fogalom és hogyan kell

A hepatitis C analízise azt jelenti, hogy a betegnek vérmintát kell hagynia az üres gyomorról, mivel legalább 8 órával az anyag szállítása előtt kell vacsoráznia. Az ébredés után csak egy kis, egyszerű, csendes vizet inni. Jobb lesz, ha a vizsgálat előestéjén követed az étrendedet, így a lehető legegyszerűbb és egyszerűbb. A sült és zsíros ételeket teljesen ki kell zárni, valamint az alkoholt is. A nehéz fizikai munka és a sport befolyásolhatja a teszteredmények megbízhatóságát, ezért próbálja elkerülni.

Ha vérre kívánja adni az elemzést a hepatitis C kimutatására, akkor azt kell tudni, hogy a gyógyszerek torzíthatják a valós értékeket, úgyhogy végezzük el a vizsgálatot a gyógyszer bevétele előtt, vagy néhány héttel a kivonásuk után. Ha abbahagyja a gyógyszeres kezelést, az orvos tanúvallomása nem lehetséges, akkor tájékoztassa a nővért, aki az elemzést elvégzi. Meg kell jegyeznie a gyógyszer nevét és a dózist, amelybe felírták.

A laboratóriumi vizsgálat szérumot igényel. Mennyire érvényesek az anyagok? Ezek tárolása kevesebb mint öt napig 2-8 Celsius fokos hőmérséklettartományban, és több mint öt napig, feltéve, hogy a tárolási hőmérséklet -20 Celsius fok.

A HCV vérvizsgálat kötelező immunhiányos betegek, különösen a HIV esetében.

A portál adminisztrációja kategorikusan nem javasolja öngyógyításra és tanácsot ad a betegség első tüneteiről. Portálunkon megtalálhatók a legjobb orvosszakértők, akikhez online vagy telefonon regisztrálhat. Kiválaszthatja a megfelelő orvost, vagy teljesen fel fogjuk venni ingyen. Továbbá csak akkor, ha felvételt készítünk ránk, a konzultáció ára alacsonyabb lesz, mint maga a klinika. Ez a mi kis ajándék a látogatóinknak. Légy egészséges!

Legjobb anti-vss

Reagensek készlete az M osztályú immunglobulinok immunválaszának kimutatására a hepatitisz C vírus számára.

A legjobb anti-HCV auto (kit 1)
(Automatikus analizátorokhoz)

A legjobb anti-HCV auto (kit 2 / Charoite)

A G és M immunglobulin osztályok immunszorbens kimutatására szolgáló reagensek halmaza a hepatitisz C vírus számára automatikus ELISA analizátorokhoz.

A legjobb anti-HCV (kit 1)

A legjobb anti-HCV (kit 2)

A legjobb anti-HCV (kit 3)

A legjobb anti-HCV (kit 4)

Reagensek készlete a G és M osztályú immunglobulinok immunszorbens kimutatására a hepatitis C vírus számára.

A reagensek készletek immunoenzyme azonosítani osztályok immunglobulinok G és M-fehérjék az egyedi HCV (mag, NS3, NS4, NS5).

A legjobb anti-HCV-megerősítő teszt

A G és M osztályú immunglobulinok jelenlétének hepatitis C vírus jelenlétének immunválaszára vonatkozó reagensek készlete.

HCV AG / AT-IFA-BEST (kit 1)

HCV AG / AT-IFA-BEST (2. készlet)

Reagensek készlete a hepatitis C vírus ellenanyagainak és a HCV mag antigénjének antitestek kimutatására.

Halmazállapotú reagensek a hepatitis C vírus mag-antigénjének immun-enzim kimutatására.

Egy reagenskészlet, amely megerősíti a hepatitis C vírus ellenes antitestek jelenlétét immunválasztó módszerrel.

Laboratóriumi minőségellenőrzési készlet ELISA "Hepatitis C vírus ellenanyagokat tartalmazó szérum".

Anti-HCV szérum kontroll panel

A hepatitis C vírus ellenes antitestjeit tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták. Az anti-HCV vizsgálatokra vonatkozó interlaboratóriumi minőségellenőrzés (validálás).

Anti-HCV standard szérum panel

A hepatitis C vírus ellenes antitestjeit tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták.

Anti-vgs pozitív, mit jelent

A hepatitis C elleni antitestek és mit kell tudni róluk

Amikor különböző idegen részecskék lépnek be a szervezetbe, mint a vírusok, az emberi immunrendszer elkezdi ilyen immunglobulinok nevű anyagokat előállítani. Ezek speciális sejtek, amelyek segítik a szervezetet a vírus elleni küzdelemben. A hepatitis C ellenanyagokat nevezik. Mit tudnék róluk?

Mi a hepatitis C ellenanyaga?

Az ilyen antitesteket speciális módszerrel ELISA-analízissel vagy szkríneléssel azonosítjuk, amelyet annak meghatározására használunk, hogy egy személy hepatitis C vírussal rendelkezik-e. A hepatitis C-hez hasonló antitestek 2 osztályból állnak:

- így ezeket a hepatitis C ellenanyagokat latinul hívják. Ugyanakkor, összességében ezek az antitestek a hepatitis C ellenes antitestek.

Mit jelent a hepatitis C elleni antitestek jelenléte?

Abszolút minden betegnél teszteljük a jelenléte az ilyen markerek azonosítása hogy van-e a hepatitis C. Ha a betegség már folyamatban van az akut vagy krónikus, akkor van antitestek Anti-HCV, ezek az antitestek a hepatitis C megtalálható csak azt követően 4 vagy A betegség 6 hetes megjelenése után.

Vannak olyan esetek, amikor antitestek jelenlétében az Anti-HCV összességét, az embereket szakemberek nélkül helyezték vissza, és önállóan. Ezek az emberek ezt a piacot még a gyógyulásuk után 4-8 év alatt is megtalálják. Még ha a HCV elleni vizsgálat is pozitív, ez még mindig nem elegendő ahhoz, hogy helyesen diagnosztizálhasson. A krónikus hepatitisben a hepatitis C-hez hasonló antitesteket tartósan osztanak fel, és a kezelés pozitív eredményei hosszú ideig fennmaradhatnak a szervezetben, de a titereik ebben az esetben fokozatosan csökkennek.

A hepatitis C elleni antitestek és mit kell tudni róluk?

A legfontosabb dolog az, hogy tudnia kell, hogy az ilyen antitestek nem képesek védekezni a fertőzés kialakulásával szemben, és nem is képesek az immunfertőzés megakadályozására.

Még mindig olyan, mint az anti-HCV spektruma. Ezek szintén antitestek, amelyek specifikusak, alkalmasak a vírus egyéni, strukturális és nem-strukturális fehérjéinek. Meghatározásuk fontos a vírusterhelés, a fertőzés aktivitása, a krónikus fertőzés kockázatának felmérése, valamint az akut vagy krónikus májgyulladás megkülönböztetése és a máj már érintett mennyisége miatt.

Az IgM osztályba tartozó hepatitis c elleni antitestek a vírus antigénjeire vonatkoznak. Ezek meghatározása már a 6., illetve bizonyos esetekben és a fertőzés utáni 4. héten belül megtörténik, mely esetben koncentrációjuk elérheti a maximális értéket. A folyamat befejezése után az IgM szint csökkenni kezd, de a fertőzés újbóli aktiválásakor a szint újra emelkedni fog. Ezért úgy vélik, hogy ezek az ellenanyagok egy krónikus vagy akut fertőzés közvetlen jelei, a reaktiváció jeleivel.

HCV - vérvizsgálat - mi ez?

A múlt század egyik legösszetettebb és legelterjedtebb betegsége a hepatitis C vírusfertőzés. A fejlett országokban a betegség előfordulási gyakorisága 2%, a betegek száma pedig világszerte 500 millió ember. A fertőzést sokkal későbbiekben észlelték, mint elődei: hepatitis A és B - és először "sem A, sem B fertőzés". A kábítószer-függőség növekedésével párhuzamosan minden évben növekszik a fertőzött emberek száma. Mindennek oka a fertőzés útja: a gyógyszer intravénás injekciója.

Továbbá a vírus a szülés során anyáról gyermekre terjed, ha sérült a bőr. Ezért nagyon fontos tudni, hogy a HCV vérvizsgálata - mi az? A terhesség alatt minden egyes jövőbeli anyának át kell adnia. Ez a betegség vezető szerepet tölt be a májbetegek átültetését igénylő okok között.

Hogyan alakul ki a hepatitis C?

A hepatitis C vírussal való fertőzés a következőképpen alakul ki: a beteg vérének be kell kerülnie az egészséges személy vérébe. Az első véráram eltávolítja az egészséges vért tartalmazó vírus részecskéit a májba, majd megkezdődik a reprodukció. Ebben az esetben az emberi máj szenved kétszeresen: egyrészt, a májsejtek károsodnak a tevékenység a vírus, a másik - az emberi test elkezd harcolni: elküldi az immunválaszt, azaz speciális limfociták a sejtek felkérik, hogy elpusztítsa a fertőzött májsejtek.

Felismeri a vírus immunrendszerét a külföldi genetikai anyag tartalma alapján. Mindazok, akik ezt tapasztalták, valamint néhány kötelező beteg, tudják, mit jelent a HCV vérvizsgálata. Hogy ezek mind nagyon fontos mutatók a felismerés és a kezelés színvonalában, mindenki azt fogja mondani, bár egy nap szembesül ezzel a problémával.

Mikor van HCV elemzés?

Amikor a betegnek panasza van a májról, az orvosok rendszerint vérvizsgálatot írnak fel az ilyen betegeknél a HBS és a HCV esetében. Annak meghatározásához, hogy a betegséget a hepatitis C vírus vagy egyéb társbetegségek vérében való jelenléte okozza, HCV vérvizsgálat szükséges. Mi ez az indikátor?

Az elemzés az emberi vérben található antitesteket tárja fel, amelyek a 2 osztály valamelyikéhez tartozhatnak:

  • HCV elleni antitestek. Ők a fő jelző. A fertőzés jelenlétét a szervezetben megerősítik, amikor HCV RNS-t észlelnek. Ezeket az antitesteket a fellendülés szakaszában találják meg, és továbbra is a vérben maradhatnak még egy 1-4 évig. A krónikus hepatitis jelenlétének fő mutatója az anti-HCV növekvő aránya.
  • Az IgA, IgM, IgG szint a vérszérumban. Ezeknek a markereknek az emelkedése májkárosodást jelez, amikor alkoholnak, biliárd cirrózisnak és néhány más betegségnek van kitéve.

Melyek a jelölők?

Az antigén emberi testbe jutásának pillanatától kezdve a HCV vérvizsgálat már a 4-5. Héten is kimutatható. Hogy ez a hepatitis C vírus, amit nem lehet pontosan elmondani. Ezek az adatok szükségesek ahhoz, hogy az orvos döntést hozhasson arról, hogy szükség van-e ilyen betegre vírusellenes terápiára. Különösen, ha a vérben kevesebb mint 750 RNS-másolat van 1 ml vérre, akkor ez minimális vírusos támadást jelez.

A hepatitis C ellenanyagai mindig két csoportba sorolhatók: G vagy M, amelyek adatainak feltétlenül be kell kerülni a HCV vérvizsgálatába. A magyarázat ezeket a paramétereket G (IgG) és M (IgM) immunglobulin-osztályként magyarázza. Az első marker pozitív eredményei még nem jeleznek specifikus diagnózist. Az immunglobulin G-osztály a szervezetben a fertőzés idejétől 5-6 hónapig érte el a maximális értékeket, és ugyanaz marad a krónikus hepatitisz esetén.

Az M-immunglobulinok a fertőzés után már 1-1,5 hónapig meghatározhatók és nagyon gyorsan elérik a maximális koncentrációt. Van még egy mutató - az anti-NS3, amely a magas indikátorokkal egyértelműen kimutatja a testben lévő akut folyamat jelenlétét.

Hogyan adhatunk vér HCV analízishez?

A HCV antitestek jelenlétének megállapítására a laboratóriumban vért adni, nincsenek külön utasítások. Az orvosok egyetlen ajánlása: a kerítést üres gyomoron kell elvégezni. A vizsgált beteg vénájából vért veszünk fel egy eldobható fecskendővel.

A mutatók dekódolása

Tehát az állítólagos beteg HCV vérvizsgálatot végzett. Mi jönnek ezek a pluszok és mínuszok az eredményben? A következő táblázat válaszol erre.

A HCV-vizsgálatok típusai

Vannak kvalitatív és kvantitatív vizsgálatok, amelyek meghatározzák a HCV-t (vérvizsgálat). Mi ez?

Kvantitatív teszteket alkalmaznak, ha az alsó határérték 500 RNS-másolatot tartalmaz ml-enként vagy 200 egység / ml-enként. Határozza meg ezeket a HCV-RNS-teszteket. A méréseket kétszer végzik el, mivel az adatok gyakran eltérőek. A pozitív anti-HCV és kvantitatív vizsgálatok pozitív eredményt adnak az esetek mintegy 75% -ában. Továbbá, egy ilyen eredmény nyerhető majdnem 95% -ánál, akut vagy krónikus hepatitis C-Ezeket a vizsgálatokat diagnosztizálásában használjuk az akut fertőzések, valamint immunhiányos betegeknél, akiknek antitest-teszt negatív eredményt adott, azonban fennáll a gyanú jelenlétére a HCV-fertőzés.

A minőségi vizsgálatok érzékenyebbek, az alsó határ 100 ml / 1 ml-es RNS-másolat. Az akut HCV fertőzés diagnózisának megállapítására a HCV vérvizsgálatának elvégzésére szolgál. A pozitív eredmény már a fertőzést követő első két héten belül észlelhető. A minőségi vizsgálat más, mint hogy hamis vagy hamis negatív eredményt adhat.

HCV vérvizsgálat: mit jelent ez, és mikor írják fel?

Elemzés a vér HCV - az egyik diagnosztikai módszerek A hepatitis C vírus A vizsgálatot van rendelve amikor a tünetek a hepatitis C, emelkedett máj enzimek, valamint a vizsgálatok fenyegetett személyek számára vírusos hepatitis fertőzés. Ez utóbbi esetben, a HCV vérvizsgálatával együtt, vérvizsgálatot kell végezni a HBs Ag.

A HCV (hepatitis C vírus hepatitis C vírus) a flavivirusok családjához tartozik. Ezt először 1988-ban fedezték fel az amerikai biotechnológiai cég Chiron kutatócsoportja. A HCV genomot RNS-molekula képviseli, így a vírus mutációjának sebessége nagyon magas. A hepatitis C vírussal fertőzöttek vírusos részecskéi vannak, amelyek genomja 1-2% -kal eltér. A vírus populációnak ez a tulajdonsága lehetővé teszi, hogy sikeresen reprodukálódjon az emberi immunitás védőreakciói ellenére. A vírus genomjainak különbségei befolyásolhatják a fertőzés folyamatát és a kezelés eredményeit.

Az Egészségügyi Világszervezet szerint eddig a HCV vírusa 150 millió embert fertőzött meg, minden évben a hepatitis C vírus több mint 350 000 beteg halálát okozza.

A hepatitis C átvitelének módszerei

A hepatitis C vírus átvitele a fertőzött vér, mint a kedvezményezett a donor vért vagy szerveket a fertőzött anyáról a csecsemőre, szexuális érintkezés útján, nem-steril fecskendőket az egészségügyi ellátás és eszközök tetoválás és a piercing szalonok.

A betegség akut formában fordulhat elő, több hétig és krónikusan, ami rákot vagy májcirrhosisot okozhat.

A vér HCV-elemzése: mit jelent ez az immunológia szempontjából?

A HCV vérvizsgálata a specifikus IgG és IgM immunglobulinok kimutatásán alapul, ezért ezt a típusú vizsgálatot néha anti-HCV vérvizsgálatnak nevezzük. Az immunglobulinok az immunrendszer specifikus fehérjéi, B-limfocitákkal termelik, külföldi fehérjék kimutatására a testben. Ha a hepatitis C vírussal fertőzött, immunglobulinokat állítanak elő a vírus fehérjéinek, a nukleokapszid magproteinének és a strukturálatlan NS fehérjék bevonására. Az első antitestek megjelenése a vírushoz nem sokkal a fertőzés után 1-3 hónappal kezdődik. A kimutatott antitestek alapján az orvos meghatározhatja a fertőzés fázisát (akut, latens vagy reaktiváció). A hepatitis C-re specifikus antitestek még a betegség utáni tíz év után is kimutathatók, de koncentrációjuk alacsony, és nem képesek megvédeni magukat a vírussal való újbóli fertőzéstől.

Az elemzési eredmények értelmezése

  • Pozitív HCV vérvizsgálat. Mit jelent ez? Ez az eredmény akut vagy krónikus formájú hepatitis C betegséget vagy egy korábban átadott betegséget jelez.
  • A vér negatív HCV-elemzése. Mit jelent ez? A vérben nincs hepatitis C vírus, vagy a fertőzés nemrég történt, ezért nincs ellenanyag. Egyes betegeknél egyáltalán nem termelnek ilyen vírus ellenanyagokat. A betegség kialakulásának e szcenárióját szeronegatívnak nevezik, az esetek 5% -ában fordul elő.
  • A HCV RNS-sel szembeni PCR nem mutatott vírust, korábban HCV-pozitív vizsgálatot végeztek. Mit jelent ez? A HCV vérvizsgálatának eredménye hamis volt, ennek oka néhány fertőzés, daganatos betegség, autoimmun betegség.

HBV antitestet észlelt a vérben, mit jelent ez?

Natalka

Antitestek a hepatitis C vírus (anti-HCV) - hepatitisz-C fertőzés diagnosztikai eljárás vér kimutatására révén egyaránt az IgG osztályba tartozó antitestek és IgM (össz specifikus antitesteket termelt, hogy a fehérjéket a hepatitis C vírus által ELISA-linked immunosorbent assay). Normális esetben, antitestek hepatitis C vírus a vérben nem állnak rendelkezésre.
Az összes antitest kimutatása (HCV) lehetővé teszi a hepatitis C diagnosztizálását 3-6 héten át, és a fertőzés után. Az antitestek ELISA-val történő kimutatása azonban szûrõképes, és nem elegendõ a hepatitis C vírus diagnosztizálására, és az immunoblot módszerrel való megerõsítést igényel.

Julia

A HBV-vel ellentétben, amelynek diagnózisát az antigén és antitest markerek figyelembevételére használják, csak antitesteket kapnak az ELISA által HCV-vel. A HCV antigének, ha bejutnak a vérbe, olyan mennyiségben vannak, amelyek gyakorlatilag nem rögzülnek. HCV antigének kimutathatók májbiopsziákban immunhisztokémiai vizsgálati módszerek alkalmazásával. Ez jelentősen korlátozza a fertőző folyamat folyamatának és aktivitásának értékelését.
Nemrégiben jelezték a HCV antigének vérben történő kimutatásának új megközelítését. Az első lépés az antigének felszabadulása a sejtszerkezetekből szérum lízis útján, a második a specifikus monoklonális antitestekkel rendelkező antigének befogása. Ennek a módszernek a bevezetése a klinikai gyakorlatban lényegesen gazdagítja a HCV diagnózisának és kontrolljának lehetőségét.
Anti-HCV a legtöbb (kivéve a Class M antitestek coreAg) nem jelzi folyamatos virális replikáció, nem jellemzi annak aktivitását megfelelhet a fertőzés után. Figyelembe kell vennünk azt is, hogy a címzettek, akik transzfúziót a fertőzött vér, kimutatható HCV-ellenes donor egyetlen jelzés nem feltétlenül utal a transzfúzió utáni HCV fertőzés. Jelzése anti-HCV elsősorban megoldja a problémát az etiológiai diagnózist, de nem jellemzi a fertőzés lefolyását (akut, krónikus), és nem oldja meg a problémát, illetve az előrejelzés. A krónikus HCV anti-HCV kimutatható a vérben nem csak szabad formában, hanem a keringő immunkomplexek. A tartalma viszonylag magasabb a fejlesztés a HBV / HCV-kevert hepatitis.
Antitestek keletkeznek a HCV szerkezeti és nem strukturális régiójában található vírusfehérjékhez. Ez meghatározza azok egyenlőtlen specifitását, és ennek megfelelően a jelzés különböző diagnosztikai információs értékét. Az anti-HCV szűrésére az ELISA módszert használják, és megerősítő referenciaként az immunoblot-módszer (RIBA). Az ELISA-ban a C-100-3 antitestek jelzésén alapuló első tesztrendszer gyorsan terjedt a klinikai, epidemiológiai gyakorlatban az adományozók kiválasztásában. Azonban lehetővé tette az antitestek befogását a vírus poliprotein mindössze 12% -án, és kizárólag a nem strukturális régióban (NS3, NS4) jellemző zónában. Ezenkívül a mesterséges rekombináns C-100-3 antigén nem teljesen egybeesik a természetes vírusfehérjékkel, ami előre meghatározza gyenge immunogenitását.
A C-fehérje (Ag-mag) ellenanyagait a C-100-3 antigén segítségével egyáltalán nem észleljük. Mindezek előre meghatározották az anti-HCV indikációjának alacsony fajlagosságát és számos hamis negatív eredményt, különösen a krónikus HCV fázisában. Súlyos hypergammaglobulinémia esetén a C-100-3 teszt gyakran hamis pozitív eredményt ad. Ha C-100-3 antitesteket mutatnak ki, különleges nehézségek merülnek fel a krónikus HCV autoimmun hepatitisz, krioglobulinémia és kollagenózisok differenciáldiagnosztikai problémájának megoldásában.
A második generációs tesztrendszerek lehetővé teszik a genom különböző zónáihoz tartozó fehérjék elleni antitesteket, nem csak a nem strukturális, hanem a szerkezeti régiót is. Előnyük elsősorban a nagyfokú specifitás, valamint a HCV antigén spektrumának teljesebb ábrázolása volt. A második generációs tesztrendszerek használata lehetővé tette a donorok kiválasztásának jelentős mértékű javítását és a poszttranszferdús HCV kialakulásának fenyegetését.
Ugyanakkor, és a második generációs tesztrendszerek alkalmazásával, különösen a HCV genotípusok esetében szokatlanok lehetnek a hamis negatív eredmények. A legfejlettebb tesztrendszerek a harmadik generáció.
A vizsgálatok informatíve jelentősen megnövekedett, ha az anti-HCV széles spektrumát átfogóan értékelik, szükségszerűen a dinamikus kontroll körülmények között. Egy ilyen megfigyelési rendszer lehetővé teszi az eltérõ HCV antigének elleni antitestek arányának változását.

Evgeny Stefantsov

A fiúnál kiderül, hogy АТ k HCVAg. És a HB s Ag nem észlelhető, hiba lehet. És mit kell átadni az elemzésnek a pontos diagnózis érdekében? A fiam nem használt gyógyszert 27 évig. A vér Tambovban kétszer kapott HIV-fertőzöttséget és a folyót. stb Inzhavino az orvosi bizottság a hadseregben, majd tegye fel ezt a diagnózist.

Hepatitis Anti HCV-total (polozhitelny) Kérjen tanácsot!

A feleségem és én elvégeztük a tesztet, a tesztek hepatitis vírust mutattak. Anti-HCV-pozitív vagyok. A többi negatív. A feleségnél is. Mennyire veszélyes az, hogy mennyi időt kezelnek? Mennyibe kerül? És mi a helyzet a munkával, lehetséges-e a kezelés ideje alatt dolgozni? Nagyszerűen érzem magam!

R-ig

Anti-HCV jelen akut (ezek korai stádiumban kimutatható, mint 4 - 6 héttel a fertőzés után), és a krónikus hepatitis. Anti-HCV teljes is előfordulnak, betegek hepatitis C, és behajtott a saját. Az ilyen emberek a marker lehet mutatni belül 4-8 év vagy több gyógyulás után. Ezért a pozitív teszt anti-HCV nem elegendő a diagnózis felállítását. A háttérben a krónikus fertőzés teljes antitesteket folyamatosan, és sikeres kezelés után tárolni hosszú ideig (főként anti-HCV core IgG, írtak róluk később), és a címük fokozatosan csökken.

Ekaterina Gustova

A hepatitis C által továbbított vér és a testnedvek parenterálisan, szexuális és transzplacentáris módon. magas kockázatú csoportba, akik intravénás kábítószer-függőség, promiszkuitás, valamint az egészségügyi dolgozók, a betegek igénylő hemodialízis vagy vérátömlesztés kötött. Behatol a szervezetbe, HCV belép a vér makrofágok és a hepatocitákban a máj, ahol replikálódik. Máj károsodás elsősorban az immunrendszer lízis vírus közvetlenül is sejtkárosító hatását. Hasonlóság vírusantigén antigénekkel emberi hisztokompatibilitási rendszer ad okot, hogy az autoimmun ( „rendszer”) reakciók. A program a HCV-fertőzés léphet fel megnyilvánulásai szisztémás autoimmun pajzsmirigygyulladás, Sjögren-szindróma, idiopátiás trombocitopéniás purpura, glomerulonephritis, rheumatoid arthritis és mások. Összehasonlítva más vírusos hepatitis, hepatitis C egy kevésbé fényes klinikai kép gyakran válik krónikus. A 20. - 50% -ában krónikus hepatitisz C-eredmények a fejlesztés a májcirrózis és 1,25 - 2,50% - a fejlődés a hepatocelluláris karcinóma. Nagy gyakorisággal autoimmun szövődmények vannak.
Meg akarlak idegesíteni! A hepatitis C nem gyógyítható, hanem a HIV fertőzés is! Évekig élhet vele! A máj cirrhosis előfordulhat előbb-utóbb. Nézd meg, kivel dolgozol. Nem ismert, hogy a diagnózis hatással lesz-e a munkára. De jobb, ha kollégáid nem mondják ezt a diagnózist

Kostarev konstantin

Érdemes megjegyezni, hogy a hepatitis C-vel fertőzöttek mindössze 20% -a képes magára a fertőzésre megbirkózni. Ezért sajnos a legtöbb esetben a HCV elleni antitestek jelenléte krónikus vírusos hepatitis C-t (CVHC) jelent.

Olga

A fentiek mindegyikéhez hozzáfűzném, hogy az antitestek kimutatása után analízist kell végezni a vírus jelenlétére a vérben. Ezt az elemzést a PCR módszerrel HCV RNS néven nevezik, ha ez pozitív, akkor genotipizálás szükséges, azaz a vírus genotípusának feltárása (ebből függ a kezelés ideje és költsége). Ha negatív, akkor talán a szerencsések 15-20% -áért válik az öngyógyítással. De ebben az esetben figyelnie kell a helyzetet, és évente legalább egyszer meg kell tennie a PCR elemzést.
Ha még mindig hepatitis van, akkor ne idegesítsen. Sikeresen kezelik. A kezelés nehéz, de akkor dolgozhat, ha a munka nem a veszélyes, és különleges koncentrációt igényel. A térben nem érdemes repülni)))

A G és M osztályú immunglobulinok immunszorbens kimutatására szolgáló reagenskészlet a hepatitis C vírus (core, NS3, NS4, NS5) egyedi fehérjéihez (Best anti-HCV spektrum)

Tárolási körülmények A reagensek halmaza a hepatitis C vírus (core, NS3, NS4, NS5) egyes fehérjéihez G és M osztályú immunglobulinok immunszorbens kimutatására (Best anti-HCV spektrum)

Tartsa távol gyermekektől.

Rendelje az orvosi termékeket a gyógyszertárakban:

Hagyd a megjegyzésedet

  • Elsősegélykészlet
  • Online áruház
  • Rólunk
  • Lépjen velünk kapcsolatba
  • A kiadó elérhetőségei:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • E-mail: [email protected]
  • Cím: Oroszország, 123007, Moszkva, ul. 5. Magistralnaya, 12.

Közösségi hálózatokban vagyunk:

© 2000-2018. AZ RUSSIA ® RLS ® GYÓGYSZEREK REGISZTRÁCIÓJA

Minden jog fenntartva.

Az anyagok kereskedelmi felhasználása nem megengedett

Az információ az egészségügyi szakemberek számára szól

A hepatitis C laboratóriumi diagnózisa

MI Mikhailov, Epidemiológiai és Mikrobiológiai Intézet. NF Gamalei RAMS, Moszkva

A "hepatitis C" diagnosztizálásakor a következő legfontosabb tényezőket kell figyelembe venni:

  • a "máj" enzimek aktivitási mutatói;
  • a hepatitis C vírus (HCV) és más hepatotrop vírusok fertőzésének markereinek jelenléte vagy hiánya;
  • epidemiológiai történelem;
  • a beteg klinikai vizsgálatának eredményei. Ezeknek a tényezőknek csak egy átfogó ismertetése lehetővé teszi a betegség magas megbízhatóságú diagnosztizálását. Laboratóriumi munkavállalónak objektív tájékoztatása meghatározó körét virális antigének és antitestek, valamint a HCV-RNS, amely lehetővé teszi az orvos, a munkavállaló a vérátömlesztés szolgáltatások és járványügyi dönteni az előttük álló kihívásokat. Leggyakrabban:
  • A HCV-k azon személyeinek azonosítása, akiket a hepatitis C után csökkenteni kell;
  • az akut és krónikus hepatitis C diagnózisát és differenciálódását;
  • betegség prognózis;
  • kinevezése, értékelése és a terápia hatékonyságának prognózisa;
  • tanulmányozzák a HCV szélességét a populációban és a különböző népességcsoportokban.
    Ugyanakkor a laboratóriumi munkatársak által végzett főbb munkaterületek a következők:
  • a HCV-fertőzés markereinek kimutatására szolgáló legelismertebb módszerek kidolgozása és kiválasztása;
  • a kapott eredmények objektív értékelésére vonatkozó kritériumok meghatározása;
  • laboratóriumi vizsgálatok elvégzéséhez optimális algoritmusok kidolgozása;
  • olyan rendszer bevezetése, amely javítja a HCV-fertőzés markereinek kimutatását.

    Az alapja a laboratóriumi diagnosztikai hepatitis C. HCV szolgálja ismeretek a replikációját, információt a dinamika a megjelenése és eltűnése markerek a fertőzés, valamint a modern immunkémiai és molekuláris biológiai módszerek kimutatására antigének, antitestek és nukleinsavak.

    VIRUS HEPATITIS C. HCV-ben azonosították először 1988-ban, amikor egy csoport kutatók által vezetett M. Houghton és Choo Q.L, alkalmazott új molekulyarnobiologicheskie kutatási módszerek, és a klónozott sekvinirovala vírus genomja [I]. A hepatitisz C vírus részecske gömb alakú, átlagos átmérője körülbelül 50 nm [2,3]. Kísérletek vizuálisan felismerni és szerkezetének tanulmányozására a hepatitis C vírus vállalt felfedezése óta a vírus, de eddig nincs jól dokumentált E vizsgálatok eredményei, esetleg nehézségei miatt a felhalmozási virális részecskék a szükséges mennyiséget.

    VGSedinstvenny tagja a nemzetség Hepacivirus a Flaviviridae család, amely magában foglalja a vírusok, például a vírus bikák hasmenés és sertéspestis (genus Pestivirus) és a sárgaláz vírus, Dang vírus és a GB-vírus: GBV-A, GBV-B és GBV-C / HGV (a Flavivi-rus nemzetség). A hepatitis C vírus szerkezete a következőképpen ábrázolható (1. reakcióvázlat). A nukleokapszid tartalmazza RNS hepatitis C-vírus nukleokapszid tetején bevonva lipidburokkal süllyesztett ott burokfehérjék által kódolt HCV-RNS. A vírus genomját egy pozitív polaritású egyszálú lineáris RNS molekula képviseli, körülbelül 9600 nukleotid hosszúságú. A HCV genom megszervezése hasonló a többi flavivirushoz. Megkülönbözteti két olyan zónát, amelyek strukturális és nem strukturális (funkcionális) fehérjéket kódolnak. A strukturális fehérjéket kódoló gének a vírus genomjának 5'-régiójában helyezkednek el, és nem strukturálisak a 3'-régióban. A gén a HCV egy egyetlen nyitott leolvasási keretet (ORF), egyetlen polipeptid (körülbelül 3000 aminosav), amelyek hatására a celluláris és virális proteázok vágjuk szerkezeti és nem szerkezeti fehérjék.

    Ábra. 1. A HCV szerkezeti elemei

    A szerkezeti fehérjék közé tartoznak a Core, El és E2 által kódolt fehérjék HCV RNS zónákkal. Ez kimutatta, három formáját C-HCV-fehérjék: teljes hosszúságú (p21) molekulatömegű - 21 kD, csonkolt (p19), valamint a formában (p16) kimutatható volt a nukleoluszokban fertőzött hepatocitákban. A felületén a C-protein hordozza különböző erősen konzervált B-sejt-epitóp, amelynek léte rendkívül fontos kimutatására HCV-antitesteknek a laboratóriumi diagnózis hepatitis C.

    A HCV-E1 és E2 RNS-régiói 31 és 70 kD molekulatömegű fehérjéket kódolnak. Ezek a fehérjék számos N-glikozilációs helyet tartalmaznak; Az E1 fehérjében legfeljebb 6 ilyen helyet azonosítottunk, és az E2-11-ben. Egy kis fehérje, p7, az E2 szakaszban találtunk információt, amely nem volt megtalálható a vírusszerkezetben.

    A HCV RNS 3'-végéhez közelebbi régiók kijelölése - mint a vírus nem strukturális fehérjéiről szóló információkat hordozó zónák - azt jelzi, hogy ezek a fehérjék nem a vírusrészecske strukturális összetevői. A nemstrukturális zónában a HCV RNS a következő területeket jelöli ki: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A és NS5B. A HCV RNS nem strukturális zónái által kódolt fehérjék többsége szükséges a vírus replikációjához.

    Összehasonlító elemzése nukleotidszekvenciák izolátumok HCV RNS termelt különböző régióiban a világ, és még a során a betegség azonos betegből származó mutatott alapvető jellemzője a vírus - magas heterogenitást RNS. A helyzet a nagy genetikai variabilitás a HCV-RNS volt az alapja az elmélet magyarázza: a hosszú távú (néha egész életen át tartó) hordozó vírus, gyakori a krónikus betegségek kialakulásában, nehezen lehet megállapítani a hatékony kezelés és vakcinák. A legjelentősebb különbség a HCV RNS-szekvenciák koncentrálódnak az N-terminális része az E2 régiót, amelynek megnevezése - „hipervariábilis régió” (HVR) [4].

    Jelenleg 6 fő genotípus és több mint 100 altípus van a HCV-ben. Genotípusok 1a, 1b, 2a, 2b, 2c és Over véve több mint 90% -a HCV-izolátumok nyert Észak-és Dél-Amerika, Európa, Oroszország, Kína, Japán és Ausztrália / Új-Zéland. [5] A 4., 5. és 6. genotípust Közép- és Dél-Afrikában, Délkelet-Ázsiában rögzítik. Oroszországban és a FÁK országaiban a 16. genotípus előfordulási gyakoriságát (legalább 68,9%) rögzítették [6,7]. Úgy véljük, hogy az 1. genotípussal (különösen az 1c) fertőzött betegeknél a vírus más genotípusával fertőzött betegekhez képest rosszabb a kezelésre.

    Egy betegben a HCV a vírusrészecskék populációjában kering, ahol a genomok 1-2% -kal (kvázi-specificitás) különböznek a fertőzés során felhalmozódott mutációk és / vagy a fertőzés során a páciens testében. Ezek a mutáns formák lehetnek, hogy erősebb vagy replikációját segíthet a vírus kikerülje az immunválaszt, és potenciálisan befolyásolja a kimenetelét egy akut fertőzés, a különbségeket a során a betegség, és a válasz IFN [8].

    AZ ANTI-HCV MEGHATÁROZÁSA. Miután felfedezték a HCV-vírus, és meghatározzák annak szerepét a fejlesztés a transzfúzió utáni hepatitis - „sem A, sem B” a kutatók támadták eljárások kifejlesztésére, amely képes észlelni a HCV és alkalmasak a diagnózis az akut és krónikus hepatitis C Azt találtuk, hogy a HCV-antigének keringeni rendkívül alacsony koncentrációk, és nyilvánvaló, hogy a XX. század végi, a vírusantigének kimutatására használt módszertani szintje nyilvánvalóan nem elegendő.

    1989-ben, a kutatók egy csoportja a cég „Chiron Corporation” irányítása alatt a Q-L.Choo végzett a HCV-RNS klónozása és immunreaktív volt oligopeptidek ellenanyagokkai reagálnak a vérben keringő a krónikus hepatitis „sem A, sem B”. Ezek az oligopeptidek a HCV elleni antitestek kimutatására szolgáló diagnosztikai gyógyszerek alapjává váltak. Ez határozza meg a gyors fejlődést a diagnosztikai termékek fejlesztésében és gyártásában. A fő használt módszer az anti-HCV volt az enzim-kapcsolt immunszorbens vizsgálati eljárás, mint egy módszert, amely megfelel a gyakorlati egészségügyi -te Nagy érzékenység, specifitás és könnyű magatartás.

    Tekintettel arra, hogy a HCV fennáll a vérben a betegek akut és krónikus hepatitis C együtt anti-HCV diagnosztikai termékek összpontosítani fejlesztők koncentrált létrehozására tesztrendszerek antitestek kimutatásához, a lehető legteljesebb hordozók azonosítását a vírus, és a lehető leghamarabb diagnosztizált akut fertőzés. A különböző antigének és antigén determinánsok által kódolt szerkezeti és nem-szerkezeti HCV RNS zónában, a meghatározott irányban a tervezés diagnosztikai készítmények Ez az elrendezés, és oligopeptidek létrehozásához használt őket. A HCV felfedezésének időpontjától három generáció diagnosztikai rendszerei jöttek létre (1. táblázat).

    1. táblázat
    Diagnosztikus gyógyszerek az anti-HCV kimutatására [9]

    Az alkalmazott peptidek,
    a HCV RNS zónái, amelyekben
    kódolva vannak

    % hordozók észlelése
    HCV

    Az első idő
    érzékelés
    anti-HCV-t
    korai sárgaság

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 mag
    C200 NS3 és NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 mag
    C200 NS3 és NS4
    NS3p NS3
    Peptid NS5

    További peptidek, elsősorban a c22-3 (Core) bevezetése a 2. és 3. generációs diagnosztikai gyógyszerek számára lehetővé tette a fő feladat megoldását, vagyis az anti-HCV érzékenységét, specifitását és legfőképpen az észlelhetőségét. A harmadik generációs diagnosztikai görbéknek köszönhetően a HCV-hordozók akár 97% -át is fel lehet ismerni. Ugyanakkor egy határozott vitát az NS5 HCV RNS-régió által kódolt peptid bevezetése indított el egy diagnosztikumba. Egyes kutatók szerint a peptid jelenléte nem alapvető fontosságú a diagnosztikai gyógyszer minőségének javítása szempontjából. [10,11]. Az NS5 ellenes antitesteket azonban a fertőzés korábbi időpontjában lehet kimutatni, ami javítja az akut hepatitis C laboratóriumi diagnózisának minőségét [12].

    Jelenleg a harmadik generációs diagnosztikai készítményeket használják az egész világon, beleértve Oroszországot is. Peptidek alkalmazhatók diagnosztikai készítményekben, amelyeket a rekombináns technológiával (például diagnosztikai cégek: „Diagnosztikai szerek”, Nyizsnyij Novgorod; „vektor”, Novosibirsk; „Roche”; „Abbott” et al.), Vagy szintetikus ( 000 MC "Avicenna", Szentpétervár, "Organon" stb.). A diagnosztika, amelyben mindkét típusú peptidet egyidejűleg használták, a 4. generáció készítményeként kapott megnevezéseket. Jellemzőik szerint ezeknek a gyógyszereknek nincs jelentős különbsége. Az oroszországi Egészségügyi Minisztérium által rendszeresen végzett összehasonlító vizsgálatok a hazai és külföldi gyártók diagnosztikai előkészítésével összehasonlítható érzékenységet mutattak.

    Megállapították, hogy a harmadik generációs diagnosztikai gyógyszerek alkalmazása az anti-HCV kimutatására immunokompetens populációk (például véradók) között 98,8-100% -os becslések szerint. Ugyanakkor az immunszupprimált személyek között, például a veseátültetést követően a csontvelő vagy a HIV-vel fertőzött betegek esetében ez a szám lényegesen alacsonyabb, 50-95% között van [12]. S.George és mtsai. [13] kimutatták, hogy a HIV-fertőzésben szenvedő betegek 8,4% -a hamis negatív eredményt mutat az anti-HCV kimutatásában. Az ilyen betegeknél a megfigyelés folyamán szeropreverziós hatás rögzíthető; pozitív eredmény regisztrálása a szeronegatív anti-HCV periódus után [14].

    Az anti-HCV jelenlétének tanulmányozásának egyik legfontosabb problémája a hamis pozitív eredmények. Megjelenésük a reakciókomponensek nem-specifikus kölcsönhatásának, esetleges keresztreakcióknak és más vírusantigéneknek és sok más tényezőnek tudható be. Az anti-HCV különböző diagnosztikai szerekkel való kimutatásában a hamis pozitív eredmények 10-20% -ot érhetnek el [15,16]. Ezeknek az eredményeknek az emelkedését figyelték meg onkológiai és autoimmun betegségben szenvedő betegek, immunhiányos állapotú és szifiliszes betegek körében [16,17]. A hamis pozitívumok megléte a laboratóriumi dolgozó feladata, hogy megkülönböztesse őket az anti-HCV tényleges kimutatásától. A probléma megoldásához a szérumot kimutatják a HCV RNS vérszérumában. A HCV RNS kimutatásának negatív eredménye azonban nem teszi lehetővé az anti-HCV hamis pozitív detektálásának jelenlétét. Nem szabad elfelejteni, hogy az anti-HCV izoláltan képes eljutni olyan beteg vérében, aki az akut hepatitisz C-ből (10-15%), vagy aki a folyamatos terápia eredményeként megszüntette a HCV RNS-t.

    MEGHATÁROZÁS (KIEGÉSZÍTŐ) VIZSGÁLATOK. A hamis pozitív példányok és a HCV elleni antitesteket ténylegesen tartalmazó minták megkülönböztetéséhez kiegészítő (kiegészítő) teszteket fejlesztettek ki. Leggyakrabban ezeknél a vizsgálatoknál az immunoblot elvet alkalmazzák [például a RIBA-teszt ("Ortho-Clinical Diagnostics"); „LiaTek HCV” (Organon Teknika)], amikor adszorbeált nitrocellulóz membránra formájában egyes csíkok antigének által kódolt különböző zónákban a HCV-RNS. Az anti-HCV kölcsönhatásba lép az adszorbeált antigénekkel az enzim által jelzett antitestekkel az emberi IgG ellen, ezt követően egy szubsztrátkomplexel történő kimutatással. Továbbá immunoblot valamint további vizsgálatokat használni diagnosztikai ágenseket a kimutatására az anti-HCV-specifikus antigének elleni által kódolt különböző zónákban HCV RNS [ „Spectrum 4” ( „ImBio” Nizhni Novgorod; RecombiBest ANTI-HCV-spektrum „- ZAO” vektor Best ", Novoszibirszk, IFA-Anti-NSO-Spectrum, NGO" Diagnosztikai rendszerek ", Nizhny Novgorod].

    Tervezése és megvalósítása Ezen tesztek bevezetésével párhuzamosan a szűrővizsgálatok az anti-HCV, megismételve a elve bővülő spektrumának alkalmazott peptideket egymást követő generációja diagnosztikai szerek. Így a diagnosztikai RIBA-III eltér az előző generációtól az NS5 zóna által kódolt peptid hozzáadásával. Alapelvek, hogy erősítse meg a pozitív eredménye, hogy anti-HCV elsősorban a következők: a lehetőségét (bizonyos esetekben) a pontosabb eredmények az enzimatikus reakció reagáltatva az egyedi peptideket, valamint felhasználásra szórt spektrumú diagnosztikum peptidek, amelyek nem alkalmazhatók szkrínelő vizsgálatokban. Csak az új peptidek bevezetése teszi lehetővé a megerősítő vizsgálatok diagnosztikai értékének növelését.

    A kapott eredmények értelmezése például a RIBA-III-ban végzett vizsgálatban három lehetséges választ ad: pozitív, negatív és határozatlan eredményt. Ez utóbbit egyértelmű bizonyítékok hiányában adják ki (a diagnosztikai készlethez mellékelt utasításoknak megfelelően), ami lehetővé teszi a vizsgálati mintában a HCV antibiotikum jelenlétének vagy hiányának egyértelmű megítélését. A rögzített válaszok spektrumának korrelációja a megerősítő vizsgálatok során a betegek azon csoportjainak jellemzőitől függ, akikben az anti-HCV-t elsősorban kimutatták [18]. A J.M. Pawlotsky és mtsai. [19], az eredmények esetek felében, "homályosnak" értelmezve, HCV RNS kimutatható. Véleményünk szerint a legitimitását a válasz - „nem definiált eredmény kimutatását anti-HCV”, amelyet a laboratóriumi személyzet orvos, nyilvánvaló, nem csak a megerősítő vizsgálat és rutinvizsgálatok jelenlétére anti-HCV. A kapott eredmények ilyen értelmezésének szükségessége tükrözi a hepatitis C laboratóriumi diagnosztikájának jelenlegi állapotát.

    AZ IgM ANTI-HCV MEGHATÁROZÁSA. Jelenleg a cégek IgM anti-HCV kimutatására diagnosztikai készleteket hoztak létre és gyártanak: "Vector Best"; "Diagnosztikai rendszerek"; "Imbio", "Abbott" stb. A diagnosztikai készletek tervezési szakaszában ELISA készleteket fejlesztettek ki a HCV RNS különböző régiói által kódolt peptidek alapján [20]. A választás megállt a HCV RNS magrégiója által kódolt peptiden és az IgM antitestek kimutatására. Az anti-HCV (IgG) kimutatásához hasonlóan hamis pozitív eredményeket is fel lehet jegyezni az IgM anti-HCV vizsgálatára. Stevensona D.L. et al. [21] a krónikus hepatitis C-ben szenvedő betegek legfeljebb 70% -aa IgM anti-HCV jelenlétében egyidejűleg emelkedett rheumatoid faktor volt, ami hozzájárul a hamis pozitív eredmények megjelenéséhez. Ugyanakkor Pawlotsky J. M. szerint a reumatoid faktor jelenléte nem befolyásolja az IgM anti-HCV kimutatásának minőségét [22].

    A HCV ANTIGÉNEK MEGHATÁROZÁSA. A HCV antigének meghatározásának lehetősége a kutatók figyelmét a vírus felfedezését követően azonnal felkeltette. Az elméleti lehetősége tesztelés őket igazolták Krawczynski K. és munkatársai [23] megállapította, hogy immunhisztokémiai májszövetben a HCV-antigének, specifikusságát mutatja immunfluoreszcencia izzás. A használata poli- és monoklonális antitestek a különböző HCV-antigének létrehozta jelenlétében HCV mag Ag, kódolt antigének NS3 és NS4 zónák HCV RNS a sejtmagban és a citoplazmában a hepatociták, 60-90% a krónikus HS [24].Azonban, további vizsgálatok kimutatták, hogy a HCV antigénjei a májsejtek kevesebb mint 5% -ában mutathatók ki.

    Az első diagnosztikai vizsgálati rendszerek ( „Ortho ellenanyag a magantigénjének (rágcsáló monoklonális) EL1SA Test System” és „Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai”) kimutatására HCVantigén jelent meg a piacon az immunológiai termékek 1999-ben. A kimutatás céljából Core HCV antigént választottunk ki, amelyet monoklonális antitestek alapján tervezett szilárd fázisú ELISA-változat alkalmazásával határoztunk meg. Ezeknek a vizsgálatoknak az első vizsgálata meghatározta a magas érzékenységet, specifitást és alkalmazási ígéretet, elsősorban a vérátömlesztési szolgáltatásban [25,26]. székhelye:

  • a központi Ag HCV szérumban vagy plazmában történő meghatározásának lehetősége;
  • a Core Ag HCV kimutatásának specifitása;
  • a keringő antigénnek a vérben szeronegatív anti-HCV-ben szenvedő személyek jelenléte;
  • gyakori (90,3%) Core Ag HCV detektálás szérum jelenlétében anti-HCV és HCV RNS [25];
  • közvetlen korreláció a HCV RNS koncentrációja és a Core Ag HCV kimutatása között [25];
  • csökkenti az "ablak" fázisát - a fertőzés pillanatától az anti-HCV kimutatásának első pozitív eredményéig. Meghatároztuk, hogy a HCV Core Ag az esetek 83% -ában (n = 24) a HCV RNS első kimutatása után [26] és hosszú (átlagosan 26 nap) az anti-HCV megjelenése előtt [27] kimutatható.

    A HCV RNS kimutatásának módszerei. A hepatitis C laboratóriumi diagnosztikájának modern stádiuma a HCV RNS kimutatására szolgáló molekuláris biológiai eljárások széles körű alkalmazásának kezdeti szakaszaként jellemezhető. A nukleinsavak kimutatására szolgáló eljárások túlnyomó többségét vizsgálták a HCV RNS kimutatására. A diagnosztikai készítmények felépítésének és a vírusos DNS vagy RNS kimutatására vonatkozó elvek számos, a hazai [28] és a külföldi kiadványokban [29] közzétett irodalmi áttekintéseknek szentelték. Mindezek a módszerek két csoportra oszthatók, amelyek a hibridizáció elvein alapulnak, a nukleinsav kiválasztott régiójának amplifikációja nélkül, vagy amplifikációjukkal, ami jelentősen növeli a módszer felbontóképességét.

    Hibridizációs módszer a jelölt hibridizációs próbák kombinációján alapulnak (genetikailag módosított vagy szintetikus molekuláris szerkezetek, amelyek a kiválasztott RNS helyeket komplementer nukleotidszekvenciákat tartalmazzák). Az eredményeket figyelembe veszik a jelzett jel intenzitásából a képződött összetétel összetételében.

    A hepatitis C-ben a HCV RNS detektálására szolgáló módszer elsősorban a hepatocitákban történő azonosításra vonatkozott, az in situ hibidizációnak nevezett vizsgálatokban [30]. A HCV RNS közvetlen kimutatása a szövetekben lehetővé tette a hepatitis C-ben lévő mononukleáris sejtekben, nyálmirigy-sejtekben és más szövetekben való kimutatását [31, 32].

    A HCV RNS detektálására használt hibridizációs módszer lehetővé teszi a HCV RNS negatív (replikatív) láncainak kimutatását, ami a vírus aktív replikációját jelzi [33].

    A polimeráz láncreakció módszere - jelenleg a legelterjedtebb módszertani módszer, amely a HCV RNS szinte minden molekuláris biológiai módszerének alapja. Ezenkívül a HCV RNS meghatározása mind minőségi, mind kvantitatív változatban lehetséges, ami különösen fontos az alkalmazott terápia hatékonyságának kijelölésére, ellenőrzésére és értékelésére.

    A módszer fő változatai a következőképpen azonosíthatók:

  • polimeráz láncreakció (PCR);
  • ligáz láncreakció;
  • NASBA;
  • TMA (transzkripciós amplifikált amplifikációs reakció, transzkripciós mediált amplifikáció).

    Polimeráz láncreakció - széles körben használják mind Oroszországban, mind külföldön a HCV RNS detektálására. Ez egy többciklusú folyamaton alapul, amely a nukleinsav természetes replikációjára emlékeztet, minden egymást követő szakaszból álló ciklusban.

    A vizsgált anyagból (szérum vagy plazma vér, máj biopszia) a HCV RNS felszabadul. Tekintettel arra, hogy a HCV nukleinsavját RNS képviseli, és az amplifikációhoz cDNS-molekulát igényel az enzim-reverz transzkriptáz révén, a HCV-cDNS egyszálú molekulái képződnek. A következő lépésben egy úgynevezett "cDNS-t" adunk hozzá a HCV cDNS egyes láncainak adott szakaszához. Primers - rövid oligonukleotidok, kiegészítve az ismert nukleotidszekvenciákkal. A különböző HCV-izolátumok genomjának 5'UTR régiójának primer struktúrájának összehasonlítása feltárta jelentéktelen variabilitását (genotípusok, nukleotid homológia - 92-98%, és a 98-99% genotípuson belül). Ez azt a célt szolgálta, hogy a HCV RNS ezen zónájából kiválasszuk a primereket, és alkalmazzuk hazánkban és külföldön gyártott diagnosztikai tesztrendszerekben.

    Továbbá a DNS-függő DNS-polimeráz enzim segítségével új DNS szakaszokat állítanak elő. Jelenleg, a forrása ennek az enzimnek a leggyakrabban használt thermophilus termus baktériumok (Tth-polimeráz) vagy az thermophilus aquaticus (Taq-polimeráz). A termikus stabilitás jelenlétében mangán és magnézium-ionokat, az enzim lehet egyszerre szintéziséhez használt komplementer molekulák egyszálú HCV cDNS és amplifikációs kiválasztott részeinek cDNS. Egyetlen reakcióciklus végső szakaszában a DNS-szintézis új komplex HCV cDNS-láncokat szintetizál. Többszörös ismétlések a reakció ciklus vezet a felhalmozódása a HCV cDNS-fragmensek, melyek regisztrálva lehetnek útján poliakrilamid gél-elektroforézist követő vizuális észlelését, vagy egy hibridizációs oligonukleotid próbákkal, ami növeli az érzékenységet és a specificitást a diagnosztikai termékek használt. Az enzimekkel jelölt primerek alkalmazása lehetővé teszi a PCR eredményeinek rögzítését enzim immunvizsgálattal.

    A HCV RNS kimutatására szolgáló diagnosztikai rendszereket tervező kutatók számára állandó cél az érzékenység és a specifikusság növelése. Ezt a célt a PCR-változat szolgáltatja, amelyet "beágyazott PCR" -nek neveznek [34]. Ennek a módszernek a "klasszikus" jellegzetessége, hogy két pár láncindítót egyidejűleg használnak, amelyek közül az egyik komplementer módon kapcsolódik az amplifikáció első fordulója után nyert amplikon belső régiójához. Ugyanakkor úgy vélik, hogy a PCR ezen változata nagyobb a minták szennyeződésének kockázatával, ami hamis pozitív eredményhez vezethet [35].

    A HCV RNS meghatározásának akut igénye és a PCR-diagnosztika nagy érzékenységű és specifikus diagnosztikai készleteinek nagyléptékű előállításához kapcsolódó komplexitás meghatározta a tudományos laboratóriumokban gyártott gyógyszerek széles körű alkalmazását. A tesztrendszerek összehasonlítása, úgynevezett "házon belüli" tesztek kimutatták az érzékenység és a specificitás nagy változékonyságát, valamint az eredmények laboratóriumok és diagnosztikai gyógyszerek közötti reprodukálhatóságának hiányát. Például a HCV RNS kimutatásának (1996) "külső" minőségellenőrzésének első európai fordulójában 136 laboratóriumból csak 22 (16%) tudta megfelelően meghatározni a vírus RNS jelenlétét vagy hiányát a kapott kontrollmintákban [36]. Hasonló eredményt tapasztaltunk hazánkban egy hasonló munkában a Szövetségi Külső Minőségellenőrzési Rendszer (2001) keretében, amikor a 14 résztvevő laboratórium közül csak 3 (21,4%) képes megfelelően megoldani a feladatot [37].

    A HCV RNS kimutatásának hamis-negatív és hamis pozitív eredményei különbözőek. Hamis negatív eredményekkel:
    - a HCV RNS elvesztése vagy megsemmisítése a klinikai anyag reagálására;
    - a PCR különböző összetevőit befolyásoló inhibitorok mintájában. Ezeket az inhibitorokat különböző kémiai vagy fehérje-anyagok képviselik. Például: a reverz transzkriptáz inhibitorok jelenléte a spermium folyadékban nem engedte meg a HCV RNS kimutatását, és beszélt a hepatitis C-átvitel szexuális útjának megvalósításának lehetőségéről [38]; a paprika jelenléte [39]; magas vércukorszint a vérszérumban [40];
    - a klinikai anyagok tárolásának és szállításának hőviszonyainak be nem tartása. Hamis pozitív eredményekkel:
    - a minták közötti szennyeződés (minták feldolgozása és / vagy a reakciókeverékkel való munka során), beleértve a pozitív kontrollminta szennyezettségét;
    - az amplifikációt megelőző termékek által okozott szennyeződés (amplikonok), amelyek aeroszolokon vagy laboratóriumi berendezéseken szennyezhetik a vizsgálati mintákat és oldatokat.

    A PCR-diagnosztika tömeges bevezetése a HCV RNS definíciójával a gyakorlati egészségügyi ellátás szerveit helyezte a laboratóriumi vizsgálatok új szintjére történő áttérés feladatának. Az izolált zónák izolálása a PCR főbb stádiumaihoz (mintaelőkészítés, amplifikáció, az eredmények figyelembevétele céljából); Különálló készlet a laboratóriumi ruhák, automatikus pipetták reakciójának minden egyes szakaszára; a standard diagnosztikai készletek létezése, és ami a legfontosabb, a magasan képzett laboratóriumi személyzet rendelkezésre állása lehetővé teszi a hamis eredmények szintjének csökkentését.

    Az első standardizált készlet a HCV RNS meghatározására ("Amplicor ™ HCV", "Roche Diagnostic Systems") 1993-ban készült. Az évek során kialakultak a HCV RNS kimutatására szolgáló készletek, melyek fő célja az volt, hogy növeljék érzékenységüket és specifikusságukat. Amikor tervezése „Amplicor TM HCV” használt számos eredeti módszertani technikák lehetővé teszik, hogy kimutatására vagy meghaladja a 100-másolat HCV RNS per ml., Valamint a kezelni lehetséges esetek a szennyeződés a minták és alkalmazott oldatok a beállított. Használata enzim - amperazy és deziksiuridintrifosfata (dUTP) lehetővé teszi, hogy elpusztítsa az első amplifikációs ciklus előző aplikony amely szennyeződés előfordulhat. Az amperáz megsemmisítése az első amplifikációs ciklus végén (+ 55 ° C-on) nem teszi lehetővé az enzimnek, hogy elpusztítsa a célként kiválasztott amplikont. Fontos innováció volt a belső ellenőrzés bevezetése. A jelentése ennek az innováció áll a bevezetőben a minta minden szekvencia ilyen amplifikált HCV RNS rész, amely ezt követően detektáltuk megfelelő primerek az amplifikációs reakciót ugyanabban az üzemmódban. A pozitív reakció hiánya a belső kontroll kimutatásában hamis negatív reakciót mutat a HCV RNS jelenlétére a mintában. A következő generáció diagnosztikája volt a "HCV Amplicor 2.0" nevű gyógyszer, 50-molekulák HCV-RNS határérzékenységét alkalmazva.

    A HCV RNS Roche-készletekkel történő kimutatására szolgáló rendszer nem tekinthető elkülönítve a műszerezettől, ami meghatározza a tesztek magas minőségét. A módszer fejlesztői a reakció minden szakaszát teljesen automatizálják. A megtestesítője ez a gondolat egy olyan rendszer volt a „COBASAmpliPrepTM”, amely lehetővé teszi, hogy teljes mértékben automatizálható a kivonására HCV RNS, amplifikációs és detekciós, így csökkenti a hamis pozitív és hamis negatív, miközben a nagy érzékenység és specificitás [41].

    Az RNS BGC (LCR) kimutatásának ligázláncreakciója. Az eljárás a "DNS-függő DNS-ligáz" enzim azon képességén alapul, hogy ATP és Mg 2+ ionok jelenlétében térhálósítanak (ligálják) a foszfo-diészter kötést. A HCV RNS kimutatásához használt "klasszikus" PCR-hez hasonlóan az LCR első szakasza a reverz transzkripció HCV cDNS előállításához. Ezenkívül a DNS-ligáz két pár láncindítót (az 5 'kódolatlan HCV RNS-régióhoz komplementer) köt össze, amelyeket tovább erősítünk. Az LCR-amplifikációs termékek kimutatását az antigén-antitest-reakció figyelembevételével végezzük. Mindkét láncindítót különböző hapténnel jelöltük. Az első ilyen vegyületet a mikrorészecskékre adszorbeált antitestek rögzítik. A mosási eljárás után egy fluoreszcens címkével jelzett második pár antitest alkalmazásával szelektíven kölcsönhatásba lépnek az amplifikációs termék hapténjével, majd egy szubsztrát reakcióval és figyelembe véve a fluorimétert.

    Ennek a módszernek az érzékenysége kb. 200 példányban HCV RNS ml-ben, ami lehetővé teszi különböző klinikai és diagnosztikai problémák megoldását [42]. Jelenleg az LCR-en alapuló HCV RNS kimutatására szolgáló diagnosztikai készleteket az Abbott gyártja.

    Nucleic Acids Seaquencence Amplification - NASBA -a HCV RNS detektálási módja három enzim egyidejű hatásán alapul: a madár myeloblastoma vírus, az RNSsease H és az RNS polimeráz T7 reverz transzkriptáz [43]. Az RT-PCR-rel ellentétben a HCV RNS reverz transzkripcióját az első szakaszban nem végezzük. A felhasznált enzimek segítségével a HCV cDNS-hely több mint 10 (9) példányát 90 percen belül meg lehet szerezni [44]. A reakciót alacsony hőmérsékleten (+41 ° C) nagyban leegyszerűsíti, és lehetővé teszi a magas hőmérsékleten ciklikus változásokat eredményező berendezés feladását. A reakció eredményeit az elektrokemilumineszcencia figyelembe veszi. Annak ellenére, hogy a NASBA érzékenysége közel áll az RT PCR-hez, a módszer nem széles körben alkalmazható a HCV RNS kimutatására. Jelenleg a NASBA és a "Real-time RT PCR" elveit ötvöző módszer egyik változata fejlesztés alatt áll.

    A transzkripciós mediált amplifikáció (TMA) eltér a PCR-től és az LCR-től, elsősorban abban az értelemben, hogy a HCV RNS-fragmensek közvetlenül amplifikálódnak, nem pedig a HCV-cDNS-t. A reakció kezdeti szakaszában az 1. számú primer a HCV RNS-hez kapcsolódik, és a célmolekula, a cDNS egy másolatát egy enzim (reverz transzkriptáz) segítségével szintetizáljuk. A reverz transzkriptáz, amely szintén rendelkezik RNáz-H aktivitásával, elpusztítja a vírus RNS-t az RNS-cDNS hibridben. Ezután egy második láncindítót kapcsolunk a cDNS-molekulához, amelyet a kettős szálú DNS reverz transzkriptázzal való befejezése követ. Egy másik enzim alkalmazásával az RNS-polimeráz, a cDNS-sel végzett RNS-transzkripció előfordul, amely a HCV RNS amplikonjának 100-1000 példányát eredményezi egyetlen reakcióciklusban. A 2. számú primert ezekhez az RNS-aplikonokhoz kapcsolják további cDNS-másolatok szintézisével és az RNS-molekula elpusztításával. Az 1. számú primer hozzáadását a cDNS-hez, majd a kettős szálú DNS befejezése okozza a következő amplifikációs ciklust. A reakció eredményeit figyelembe veszik a lumenométeren, mivel a képződött RNS-amplikonok specifikusan kölcsönhatásba lépnek a kemilumino-forrással jelzett DNS-próbákkal.

    A TMA módszer előnyei a HCV RNS kimutatásakor:

  • reakció alacsonyabb hőmérsékleten a PCR-hez viszonyítva;
  • nagyobb számú amplikon képződését egyetlen reakcióciklusban, ami csökkenti a végeredmény eléréséhez szükséges időt (30-40 perc), és növeli a reakció érzékenységét (50 kópia / ml) [45].
  • csökkentve a szennyeződés kockázatát, mivel az RNS kevésbé stabil, mint a DNS.

    A HCV RNS TMA-val és más módszerekkel történő kimutatására vonatkozó összehasonlító tanulmányok kimutatták az eredmények nagyfokú koincidenciáját [45].

    A hibridizáció és amplifikáció elveinek kombinációja a HCV RNS detektálására szolgáló módszer alapját képezi, amelyet a "A hibridizációs módszer elágazó próbák vagy elágazó DNS-vizsgálat (bDNS) alkalmazásával, [46]. A PCR-vel ellentétben ebben a tesztben az amplifikáció nem magában foglalja a HCV cDNS molekuláit, hanem a jelet. A reakciót 96 lyukú lemezeken, ahol a adszorbeált töredékei HCV RNS 5 „nem transzlálódó szakasz és a mag-gént a HCV-RNS. Mivel a következő kötési egy szintetikus DNS-molekula elágazó láncú, és hibridizációs próbával, alkalikus foszfatázzal jelzett erősítő és az azt követő enzimatikus reakciót úgy érjük el egy meredek emelkedése a vett jel. Jelenleg diagnosticums harmadik generációs diagnosztikai piacon (Bayer 3,0 Hepati-tis C vírus RNS mennyiségi meghatározást Brna), amelynek érzékenységet, hogy azonosítsa 520 NE / ml (2500 másolat HCV RNS).

    A HCV RNS MENNYISÉGI FELTÉTELE. A PCR mennyiségi változatát alkalmazzuk a HCV RNS-koncentráció becsléséhez. Kezdetben, a koncentráció a HCV RNS próbálta meg jellemezni ordinális értékek, mint például a „+”, „++”, stb, vizuálisan fényvisszaverő sávok intenzitása alapján elektroforézissel nyert amplifikációs termékek, vagy határhígításos, azaz, a jelenléte pozitív eredményt a végső titrálási pont. Nehézségek szabványosítani az összes PCR lépést nem teszik lehetővé, hogy objektíven értékelni a koncentráció a HCV RNS, ami jelentős hibákat az eredmények értelmezését.

    Jelenleg, a kutatási eredmények mennyiségi kifejezésekkel: a példányszámot a HCV RNS tartalmazott 1 ml, abszolút értelemben, vagy logarifmeticheskom (log 10).. Azon a tényen alapul, hogy a koncentráció a HCV RNS kimutatható tükrözi vírusrészecskék száma, ez a szám nevezzük „vírus ekvivalens (ekv)”, azzal a kiegészítéssel, előtag k (kilo ezer) vagy M (ppm). A vírusrészecskék számának egy másik módja a súlyegyenértékük. Például grammokban vagy pikogramokban (1 pg körülbelül 1 millió eq). Az alkalmazott mennyiségek sokfélesége megnehezíti a különböző laboratóriumok eredményeinek értelmezését. Ezért a WHO szakértői bizottság Biological Standardization tette „egy nemzetközi referencia anyag” tartalmazó HCV-RNS (liofilnovysushennaya vérszérum tartalmazó HCV RNS genotípus 1), amelynek koncentrációja van kifejezve nemzetközi egység (NE / ml) [47]. Különleges tényezők lehetővé teszik számunkra, hogy a kapott koncentrációértékeket nemzetközi egységekre újraszámoljuk.

    A HCV RNS koncentrációjának meghatározására szinte az összes PCR-variáns alkalmazható. Ugyanakkor számos speciális követelményt ismertetnek a diagnosztikai gyógyszerekre, amelyek közül a legfontosabb az eredmények szigorú linearitása, azaz az észlelt reakció jelének növekedése a HCV RNS koncentrációjának növekedésével a vizsgálati mintában. A különböző standard HCV RNS-tartalmú belső szabványok használatával számos módszertani hiba elkerülhető, amelyek befolyásolhatják a reakció végeredményét [28]. Érzékenység alkalmazott diagnosztikai (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNS mennyiségi esszé) képes felismerni a HCV-RNS kezdve a 50 kópia per ml [48,49], ami különösen fontos, hogy megjósolni a hatékonyságát antivirális terápia választott.

    PCR valós időben ("Real-time RT PCR") -amely a HCV RNS kimutatására szolgáló kvantitatív módszer egyik legígéretesebb lehetősége. A módszert és a hardvert közösen fejlesztik a Roche és Percin Elmer szakemberei. A módszer elve a cDNS-szekvenciáknak az 5 '---- 3' irányban történő hidrolizálására alkalmas. A reakcióban egy speciális szondát használnak, két fluoreszcens színezékkel jelölt, közeli abszorpcióval és fluoreszcencia maximalitással. Amplifikációs termékek jelenlétében a Tag-polimeráz lehasítja a szondát, ami megakadályozza az energia egyik festékmolekulából a másikba történő átvitelét, és ezáltal megakadályozza a kvantum fény kibocsátását. Egy speciális eszköz figyelembe veszi a reakció minden szakaszában a fluoreszcencia kinetikájának reakcióját és matematikai modellezését, ami lehetővé teszi a HCV RNS kezdeti koncentrációjának megszerzését.

    A "valós idejű PCR" megkülönböztető jellemzője a HCV RNS jelenlétére vonatkozó információ megszerzésének lehetősége közvetlenül a reakciófolyamatban, amely lehetővé teszi az elemzési idő csökkentését a magas érzékenységgel és a kapott eredmények linearitásával kombinálva [50]. Tatiana Yashina és a szerzők szerint ez a módszer lehetővé teszi a 200 példányban HCV RNS kimutatását ml-ben. [51].

    A genotipizáló RNS VHC módszerei. A HCV-nek egy adott genotípusra és altípushoz való kötődésének meghatározása nem csupán pusztán tudományos, hanem gyakorlati kérdések megoldását is feltárta. Például: a fertőzés forrása a hepatitis C-járványok során, vagy az alkalmazott terápia hatékonyságának előrejelzése.

    A HCV genotipizálás "arany standardja" a HCV RNS primer struktúrájának közvetlen meghatározása az ezt követő filogenetikai analízissel [52], ami lehetővé teszi a vírus izolátumának egyértelmű jellemzését. Ezt az információt az alábbi szekvenálási lehetőségek segítségével szerezheti be:

  • közvetlen;
  • standard klónozás alapján;
  • a PCR reakció termékeinek szekvenálása (korlátozott szekvenálás).
    Annak ellenére, hogy az eredmények pontosságának, a módszer a direkt szekvenálás nem használják az orvosi gyakorlatban, mert a technikai nehézségek a tanulmány és a magas költségek a munkát. Azonban a rendelkezésre álló információt elsődleges szerkezetének RNS HCV genotipizáló referenciamódszer, és a jelenléte a készülékek az automatikus sekvinirovaniya egyszerűsíti a készítmény eredményeket.

    Jelenleg a legtöbb esetben a HCV RNS genotipizálásához PCR-t használó típus-specifikus primerekkel kapcsolatos módszereket alkalmaznak. A HCV RNS első genotipizálását N. Okamoto és munkatársai végezték 1992-ben RT-PCR-vel [53], amely két amplifikációs lépést tartalmaz. Az elsőt a HCV minden genotípusának univerzális primerjeivel végeztük, a második típus-specifikus láncindítók keverékével, hogy különböző hosszúságú specifikus amplifikációs termékeket kapjunk. Egy adott genotípus jelenlétét az amplifikált termék nagysága alapján határoztuk meg. Láncindítóként írja be a specifikus próbákat, amelyekről az RNKVS 5'UTR, Core vagy NS5 régióiban található információ található [54].

    Hibridizációja az amplifikált termékek génspecifikus próbákat adszorbeált (az 5 „nem transzlálódó régiót a HCV RNS), adszorbeált nitrocellulóz membránra, fekszik alapján a teszt - jelölt»INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS«[55]. Kezdetben a teszt segítségével lehetett megadni a genotípusokat: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3; 4. és 5.a. Ezt követően a teszt-rendszer 2. generációs „INNO-LiPA HCV II, Innogenetics” lehetővé teszi, hogy megkülönböztessék az összes genotípus 6 és a további 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-H; 6a és 10a. [56]

    A HCV genotipizálás módszertani arzenálja nem korlátozódik a fenti módszerekre, és számos módszert foglal magában:

  • genotipizálás az amplifikált termékek (RFLP) restrikciós profiljának elemzése alapján. A HCV RNS-fragmensek (5'UTR-régió vagy NS5 HCV RNS-régió) amplifikációs termékeit restrikciós enzimekkel emésztjük. A kialakult fragmensek hossza változik, attól függően, hogy a restrikciós helyek melyikben hasadnak. Az elektroforézis eredménye és összehasonlítása lehetővé teszi a HCV genotípus azonosítását a vizsgálati mintában [57]. A genotipizálás eredményeinek összehasonlítása a PCR-RFLP módszerrel, a szekvenálási adatokkal, az eredmények 95% -os magas koincidenciáját mutatta [58].
  • genotipizálás az SSCP módszer alapján (az egyszálú DNS-fragmensek konformációs polimorfizmusának felmérése). A vizsgálat tárgyává választották a HCV RNS 5'-nem transzlatált régióját, amelynek minimális számú nukleotidváltozata különbözteti meg a genotípusokat egymástól. Ez a tény meghatározza a közös láncindítók alkalmazásának lehetőségét a genotipizáláshoz [59].

    SEROTYPING Anti-HCV Kutatási tette lehetővé köszönhetően P.Simmonds és munkatársai, meghatározzák a epitópok ellen irányuló ellenanyagok genotipspetsifichnym mely információkat kódolt NS4 HCV RNS zóna [60]. A diagnosztikum ELISA alapján szerkesztett szintetikus peptidek, képes megkülönböztetni a hepatitis C, a vírusok által okozott 1, 2 és 3-as genotípus (89% -os egyezés az eredménnyel genotipizálás). Fejlesztési testsistem szintetikus és rekombináns antigének által kódolt NS4 és a mag zónák HCV RNS fokozott a listán tipizálható vírus variánsok, és a bíró jelenléte altípusok (1a, lb, 2a, 2b, Over, és 4a) [61,62]. Jelenleg a kereskedelmi forgalomba a diagnosztikai készítmények szerotipizálásához a kiviteli alaknál a spot ELISA - „NA Mureh 1-6 szerotipizálása Assay, Murex Diagnostics”, és a kiviteli alaknál „immunoblot” - RIBA HCV szerotipizálása Assay, Chiron Diagnostics. Összehasonlítható eredményeket adatok szerotipizálása és genotipizálására HCV RNS bizonyították magas szintű az egyezés, elérve a 95% [62].

    Az anti-HCV serotipizálása a HCV RNS genotipizálásához képest olyan előnyökkel jár, mint a reakció egyszerűsége és alacsonyabb költség. Ugyanakkor ez a módszer semmi esetre sem helyettesítheti a genotipizációt. Az anti-HCV-szerotipizálás eredményei bizonyítják az anti-HCV típusát a jelenlegi vagy korábban továbbított fertőzésben. Bizonyos esetekben (leggyakrabban hemofíliában szenvedő betegeknél) különböző altípusú anti-HCV szimultán detektálását jegyzik fel, ami többféle fertőzést jelenthet a HCV különböző altípusai és genotípusai miatt [63]. Ráadásul a hepatitis C-ben szenvedő betegeknél a kimondott immunhiányos állapot hátterében az RNS lehet az egyetlen marker, ami lehetetlenné teszi a szerotipizálás elvégzését.

    A HCV-INFEKCIÓ SZEMÉLYES MARKEROLAJÁNAK VIZSGÁLATA EREDMÉNYEINEK MEGJELENÍTÉSE ÉS MEGERŐSÍTÉSE. A széles szerológiai markerek jelenlegi vagy korábbi HCV fertőzés, valamint a modern módszertani keret Sok probléma megoldható a laboratóriumi diagnosztikai és megelőzése hepatitis C 2. táblázat mutatja a szám szerológiai markerek a HCV-fertőzés és a legfontosabb területei az tesztelés.

    2. táblázat
    A jelenlegi vagy korábbi HCV fertőzés markereinek diagnosztikai jelentősége

    árnyékolás
    a szolgáltatásban
    vér

    megerősített
    KIJELENTÉST
    eredmény
    + anti-HCV

    A hepatitis C laboratóriumi diagnosztikájának egyik fő feladata a krónikus hepatitis C akut krónikus diagnózisát és elválasztását a fertőzés szerológiai markereinek azonosításával. A többi akut vírusos hepatitishez hasonlóan a HCV fertőzés szerológiai markerei következetesen megjelennek és eltűnnek a fertőzés folyamán és a helyreállítás folyamatában (2. ábra).

    HCV-RNS-t lehet kimutatni 7-21 nappal a fertőzés után HCV és anti-HCV 20-150 perc egy nap (átlagosan 50 perc naponta) [64]. Az anti-HCV spektruma eltérhet az akut hepatitisz időszakától függően. Úgy gondolják, hogy az első, amely a Core és NS5 által kódolt antitesteket azonosítja a HCV RNS régió. Az NS4-zónában kódolt fehérjék elleni HCV nem szerepel a hepatitis C akut fázisában [65]. Az akut és krónikus hepatitiszben szenvedő betegeknél az anti HCV koncentrációjának összehasonlító vizsgálata, az anti-HCV és a HCV RNS spektruma néhány különbséget mutatott [66]. Véleményünk szerint ezek a különbségek kapcsolódhatnak a fertőző folyamat egyedi jellemzőihez, ami csökkenti diagnosztikai értéküket.

    Ábra. 2. Akut hepatitis C

    Ennek analógiájára a laboratóriumi diagnózisa hepatitis A és B várhatóan a HCV-antitesteknek az IgM osztály lesz olyan nagy, mint a diagnosztikai értékét IgM anti-HAV és IgM anti-HBc. Azonban, ezek a vizsgálati szenvedő betegek szérumával akut és krónikus hepatitis C jelenlétében IgM anti-HCV jelzik azok gyakori azonosítására ilyen betegek között - 50-93% és 50-70%, sorrendben [67,68], ezek az eredmények azt jelzik, hogy a IgM anti -HCV nem használható az akut HCV fertőzés markereiént.

    Az akut hepatitisz C "arany" standardját jelző marker hiánya alapján megállapítható, hogy a páciens dinamikus megfigyelése alapján átfogó értékelést kell végezni.

    Ugyancsak fontos terület a nagyon érzékeny módszerek alkalmazására a HCV RNS tesztelésére - a poszttranszfúzió hepatitis C kockázatának csökkentése. Az ilyen munkák szükségességét az "ablak" fázis jelenléte határozza meg, azaz a HCV RNS első kimutatása és az anti-HCV megjelenése között, valamint a vírusellenesek (Krónikus hepatitisz C), akik HCV RNS-sel rendelkeznek HCV anti-HCV hiányában. A HCV véradásainak megfigyelésének jelenlegi rendszere csak az anti-HCV vizsgálatát foglalja magában, a hepatitis C-fertőzés veszélye továbbra is fennáll. Ebből kiindulva jogszerű felvetni a HCV RNS jelenlétének vérvizsgálatát modern módszerekkel (A NAT-eljárások egy "nukleinsavamplifikációs teszt"). A munkát korlátozó tényező a kutatás magas ára. A költségek csökkentése érdekében ajánlatos tesztelés sera medencék (8-96 minta), majd a keresési pozitív minta észlelése esetén a HCV RNS szérumgyűjtemény. Figyelembe véve a kívánt HCV RNS hígításának tényezőjét, amikor a vérszérum kipirulódik, a legérzékenyebb detektálási módszerek alkalmazása alapvető fontosságú. Úgy gondolják, hogy a NAT diagnosztikai készletének használata - 50-100 NE / ml érzékenységgel - jelentősen csökkentheti a poszttranszfúziós hepatitis C kockázatát.

    Kétségkívül a HCV-fertőzés markereinek teljes spektrumának tesztelése során megoldható problémák felsorolása nem korlátozódik e két területre. A modern vizsgálati módszerek rendelkezésre állása a képességek ismeretével kombinálva széleskörű kilátást kínál a hepatitis C tudományos és alkalmazott kutatásaira.


  • Kapcsolódó Cikkek Hepatitis