Mi a PCR elemzés és a vírusterhelés?

Share Tweet Pin it

A polimeráz láncreakció (PCR) egy laboratóriumi módszer a DNS és RNS meghatározására. Az első alkalommal az amerikai Cary Mullis csaknem fél évszázaddal ezelőtt tesztelte. Ez a túlérzékenységi vizsgálat képes meghatározni a genom hordozóját a vérben, nyálban vagy bőrben található egyik forrásmolekulából.

A PCR-módszer nagyszerű kilátásokkal rendelkezik, nemcsak az orvostudományban, hanem a géntechnológiában és a kriminalisztika területén is. Segítségével klónokat hoznak létre és új típusú DNS-eket hoznak létre, meghatározzák a rokonság mértékét. A bűncselekményen talált epitéliumon bűncselekményt hozzon létre.

A hepatitis PCR elemzése - mi ez és miért csinálják?

Miért szükséges a PCR elemzés a hepatitis C gyanúja esetén, mi ez?

Hepatitis C vírus - Vírust tartalmazó RNS 6 genotípust és legfeljebb 500 altípust tartalmaz. A májgyulladás közül a vírusnak van a legmagasabb mutációs képessége, és leküzdeni az immunrendszer védő gátját. A hepatitis esetek összes számából a C-vírus okozta a krónikus esetek 70% -át és a májcukor és májrák 30% -át.

A módszer lényege: a vizsgált génnek a speciális enzimek és körülmények hatására történő kiváltására egy tesztcsőben van szükség. A PCR analízis lehetővé teszi a vírus törzsének meghatározását, amely nélkül nem lehet hatékony kezelést végrehajtani: minden genotípus másképpen érzékeny az antivirális szerekre. Kétféle PCR létezik:

A vírusellenes terápia folyamatos ellenőrzést igényel a kezelés megfelelő időben történő kijavítása érdekében, polimeráz láncreakciót is alkalmaznak erre a célra.

Minőségi és mennyiségi PCR

PCR kvalitatív a hepatitis C-re adott válasz: van-e a vírus C-törzse a beteg vérében, és melyik. A genotipizálás szükséges a betegség diagnózisának, prognózisának tisztázásához és a kezelés időzítésének meghatározásához.

Az elfogadott osztályozás szerint a gént egy szám jelöli, és az altípust egy kis latin betű jelöli.

A természetes anyagokon alapuló speciális gyógyszer

A gyógyszer ára

Visszajelzés a kezelésről

Az első eredmények egy hét múlva érkeznek

További információ a készítményről

Naponta egyszer, 3 cseppenként

Használati utasítások

A C vírus genotípusai táblázatának dekódolása:

  • Az 1a, 1b, 1c genotípus
  • 2a, 2b, 2c, 2d genotípus
  • A 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f genotípus
  • 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4j, 4j genotípus
  • Genotípus 5 a
  • Genotípus 6 a

A leggyakoribb genotípusok 1,2,3. Oroszországban a vírus 1a, 1b, 2 és 3 törzsei.

Az 1b vírus genotípusa nehezebb kezelni, mint mások, 90% -ában krónikus formába juttat, amelyből 30% regenerálódik a máj daganatos vagy májzsugorodásaként.

A 2a és 3a genotípusok 33-50% -os fokú chronizációs fokkal reagálnak az antivirális terápiára.

A vírus jelenlétének igazolásakor a PCR-t számszerűsíteni kell a hepatitis C-re, amely kiszámítja az RNS-molekulák számát a beteg laboratóriumi mintájában.

Az elemzés magyarázata

Minőségi PCR az elemzésnek két válasza van:

PCR negatív azt jelenti, hogy a kórokozót a vérmintákban nem észlelik.
pozitív a válasz az ellenkezőjét sugallja: a vírus egyik vagy másik genotípusának RNS-je.

Az eredmény megbízhatóságának valószínűsége 95%. A fennmaradó 5% hiba az ember hibája miatt. Ez a lehetőség a kutatás elvégzésének magas követelményei miatt megengedett:

  • a reagensek tárolására vonatkozó szabályok;
  • az orvosi személyzet megfelelő képzettsége;
  • a bioméret tisztasága.

A PCR készlet 100% -os diagnosztikai pontossággal rendelkezik.

Kvantitatív PCR A hepatitis C RNS-je lehetővé teszi a vírus terhelésének meghatározását a páciens testén. Használata:

  • a betegség állapota (akut, krónikus);
  • meghatározzák az antivirális kezelés hatékonyságát;
  • a májbiopszia szükségességét tisztázzák.

Bizonyos esetekben a beteg nem érez semmi jelét a betegségről, míg a PCR módszere HCV-fertőzést mutat. Ez azt jelenti, hogy a betegség a fejlődés korai szakaszában vagy krónikus formában van. A diagnózis tisztázása érdekében több kutatásra van szükség a vírusellenes kezelés lehető legrövidebb időn belül történő elindításához.

Vírusterhelés a hepatitis C-ben

A vírus terhelés mutatja a máj vírus aktivitását, milyen mértékben aktív a reprodukciója.

Mi ez?

A mennyiségi hepatitis C PCR-t Nemzetközi Egységben mérjük ml / IU / ml-enként, ami azt jelenti, hogy a C-vírus egy adott törzsének ribonukleinsavának hány példányát 1 ml vizsgálati vérben találtuk.

Mi tekinthető magasnak, milyen alacsony?

A vírusterhelés elemzése lehetővé teszi a vírus RNS jelenlétét 50 NE / ml koncentrációban. A vírus terhelése normális - ebben az esetben nem mutatható ki egyetlen HCV RNS molekula sem PCR-rel.

Vírus terhelés táblázat:

  • alacsony koncentráció 600 NE / ml 3 * 104 NE / ml;
  • átlagos - koncentráció 3 * 104 NE / ml-től 8 * 105Mm-ig;
  • Magas - több mint 8 * 105 NE / ml.

Alacsony vírus terhelés - ez jelzi, hogy a terápiás kezelés helyesen van megválasztva, és a hepatitis C gyógyulásának prognózisa kedvező.

Nagy koncentrációjú vírusos sejtek azt jelzi, hogy a betegség akut fázisban van. A páciens vér veszélyes fertőzésforrás.

A vírusterhelés, amelynek mutatói átlagos szinten jellemzik a melegvíz krónikus szakaszát, vagy két fejlődési tendenciája lehet: növelni vagy csökkenteni.

A végén - 6 hónap alatt ellenőrzési PCR-t végzünk.

A PCR-diagnosztika költsége

A következő tünetek aggodalomra adhatnak okot:

  • általános gyengeség;
  • a bőrszín megváltozása, a szem sclera, a mentesítés;
  • hányinger;
  • csökkent étvágy;
  • fájdalom az izmokban és az ízületekben;
  • súlyos a jó hipokondriumban;
  • emelkedett AST és ALT vérszintje.

A fertőzött betegekkel való érintkezés során a preoperatív periódus alatt a hemodialízis vizsgálatra is ajánlott.

Az állami klinikák vérvizsgálatot végeznek a PCR ingyenesen, ha fertőzéses betegségre vagy hepatológushoz fordulnak.

A PCR-diagnosztikára fizetett szolgáltatások minden nagyobb orosz városban rendelkezésre állnak. A költség függ a teszt típusától, az elérhető berendezésektől, az időzítéstől és egyéb tényezőktől.

A kvalitatív PCR elemzés Moszkvában és Szentpéterváron 600 és 900 rubel között lesz. A régiókban - 300-800 rubel.

A hepatitis C virális terhelés meghatározása 17,000-22,000 rubel lesz. Egyéb fertőzéstípusok esetében a mennyiségi vizsgálat ára 1200-10000 rub.

A PCR módszer előnyei és hátrányai

Milyen előnyei vannak a polimeráz láncreakciónak más diagnosztikai módszerekkel szemben?

  1. Széleskörű alkalmazások. A PCR használatával szabványos berendezés segítségével bármilyen vírust azonosíthat.
  2. A kórokozó kimutatásának pontossága. Az enzimek és analitikai módszerek különböző kombinációi alkalmazásával a megjelölt fertőzés 100% -os specifikus vizsgálata valósul meg.
  3. Nagy érzékenység. A technika lehetővé teszi a vírus egy molekula jelenlétének kimutatását a vérben.
  4. hatékonyság. Minőségi elemzés készen áll néhány óra alatt, mennyiségi - két nap múlva.
  5. A vírus diagnózisa az inkubációs időszakban. A PCR-ben a kórokozót nem az antitestek jelenléte határozza meg, hanem akkor is, ha már létezik a szervezet immunválasztja, de a kóros folyamat kezdete előtt, ami megkönnyíti a kezelést.

A PCR hátrányai az előnyei:

  • A vizsgálat tisztasága a legmagasabb tisztaságot igényli, beleértve a levegőt a laboratóriumban, úgyhogy "idegen" DNS nem lép be a mintába;
  • magas személyzeti követelmények, a bioméret mintavételének és elemzésének elvégzése.

PCR diagnosztika használata

A polimeráz láncreakciót (PCR) a molekuláris biológiában a víruskeresés kísérleti módszerének nevezik. Lehetővé teszi a nukleinsav (DNS) bizonyos fragmenseinek koncentrációjának jelentős növelését a biológiai anyag mintáiban, ami lehetővé teszi számukra a felismerés és számlálást.

Az elemzés az alábbiak szerint történik. A genetikai anyagot (vérmintát), amely potenciálisan tartalmazhatja a kívánt gént, egy kémcsőbe kerül. Ezenkívül a primereket a kémiai úton szintetizáltuk a kívánt gén kis hosszán.

A DNS-hez vagy RNS-polimerázt is hozzáadják az edényhez, képes egy olyan nukleinsavláncot létrehozni, amely teljesen azonos az eredetivel. A kapott kompozícióba négy szabad nukleotidot, egy RNS-hez vagy DNS-hez speciális építőanyagot helyezünk, amelyek közül az egyik a foszfor radioaktív részecskéit tartalmazza.

A kapott elegyet 95-96 ° C-ra melegítjük, aminek következtében a szokásos állapotban összefonódott két DNS-helikát feloldjuk. Ezután a készítményt lehűtjük, ebben az időben a primerek a vírusgenom kívánt régiójához kötődnek anélkül, hogy az RNS (vagy DNS) kettős hélixet állítana elő ismét.

Hűtés közben a polimeráz egy nukleotidok szabad láncolatát keresi. Ennek az enzimnek a működéséhez egyetlen lánc nukleotidra van szükség. Mivel a polimeráz a DNS-szalag mentén csúszik (mint egy gyűrű egy kötélen), nem működhet kettős spirállal.

Ezután ismétlődő ciklusú melegítést végzünk, ami miatt a nukleotidláncokat elválasztjuk. Mindegyik PCR ciklus esetében a mintában lévő kívánt hepatitis gén mennyisége növekszik a geometriai progresszióban, és a genetikai anyag többi része lineárisan keletkezik.

A nukleotidmaradékok oldatának tisztítása és a DNS-szálak elektroforézissel történő molekulasúly-paraméterével történő elválasztása után könnyen meghatározható, hogy a kívánt gén létezik-e a vizsgálati mintában, vagy sem.

A PCR előnyei

A PCR módszerrel végzett laboratóriumi vizsgálat lehetővé teszi, hogy még több információt szerezzen, mint az RNS vírus jelenlétét. A radioaktív sugárzás szintjének meghatározásakor meghatározható, hogy a vizsgált mintában mely genetikai anyagot kezdetben tartalmaznak. Hepatitis esetén határozza meg a vírusterhelés szintjét.

Ennek a módszernek egy másik előnye a CR reakció nagyon nagy érzékenysége. Sokkal magasabb, mint a vírusok észlelésének klasszikus módszerei. Ideális esetben a kívánt gén azonosítása céljából csak egy mintában lévő vírus elegendő a PCR-hez.

Emellett a PCR teljesen specifikus. A primereket olyan módon hozták létre, hogy teljesen megfeleljenek a kívánt gének egyedülálló részeinek, amelyeknek nincs más szekvenciája. Mindkét ujjlenyomat egyedülálló, és minden génben egyedi nukleotidszekvenciák vannak.

Minõségi PCR analízis

A kvalitatív analízis csak a vírus jelenlétét mutatja a vérben. Ezt a vizsgálatot minden olyan betegnél el kell végezni, akikről kimutatták, hogy vérükben a hepatitis C elleni antitestek eredményei csak két érték közül választhatnak: "észleltek" vagy "nem észleltek". Egészséges ember esetében a normát (referenciaérték) "nem szabad észlelni".

Az elvégzett kvalitatív kutatás ilyen eredményeinek speciális értelmezése is van:

  • Az eredmény "felfedezett". Ez azt jelenti, hogy a mintában a biológiai anyagot hozott találtak egy olyan RNS-fragmens, amely specifikus a hepatitis C-vírus Következésképpen, ott van a tény, a beteg hepatitis B vírus fertőzés C. Ha az eredmény a kvalitatív PCR „felfedezte”, ez azt jelzi, hogy a vírus ismétlésben és ebben az időben új májsejteket fertőz meg a szervezetben.
  • Az eredmény "nem észlelhető". Az ilyen döntés azt jelzi, hogy a mintában a biológiai anyag kapott RNS-fragmentum nem mutatható ki a laboratóriumban, amely specifikus vagy HCV RNS azonos koncentrációban a patogén fertőzés a mintában határ alatt volt az a teszt érzékenységét.

A hepatitis C vírus RNS akut fázisában a PCR technikát alkalmazó kvalitatív vizsgálatok 1-2 hét után azonnal felfedezhetik a szervezet fertőzését, vagyis röviddel a hepatitis elleni antitestek megjelenését megelőzően.

Az ilyen vizsgálatok analízisének megbízhatatlan eredményei a következőkkel érhetők el:

  • szennyezett biomassza;
  • heparin jelenléte a beteg vérében;
  • a mintában lévő vegyi vagy fehérjeanyagok (inhibitorok) jelenléte, amelyek befolyásolják a PCR különböző komponenseit.

A PCR minőségi analíziséhez nem szükséges a beteg speciális preparálása a vizsgálat elvégzéséhez. A vénás vért anyagként használják.

Az eredmények értékelése

A kvalitatív PCR-tesztek bizonyos fokú érzékenységgel rendelkeznek, és a laboratóriumi pontosságtól és a laboratóriumi felszerelés mértékétől függően 10 és 500 NE / ml között változhatnak.

Ez azt jelenti, hogy ha a vírus a vérmintában nagyon alacsony koncentrációban van jelen (kevesebb, mint az adott laboratórium érzékenységi küszöbe), akkor a beteg páciensét "nem detektálják". Ennek következtében, ha minőségi PCR-elemzést végeznek alacsony vírusszinttel (vírus alacsony koncentrációja), például antivirális terápiában részesülő betegeknél, nagyon fontos tudni a diagnosztikai rendszer érzékenységi küszöbét.

Diagnosztikai rendszerek változatai

A virológiai válasz szabályozására ajánlott az antivirális kezelés legalább 50 NE / ml érzékenységi küszöbértékű diagnosztikai rendszerek alkalmazása. Ezek a kritériumok teljesülnek, például: Cobas Ampicolor VGS-teszt elemzők (50 IU / ml pontossággal), valamint RealBest HCV RNS (15 IU / ml érzékenységgel).

A WHO szerint ajánlásokat létrehozó végleges diagnózist a hepatitis C, meg kell kizárólag alapján hármas kimutatására RNS-vírus szérummintákon szenvedő beteg nincs más hepatitis marker faj.

A PCR-eljárások mellett TMA-vizsgálatot (transzkripciós amplifikációs módszert) is alkalmaznak HCV RNS kimutatására betegekben. A legjobb érzékenység küszöbérték (5-10 NE / ml), de hazánkban ez a tesztelési módszer még nem túl gyakori.

A vírusok észlelt módosításainak hatóköre

Ez a kvalitatív meghatározás a hepatitis C vírus RNS jelenlétében szérumban lehetővé teszi számos vírus genotípusának meghatározását. Jelenleg a tudomány több mint hat genotípust ismeri a vírusról, valamint a betegség mintegy 10 altípusairól.

Az 1, 2, 3 genotípusú vírusok gyakoriak országunkban. Laboratories képes észlelni a következő genotípusok: 1a, 1b, 2a, 2b és 2c és 3, 4, 5a és 6. függetlenül altípus. Minden vírusmódosítás esetében a detektálás sajátossága 100%.

PCR mennyiségi elemzése

Kvantitatív PCR-teszt segítségével megállapítják a vérminták hepatitis vírusának koncentrációját (vírus terhelés). Ez a viremia-teszt (a vírus koncentrációja) lehetővé teszi egy meghatározott genetikai anyag (a leginkább vírusos RNS) egységek számának meghatározását, amelyet egy bizonyos mennyiségben észlelnek. Ebben az esetben határozza meg a koncentrációját 1 ml-ben, ami megfelel 1 cu. cm.

Az analízis mennyiségi paramétereit számokban fejezzük ki, ezt a mérést nemzetközi egységegységként (IU) milliliterenként (ml), ME / ml-ként jelöljük. Néhány laboratóriumban a vírus mennyisége más egységekben is meghatározható: a példányok számát ml-enként, másolatként / ml-nek.

  • Időzítés A hepatitis C esetében a PCR ilyen kvantitatív analízise a terápia megkezdése előtt történik. Aztán az 1., 4., 12. és 24. hetet. A 12. héten végzett értékelés indikatív, lehetővé teszi a terápia hatékonyságának meghatározását.
  • Elemzés előkészítése. A PCR mennyiségi elemzéséhez nem szükséges a beteg speciális felkészítése a vizsgálathoz. A mintavétel előtt fél órával nem szabad dohányozni. Vénás vért használnak laboratóriumi anyagként.

Az eredmények értékelése

Különböző laboratóriumi vizsgálati rendszerek esetében ez a mutató különböző konverziós tényezőket mutat be IU / ml-ben. Átlagosan egy konverziós paramétert alkalmaznak, amelyben 4 kópia / ml = 1 NE / ml. Ez például, ha a laboratórium 2,4 * 10 6 kópia / ml PCR-analízist eredményez, akkor ezt a paramétert 4-gyel kell osztani, és 6 * 10 5 NE / ml-t kapunk.

A 800 000 NE / ml magas terhelési szint magasnak tekinthető, ami megközelítőleg 3 000 000 példány / ml index. Az alacsony viremia egyes szerzők szerint a kvantitatív PCR 400 000 NE / ml alatti paramétereinek felel meg.

A kvantitatív teszt eredményeként a végeredmény nem digitális érték formájában jeleníthető meg, hanem: "a mérési tartomány alatt" vagy "nem detektálható".

  • Értékelés: "a mérési tartomány alatt". Ez azt jelzi, hogy a mennyiségi vizsgálat nem tudta kimutatni a hepatitis C virális RNS-t, de maga a vírus igen kis koncentrációban jelen van a szervezetben. Ezt egy további kvalitatív vizsgálat is jelzi, amely igazolja a vírus jelenlétének tényét.
  • Értékelés: "nem észlelt". Ez az eredmény azt jelzi, hogy a mennyiségi vizsgálat nem észlelt vírust az RNS mintában.

A vírusterhelés paramétere elsősorban a betegség fertőzőképességének mértékét, a beteg fertőzőképességének mértékét határozza meg. Minél magasabb a páciens koncentrációja a vírusnak, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy más emberekre átruházzák. Például, amikor szexuális kapcsolatban áll egy beteg vagy egy függőleges út. Az ilyen mennyiségi mutató segít a páciens kezelésének hatékonyságának meghatározásában.

A PCC mennyiségi elemzésének elvégzése fontos az antivirális terápiához, értékeli sikerét és ütemezi a tanfolyam időtartamát. Tehát a test gyors reakciója a kezelés és alacsony mértékű viremia esetén a terápia időtartama csökkenthető.

A mennyiségi PCR paraméter lassú csökkenésével az antivirális terápiát ki kell terjeszteni vagy módosítani. Ha a vírusterhelés szintje alacsony, akkor ez a terápia kedvező tényezője, ha magas, akkor az alkalmazott kezelési módszer hatástalan, és a gyógyszereknek vagy azok használatának módszereit módosítani kell.

A hepatitis C PCR minőségi elemzése

A hepatitis egy súlyos betegség, amelynek számos oka van a kezdetnek. A fejlődés középpontjában a máj közvetlen vagy közvetett károsodása okoz. Tekintve annak fontosságát az egész szervezetre, csak azt lehet kitalálni, milyen rossz a patológia. Ebben a cikkben részletesebben tárgyaljuk a kurzus jellemzőit és a hepatitis C laboratóriumi diagnosztikáját.

A betegség oka egy vírus, amely RNS-tartalmú kórokozókra utal. Megkülönböztető jellemzője - a mutáció képessége, vagyis szerkezetének megváltoztatása. Emiatt a fertőzés elszökik az immunrendszer támadását, és a legtöbb esetben krónikus gyulladást okoz a májban.

Figyelembe véve a vírus különböző altípusainak létezését, a gyógyszerek kiválasztását a genotipizálás eredményeinek figyelembevételével kell elvégezni. Annak ellenére, hogy hosszú ideig tartó vizsgálatot folytattak a betegségről és a HCV felépítésének sajátosságairól, nem volt lehetséges a vakcina elleni vakcina kifejlesztése.

A korai diagnózis nehézségei a májgyulladás tünetmentes lefolyásának következményei, melynek következtében egy személy a cirrhosis szakaszában orvoshoz fordul. A betegség időben történő kimutatásához rendszeres fizikai vizsgálatokra van szükség. Csak a vér laboratóriumi vizsgálata képes azonosítani a HCV-t és megelőzni mások fertőzését. Az a tény, hogy a fertőzés hordozója sokáig nem tudja a patológiát, és tovább továbbítja a vírust az egészséges embereknek.

Átviteli útvonalak

A vírus a legtöbb esetben a véren terjed, mivel a kórokozók legnagyobb koncentrációját tartalmazza. Így a fertőzést továbbítják:

  • hemodialízissel;
  • tűzéssel;
  • a harc során, amikor a bőr sérült, és hemokontakt fordul elő;
  • vérátömlesztéssel (vérátömlesztés).

Az intim intimitás okozta fertőzés valószínűsége jelentéktelen, mivel a sperma és a hüvelyi elváltozás kis számú kórokozót tartalmaz. A fertőzés kockázata jelentősen megnő, ha a genitális nyálkahártya integritása veszélybe kerül. Ezt agresszív és anális szexekkel figyelik meg.

Ami a fertőzés átvitelének vertikális módját illeti, az a munka során történik. A terhesség idejében a kórokozó nem tud átjutni a méhlepénybe az embrióba. Természetes rendellenességek esetén a patogén ágens a bõr traumájába kerül, amikor az anya vérével való érintkezést észlelik.

Miután a kórokozó egészséges szervezetbe került, az ellenanyagok szintézise megkezdődik, amelyek védelmet nyújtanak a fertőzés ellen és az immunrendszerhez tartoznak. Ezek megtalálhatók az ELISA segítségével egy személy kezdeti vizsgálatakor.

A diagnózis megerõsítéséhez a páciens polimeráz láncreakciót végez. Ez egy elemzés egy patogén ágens genetikai anyagának azonosítására és a vírusterhelés meghatározására.

A hepatitis C laboratóriumi diagnózisa

A laboratóriumi diagnosztika enzim immunvizsgálattal kezdődik. Fő feladata a kórokozóval szemben előállított antitestek kimutatása. Hatékonysága majdnem 95%. A preklinikai szakaszban végzett kutatásnak köszönhetően a vírus hordozó azonosítása lehetséges, és további vizsgálat céljából elküldi.

Az ELISA minőségi analízise azt jelzi, hogy az immunglobulinok jelen vannak vagy hiányoznak a páciens vérében. Eredménye lehet "pozitív" vagy "negatív". Miután megkapta a válasz első változatát, a személy eljut a következő vizsgálathoz - PCR. Az ára függ a reagensek és a laboratóriumok minőségétől. A polimeráz láncreakció költsége elérheti a 4000 rubelt.

A PCR jellemzői

A polimeráz láncreakcióval még kis mennyiségű biológiai anyag lehetővé teszi a vírusterhelés becslését a vérben, azaz a kórokozók koncentrációját egy milliliter folyadékban.

A PCR megjelenésével a hepatitis diagnózisa sokkal egyszerűbb volt. Az elemzés lehetővé teszi a HCV RNS azonosítását, a fertőző folyamat színvonalának és a vírus hordozó fertőzőképességének megállapítására.

Számos genetikai diagnózis létezik:

  1. a hepatitis C-re vonatkozó PCR minőségi elemzése - megerősíti a HCV jelenlétét vagy hiányát a vizsgázó vérében:
  2. mennyiségi, amellyel lehetővé válik a vírusok koncentrációjának kiszámítása és a betegség színpadának megállapítása. Az eredményt IU / ml-ben vagy másolatokban / ml-ben adják (a laboratóriumból);
  3. genotipizálás szükséges a HCV genotípusának meghatározásához. Ehhez a kábítószerek pontos kiválasztásához van szükség, amelyek ebben az esetben a leghatékonyabbak. Az elemzés közvetetten jelzi a kóros folyamat súlyosságát a májban. Tehát a kórokozó harmadik genotípusával leggyakrabban megfigyelhető a steatosis, amelynek fejlődése a zsír felhalmozódása a hepatocytákban (sejtjeiben). Ezenkívül a vírus típusa befolyásolja a terápiás kezelés eredményét és időtartamát.

A hepatitis C PCR minőségi elemzése

A laboratórium első lépése a biológiai anyag HCV RNS jelenlétének tanulmányozása. Fontos megjegyezni, hogy a hepatitis C minőségi elemzésének bizonyos szintű érzékenysége van, ezért nem mindig adhatja meg a helyes választ. Ebben az esetben ajánlott ismételt laboratóriumi diagnózist végezni más reagensek alkalmazásával.

A megbízható eredmények eléréséhez legalább 50 IU / ml érzékenységű vizsgálati rendszert kell használni.

A diagnózis eredménye lehet "pozitív" vagy "negatív". Ha a patogén nem található a vérben, a vizsgálat véget ér. Amikor egy patogén ágenst detektálunk a mintában, akkor a vírus terhelés kvantitatív számát végezzük.

A hamis negatív válasz akkor érhető el, amikor a technológiai folyamat megzavarodik, például olyan aktív összetevők, amelyek elnyomják a kórokozó másolatainak kialakítását a környezetbe. Így nem lehet megjeleníteni a vér igaz képet, amely miatt nem diagnosztizálják az emberi fertőzést.

Hamis pozitív eredményt lehet elérni, ha a biológiai anyag gyűjtőcsöve, valamint a vizsgálat környezete szennyezett. Ezen túlmenően, egy ilyen elemzésre adott válasz lehetséges vegyes fertőzéssel, amikor a májat több vírus, például hepatitis C és D is befolyásolja.

A minőségi kutatásra utaló jelek

Az orvos kvalitatív vizsgálatot rendelhet a páciensnek a hepatitis C vírus RNS kimutatásához:

  • amikor az enzim immunoassay pozitív vagy megkérdőjelezhető választ kap;
  • a diagnózis ellenőrzéséhez;
  • a vírusterhelés meghatározása;
  • a betegség színpadának felállítása;
  • vegyes fertőzés diagnózisát. Gyakran előfordul, hogy a hepatitis C a májat a "D" vírussal egyidejűleg érinti;
  • a terápiás taktika meghatározása, figyelembe véve a kórokozó genotípusát;
  • a változások dinamikájának értékelése az antivirális gyógyszerek kezelésének hátterében.

A polimeráz láncreakció előnyei közé tartoznak a következők:

  1. a technika magas érzékenysége, amely lehetővé teszi a fertőzés tényét a preklinikai szakaszban;
  2. a kórokozó genetikai anyagának azonosítása, nem pedig antitestek;
  3. a kórokozó-ágens altípusának létrehozása;
  4. a nagy sebességű diagnosztika, mivel nem szükséges anyagot táplálékközegre vírni, de elegendő egyedi vizsgálati rendszereket használni. Egy személy 5 óra elteltével kap eredményt;
  5. sokoldalúságát. Az elemzés lehetővé teszi bármely genetikai anyag (RNS, DNS) azonosítását. Ennek következtében az orvos megerősítheti a hepatitis C-t és más típusú betegségeket (B);
  6. a látens fertőzés észlelésének a lehetősége.

Kvantitatív kutatás

A polimeráz láncreakcióval végzett vérvizsgálat során kórokozók számát lehet kiszámolni egy fix mennyiségű biológiai anyagban. A mutató IU / ml. Az elemzésnek köszönhetően meg lehet állapítani a beteg fertőzőképességének mértékét, meghatározni a fertőző folyamat stádiumát, valamint értékelni a gyógyszerterápia hatékonyságát.

A PCR alapján a szakértő eldönti, hogy mely gyógyszerek dózisa képes blokkolni a kórokozók terjedését. Ezenkívül meghatározzák az antivirális kezelés időtartamát és az életre vonatkozó prognózist. Fontos megjegyezni, hogy a vizsgálati rendszerek nagyon érzékenyek, ezért a módszer lehetővé teszi az emberi fertőzés megerősítését még a preklinikai szakaszban is.

genotipizáláshoz

Tekintettel arra, hogy a kórokozó képes mutálni, meghatározni a kezelés taktikáját és az antivirális gyógyszerek kiválasztását, genotípusa szükséges. Például a hepatitis HCV 1 kezelése 48 hétig tart, pozitív trendként csak az esetek 60% -ában figyelhető meg. A 2. és 3. genotípus kedvezőbb prognózissal rendelkezik. A vírusellenes szereket 8 hónapig írják fel, és hatékonyságuk elérheti a 85% -ot.

Statisztikai adatok szerint a legtöbb esetben az 1., 2. és 3. HCV az Orosz Föderáció területén található.

Egy laboratóriumi vizsgálat megfejtésekor ilyen válasz jelezhető: "nincs beírva". Ez azt jelenti, hogy egy vírus kering a beteg keringési rendszerében, amelyet a tesztrendszer nem ismeri fel. Az elemzés eredménye ebben az esetben azt jelzi, hogy az atipikus ember fertőzést okoz a kórokozó adott földrajzi területére.

Hogyan lehet megbízható eredményeket elérni?

A PCR-nek a hepatitis C kórokozójának RNS-ének kimutatására szolgáló kvalitatív vizsgálata megfelelő eredményeket mutatott, ezért meg kell felelnie a laboratóriumi diagnosztika előkészítésének követelményeinek:

  1. a vérmintavétel üres gyomorban történik, és az "éhes" rés nem lehet rövidebb 8 óránál;
  2. két nappal a vizsgálat előtt ajánlott az alkoholfogyasztás abbahagyása és az éles, zsíros és füstölt ételek elutasítása;
  3. töröljék el a véralvadásgátló gyógyszereket, például a heparint. Ha ezeket a gyógyszereket életciklus miatt írják fel, erről értesítenie kell az orvost. Ezenkívül a szakorvosnak ismernie kell olyan egyéb gyógyszerek befogadását, amelyek befolyásolhatják a laboratóriumi vizsgálat eredményét;
  4. A biológiai anyaggyűjtés előestéjén a fizioterápiás eljárásokat nem szabad elvégezni, és nehéz fizikai terhelésnek kell alávetni.

Az elemzés eredményeit nem csak a vér adományozója, hanem egyéb tényezők is befolyásolhatják:

  • rossz vérgyűjtés;
  • a biológiai anyagok szállítására vonatkozó ajánlások be nem tartása;
  • a laboratóriumi dolgozók nem megfelelő képzése;
  • a kutatási technikák figyelmen kívül hagyása;
  • a véralvadás előtti antikoagulánsok (heparin) bevezetése. Ez a gyógyszercsoport csökkenti a koagulálhatóságot, ezáltal lelassítja a reagensek munkáját.

A különböző laboratóriumokban a diagnosztikai válasz némileg eltérő lehet, de ezek a hibák nem befolyásolják a vizsgálat végeredményét.

Különös figyelmet fordítanak a laboratóriumi vizsgálati rendszerek típusaira. Gyakran előnyös a nagy érzékenységű reagensek alkalmazása. Ez fontos az alacsony virális terhelésű betegeknél, mivel nehéz észlelni.

Milyen gyakran végez laboratóriumi vizsgálatot?

Elsősorban a polimeráz láncreakciót végezzük olyan személyeknél, akik immunválaszt követően ellenőrizték a hepatitis vírus ellenanyagait. Ebben az esetben kijelölték, hogy megerősítik egy személy fertőzésének tényét és megállapítja a betegség színpadát. Ezenkívül az elemzés lehetővé teszi a vírus altípusának meghatározását, ami különösen fontos a gyógyszerek kiválasztásához.

A kötelező laboratóriumi vizsgálatok következő periódusa a vírusellenes terápia megkezdésétől számított 3 hónap. A diagnózis lehetőséget nyújt a gyógyszerek hatékonyságának értékelésére, az adag módosítására vagy cseréjére.

Az alapvető analízisek mellett PCR is végezhető a kezelés kezdetétől számított 4 és 24 héten belül. A betegség pozitív prognózisát a vírusterhelés 3 hónapos terápiás kezelés utáni csökkenése igazolja. Így például 1 millió NE / ml-ről több százezerre kell csökkennie.

Ha a patogén ágensek koncentrációja a vérben ugyanakkora szinten marad, vagy enyhén emelkedik, ez jelzi a vírusellenes szerek hatástalanságát és helyettesíti őket. A kezelés végén a PCR segítségével megerősíthetjük a beteg helyreállítását.

A laboratóriumi diagnózis eredményeinek helyes értelmezéséhez egy hepatológus vagy fertőző betegség specialistával kell konzultálni. Mivel az ELISA-val kapcsolatos téves válaszok nagy gyakorisággal fordulnak elő, az elemzést kizárólag az elsődleges szűréshez használják. A beteg alaposabb vizsgálatához polimeráz láncreakciót alkalmaznak.

Meg lehet gyógyítani a hepatitis C-t mellékhatások nélkül?

Ma, a modern gyógyszerek és az új generációs sofosbuvir Daklatasvir a 97-100% valószínűséggel örökre fog gyógyítani hepatitis C. A legújabb gyógyszeres kapható orosz a hivatalos képviselője az indiai farmgiganta ZYDUS Heptiza. A megrendelt termékeket a futár a kézhezvételt követő 4 napon belül kézbesíti. Ingyenes konzultáció a modern drogok használatáról, valamint a vásárlás módjáról a Zydus beszállítójának hivatalos honlapján, Oroszországban.

Minőségi analízis a hepatitis C esetében

Hagy egy válasz

A polimeráz láncreakció kvalitatív elemzése - a hepatitis C-re vonatkozó PCR meghatározza a HCV jelenlétét vagy hiányát a szervezetben. A laboratóriumban megvizsgálják az RNS szerkezetét, amelyben a vírus található. Ha a C-vírus kimutatható, szükségessé válik a kezelés folyamata, mivel az elhanyagolt májbetegség komoly következményekkel jár. A kinyerés után kvalitatív PCR-t végzünk, hogy megerősítsük az antitestek hiányát. Kinevezett és megelőző vizsgálat. A vér kórokozója alacsony koncentrációban a PCR (kvalitatív) nem képes észlelni semmit, mert a diagnosztikai rendszernek érzékenységi küszöbe van. A betegség kezdeti szakaszában vagy enyhe formában a PCR-t végül ultrahangos berendezéssel diagnosztizálják.

Mi az RNS vírus?

A hepatitis C vírus (vagy a hepatitis C vírus RNS) RNS-ről nevezik magát májbetegségnek. A C vírus egy egészséges sejthez kötődik, és behatol. Idővel elterjedt az egész testben, csak a vérbe jut. Ennek eredményeképpen a kórokozó behatol a májba, megolvasztja sejtjeit és keményen dolgozik. A májsejtek (hepatociták) a hatása alatt, változásokon át, és ebből a veszteségből dolgoznak. Minél hosszabb a C vírus a májban, annál több sejt hal meg. Idővel veszélyes betegségek alakulnak ki, amelyek rosszindulatú degenerációhoz és halálhoz vezetnek.

A máj fertőzése ilyen típusú vírussal semmilyen módon nem nyilvánulhat meg külsőleg. Sok éven át vagy több tucat évig a fertőzött személy egészségesnek érzi magát, és csak egy véletlen vizsgálat leggyakrabban patológiát tár fel. A hepatitis vérének adományozásakor az emberi gén (DNS) részét képező RNS (ribonukleinsav) lánc egy részét vizsgáljuk. A laboratóriumi kutatások eredményeit nem szabad az öngyógyításra használni, mert ez csak indikátor. Az orvos meghatározza a pontos képet és további diagnózist.

Ha kész: a tanulmány tanúsága

A HCV megerősítésére PCR-analízist (polimeráz láncreakció) rendelünk. A PCR vizsgálatok segítenek megtalálni a kórokozó anyagot az RNS szerkezetében, és hatékony terápiát írnak le. A következő esetekben kinevezett:

  • a májgyulladás jeleinek azonosítása;
  • megelőző szűrővizsgálatok;
  • kapcsolattartó személyek vizsgálata;
  • a vegyes eredetű hepatitis diagnózisa (a fő kórokozó meghatározása);
  • A vírus szaporodásának aktivitási szintjének meghatározása krónikus formában;
  • a máj cirrhosis;
  • hogy meghatározzák az előírt kezelés hatékonyságát.
A PCR-vizsgálatokat orvos határozza meg a hepatitis kezelésének hatékonyságának meghatározására.

A PCR minőségi és mennyiségi analízise is van. A kvantitatív PCR mutatja az RNS százalékát a vírus hordozóival a vérben, és a minőségi PCR vírus jelenlétét vagy hiányát jelzi. A minőségi pozitív mutató (a hepatitis C RNS jelenléte) szintén kvantitatív vizsgálatot igényel. A hepatitis C kórokozójának magas koncentrációja az átvitel kockázatával jár együtt, azaz mások fertőzésével. Az alacsony mennyiségeket jobban kezelik. A vérben található RNS vírusok mennyisége nem kapcsolódik a betegség intenzitásához. A PCR-analízist az interferon terápia esetében is végezzük, annak érdekében, hogy meghatározzuk a kezelés folyamatának időtartamát és összetettségét.

A hepatitis C minőségi PCR analízisének jellemzői

A polimeráz-láncreakció-indexhez kvalitatív analízist rendelünk minden olyan beteghez, akik vércukorszint-ellenes antitesttel rendelkeznek, és akik visszanyerték és gyógyultak, újra kell vizsgálni. Javasoljuk, hogy a vizsgálatot elvégezni a hepatitis B és, majd abban az esetben pozitív következtetés, és a hepatitis D. minőségileg is analizáltuk reakatsiya kell elvégezni együtt más vérvizsgálat. Az elemzések teljes képet adnak a vírus terjedésének.

A vizsgálati eredmények közül csak pozitív, hepatitis C vagy negatív teszt, azaz a vírus jelenléte vagy hiánya látható. Ha a következtetést "észlelik", akkor a vírus aktívan cselekszik és folytatja tevékenységét. A "nem található" megnevezés azt jelzi, hogy nincs vírus vagy kis mennyisége. Ezzel a mutatóval figyelembe kell venni azt a tényt, hogy a diagnosztikai rendszerek analitikai érzékenysége eltérő, és az RNS hepatitis C még mindig a vérben maradhat, de nem mutatható ki az elemzésben.

A PCR ultra-hepatitis C különösen érzékeny módszere még kis mennyiségben is feltárul. Egy hibridizációs-fluoreszcens vizsgálatot alkalmaznak, amely sokszor magasabb, mint a standard PCR rendszerek. A módszert több esetben használják:

  • a hepatitis C gyanús rejtett formái;
  • A PCR diagnózisát a kórokozó nem igazolta, de vannak antitestek;
  • visszanyerés esetén;
  • hogy azonosítsa a fertőzés korai szakaszát.
Vissza a tartalomhoz

Az elemzés magyarázata

A diagnózis végső döntését a HCV PCR dekódolásának hatása befolyásolja, különösen az ultramethod módszerrel. Ennek a kutatásnak a fő hátránya a minta és az anyagok steril körülmények közötti szigorú betartása. A kis eltérés néha az elemző pontatlan következtetéseit mutatja, bonyolítja a diagnózist és a későbbi kezelést. A PCR analízise a hepatitis vírus RNS meghatározására nem mindig mutatja a betegség képét bizalommal, néha pontatlanságok is be vannak engedve, mindkét irányban.

A hepatitisz-vírus diagnosztizálására ajánlott átfogó vizsgálatot alkalmazni.

A mutatók normája

A vírusos hepatitis C-ben található RNS-sel szembeni JgM antitestek hiányát a polimeráz láncreakció analízisének tekintik. Ugyanakkor a szerológiai analízis eredményei azt mutatják, hogy a C-vírus antitestjei jelen vannak, és ez a norma határain belül is fennáll. A minőségi meghatározás nem mutatja a betegség intenzitását, csak a hepatitis C okozó ágensét mutatja az RNS-ben. Az ilyen elemzést a kezelés után meg kell ismételni a tényleges gyógyulás megerősítése érdekében.

eltérések

Ha a HCV RNS-nek megfelelő JgM ellenanyagok vannak jelen, ez egy fejlődő fertőzésre utal. A betegség akut vagy krónikus, különböző szakaszokban manifesztálódik. Ha az antitestek számának csökkenését rögzítik, az elemzés a kezelés során elért eredmények elérését jelzi. Rendkívül ritkán előfordulnak a hamis pozitív eredmények a diagnózisban. A nőknél a terhesség alatt és más fertőző betegségekben szenvedőknél fordulnak elő.

PCR vizsgálatok

A polimeráz láncreakciót az egyik legpontosabb és leggyorsabb módszer a számos fertőző betegség diagnosztizálására. Sikeresen alkalmazzák a kriminológiában is, hogy egyszerűsítse a bűnözők azonosításának folyamatát, amelynek segítségével nagy pontossággal hozza létre az apaságot.

A PCR módszer lényege

Minden élő szervezet, beleértve a baktériumokat és vírusokat, egyedi géneket tartalmaz, amelyek egy bizonyos sorrendben a DNS- vagy RNS-struktúra részét képezik. A PCR-vizsgálat során a genetikai anyagot többször másolja a DNS-polimeráz és a speciális hőmérsékleti ciklusok hatására.

A polimeráz láncreakció két fő módszere van:

  1. A klasszikus módszer a kórokozó genetikai anyagának elkülönítése elektroforézissel;
  2. PCR valós idejű üzemmódban.

A módszertan három fő szakaszból áll:

  • A vizsgálati minta előkészítése;
  • DNS-amplifikáció;
  • Az állítólagos kórokozó genetikai anyagának kimutatása (azonosítása).

A kutatás elvégzéséhez a PCR laboratóriumot 3 zónára kell osztani, a reakció minden szakaszát szigorúan a szánt helyiségben kell végrehajtani. Minden zónát fel kell szerelni a szükséges felszereléssel, adagolókkal, fogyóeszközökkel, védőruházattal, amelyek csak ebben a szobában használhatók.

A minták bejegyzését és címkézését követően a mintaelőkészítő helyiségben a kórokozó DNS-jét vagy RNS-ét izolálták a vizsgált anyagból meghatározott hőmérséklet és speciális reagensek hatására. Ezután megkezdődik az amplifikáció folyamata - egy egyedi DNS-fragmentum számos példányának létrehozása. 3 fő szakaszból áll:

  • A DNS denaturálása - magas hőmérséklet (95 fok) hatására a DNS kettős hélixét két láncba rendezzük.
  • A primerek hevítése - speciális szintetikus vegyületeket (primereket) kötnek a DNS láncok végeire, azonosak a nukleinsavak kívánt fragmenseinek végein lévő genetikai információval. A primer rögzítéséhez szükséges hőmérséklet egy adott esetben 50-65 g közötti.
  • DNS-polimeráz enzim 70-72 ° C-on történő alkalmazásával egy hasonló DNS-régió (amplikon) keletkezik a két primer között. Építőanyagként speciális anyagokat használnak, amelyeket a kémcsőbe adnak.

Az amplifikációs ciklust többször megismételjük, ezért sokszor másoljuk az extrahált DNS-t, ami egyszerűsíti az azonosítás folyamatát. Az azonosítás vizuálisan elvégezhető az amplifikációs termékek elektroforézisének agaróz gélben történő végrehajtása után, vagy automatikusan a valós idejű technikával.

A valós idejű PCR módszer alkalmazása során az erősítés és detektálás egyidejűleg történik speciális eszközökön. Ez a módszer a legelőnyösebb, mivel a vizsgálatot zárt tesztcsövekben végzik, így csökken a szennyeződés kockázata, következésképpen a hamis pozitív eredmények kibocsátása.

A módszer előnyei és hátrányai

  • A tanulmány csak néhány órát vesz igénybe, ellentétben a hosszú klasszikus mikrobiológiai módszerekkel;
  • Magas specifitás 95% -ról 100% -ra, mert a kívánt DNS-fragmens egyedülálló minden egyes mikroorganizmus esetében;
  • A módszer nagy érzékenysége, a kórokozó felismerése, még akkor is, ha a mintában csak egy sejt vizsgálja;
  • A kórokozó azonosítása minőségi és mennyiségi módszer lehet. Ez nagyon fontos az opportunista mikroorganizmusok elosztásában, amelyek kis számban nem okoznak betegséget;
  • A kórokozó genotípusának meghatározása (hepatitis C, HIV-fertőzés). Ez szükséges a racionális kezeléshez és a lehetséges komplikációk prognózisához;
  • A betegség genetikai hajlamának azonosítása, ezáltal megakadályozza annak fejlődését;
  • Szinte minden fertőzésforrást elkülöníthetünk, és a modern módszerek lehetővé teszik a minta teljes mikroflórájának azonosítását, például a hüvely biocenózisát.
  • A hamis pozitív és hamis negatív minták megszerzésének lehetősége, ha nem követik a mintavételre vonatkozó szabályokat, a kutatás során elkövetett hibákat;
  • Nagy elemzési költség.

kérelem

PCR kivizsgálása gyakorlatilag bármely mintát (vér, vizelet, agy-gerincvelői folyadék, nyaki scrapings a csatorna és a húgycső, szőrtüszők, ondó, stb). Ezt a technikát széles körben alkalmazzák a diagnózis az STD-k (gonorrhoea, chlamydia, ureaplasmosis, mikoplazmózis, trichomoniasis). Ezt fel lehet használni olyan anyagok azonosítására, a tuberkulózis, a diftéria, a tüdőgyulladás, vírusos hepatitis, HIV-fertőzés, toxoplazmózis, citomegalovírus és a herpesz vírus, szalmonella, stb

Polaritás láncreakciót alkalmaznak az apaság megállapítására a szülő és a gyermek DNS-jének összehasonlításával, felfedve a genetikai anomáliákat és az organizmus örökletes hajlamát különböző betegségekre.

Az elemzés előkészítése

  • Ajánlatos szigorúan adni a véreket üres gyomorra.
  • Meghozatala előtt kenetet a húgycső vagy a méhnyak kell három napon belül, hogy tartózkodjanak a szexuális aktivitást, hogy az elemzés nem használt legalább egy hónap múlva vége az antibiotikumos kezelés, különben az eredmény lehet fals pozitív. A PCR módszer egy halott kórokozó DNS-jét is feltárja, ezért a teljes sejtmegújítás után jobb a teszt.
  • A vizeletet steril tartályban kell összegyűjteni.

A válasz általában pár nap alatt készen áll a laboratóriumi képességek függvényében.

Az eredmények magyarázata

Minőségi technikát alkalmazva csak 2 válasz lehet: pozitív vagy negatív. A pozitív eredmény azt jelzi, hogy egy kiválasztott mikroorganizmus jelen van a mintában, a negatív eredmény kimutatja a hiányt.

A kvantitatív eredményt a kezelőorvosnak értékelnie kell, minden egyes esetben egyedi megközelítést kell alkalmazni. A szakember, figyelembe véve a kapott választ, megoldja a kezelés szükségességét, a készítmények adagolását, meghatározza a betegség formáját és stádiumát.

Az eredmény megfejtése után a genetikai profil (a thrombophilia, az emlőrákra való hajlam) meghatározása során az orvos fel tudja mérni a betegség kockázatának mértékét, valamint speciális étrendet és megelőző intézkedéseket ír elő.

Hasznos volt az oldal? Ossza meg a kedvenc közösségi oldaladon!

Hogyan történik a PCR elemzés: eljárás leírása

A polimeráz láncreakció már 30 éve ismert. Sok területen széles körben használják, a régészetektől a genetikáig.

Ez az a PCR módszer, amely segít az apaság megállapításában, de leggyakrabban az emberi szervezet különböző fertőző betegségeinek azonosítására szolgál.

Hogyan történik a PCR elemzés, és mi az? Megpróbálunk részletesen megválaszolni ezeket a kérdéseket.

PCR elemzés - mi ez?

Polimeráz láncreakció (PCR) - precíziós molekuláris genetikai diagnózis, amely lehetővé teszi egy személy azonosítására különböző fertőző és örökletes betegségek, akut és krónikus szakaszában és jól, mielőtt a betegség megnyilvánulhat.

A PCR módszer teljesen specifikus, és helyesen hajtja végre a hamis pozitív eredményt. Vagyis, ha nincs fertőzés, az elemzés soha nem fogja megmutatni, hogy ez az. Ezért most nagyon gyakran a diagnózis kimutatására a PTSR analízis továbbadja a kezdeményező és annak természetét.

A polimeráz láncreakciót (PCR) 1983-ban Cary Muillis (USA) fejlesztette ki, amelyhez 1993-ban elnyerte a kémiai Nobel-díjat.

Mi a módszer előnye?

A módszerrel végzett diagnózis lehetővé teszi a kórokozó közvetlen megtalálását a génben, amelyet a vizsgált anyagok tartalmaznak. Ez a legpontosabb elemzés a szexuális fertőzésekre, rejtett fertőzésekre, különböző szexuális úton terjedő betegségekre.

A PCR-diagnosztika eltérései a laboratóriumi kutatás más módszereitől a következők:

  • a módszer célja a kórokozó felismerése;
  • a PCR módszerrel végzett diagnózis sokoldalú: a kórokozók felismerése több;
  • csak egy beteg biológiai mintája elegendő;
  • a módszer nagy érzékenységgel rendelkezik, és nincs más keresztreakció.

Emellett a PCR-diagnosztika előnye, hogy a páciens bármely biológiai anyaga alkalmas a vérben, a nemi szervekből, a vizeletből, a spermából származó váladékokból.

Milyen fertőzések képesek kimutatni a PCR kenetét?

A szervezetben számos fertőzés kórokozója lehet, ez magában foglalja a "rejtett", amely hosszú időn keresztül nem jelentkezik semmilyen módon.

A PCR kimutatásának vizsgálata ilyen fertőzésekre utal:

A PCR tesztanyaga általában köpet, nyál, vizelet, vér. Az elemzés előtt gondosan fel kell készülnie rá, miután előzetes konzultációt kapott az orvosával.

A PCR vérét általában üres gyomorban adják. Jó eredmények mutatják az elemzést, amikor a vizsgálat anyagát a cervicalis csatornából vagy a húgycsőből vettük. Ebben az esetben a PCR diagnosztikát legkésőbb egy nappal a nemi közösülés után kell elvégezni.

A PCR típusai

A PCR-t számos területen használják elemzéshez és tudományos kísérletekhez. Számos elemzési módszer létezik:

  1. Fordított transzkripciós PCR (RT-PCR) - ismert RNS-könyvtárból származó ismert szekvencia amplifikálására, izolálására vagy azonosítására használják.
  2. Invertált PCR (Inverse PCR (angol)) - akkor használatos, ha csak egy kis terület található a kívánt sorrendben. Ez a módszer különösen akkor hasznos, amikor szükséges a szomszédos szekvenciák meghatározása a DNS genomba helyezését követően.
  3. A beágyazott PCR (Nested PCR (English)) - a melléktermékek számának csökkentésére szolgál. Két pár láncindítót használunk, és két egymást követő reakciót hajtunk végre.
  4. Az aszimmetrikus PCR-t (angol aszimmetrikus PCR) végezzük, amikor szükségessé válik az eredeti DNS egyik láncának elsajátítása. A szekvenálás és a hibridizációs analízis néhány módszere alkalmazható.
  5. Kvantitatív PCR (kvantitatív PCR, Q-PCR (angol)) vagy valós idejű PCR-t alkalmazunk közvetlenül egy specifikus PCR-termék mennyiségének mérésére az egyes reakcióciklusokban.
  6. Step PCR (Touchdown PCR (angolul)) - ez a megközelítés csökkenti a nem specifikus primerkötés hatását.
  7. Csoportspecifikus PCR (PCR) - PCR a kapcsolódó szekvenciákon belül egy vagy különböző fajok között, konzervatív primerek alkalmazásával ezekhez a szekvenciákhoz.

Ha a mátrix nukleotidszekvenciája részben ismert vagy ismeretlen, akkor degenerált primerek alkalmazhatók, amelyek szekvenciája olyan degenerált pozíciókat tartalmaz, amelyekben bármely bázis megtalálható. Például a primer szekvencia lehet:... ATH..., ahol H jelentése A, T vagy C.

Milyen biológiai anyagokat vizsgálnak?

Számos biológiai folyadék és folyadék szolgálhat anyagként egy PCR-vizsgálatban, amelyben képes azonosítani egy idegen DNS-baktériumot vagy egy vírus DNS-ét vagy RNS-ét:

  1. Vizelet. Felhasználható a húgyúti fertőzés fertőzésére férfiaknál és a vizeletben a nőknél (férfiak esetében, vizeletanyagként alkalmazva, epitheliális kaparás helyett).
  2. Köpet. A tuberkulózis diagnózisára és ritkábban a chlamydia és mycoplasmosis légúti formáinak diagnosztizálására szolgál. A köpet 15-20 ml-es mennyiségét steril (egyszeri) injekciós üvegben gyűjtjük össze.
  3. Biológiai folyadékok. A prosztata lé, a mellhártya, a gerincvelő, a magzatvíz, az ízületi folyadék, a bronchoalveoláris mosás, a nyál a jelzések szerint kerülnek.
  4. A nyálkahártyák epitéliális kaparása. Általánosan használt diagnosztizálására szexuális úton terjedő betegségek (STD) mint a gonorrhoea, chlamydia, mikoplazmózis, ureaplasmosis, trichomoniasis, vaginosis, a herpesz és más érintő fertőzések nyálkahártyákat.
  5. Biopszia. Leggyakrabban a gyomor és a duodénum biopsziája a Helicobacter pylori fertőzés azonosítására.
  6. Vér, plazma, szérum. A hepatitis B, C, D, G, herpesz, CMV, HIV, humán gének PCR analízisére alkalmazható.

Hogyan készüljünk fel az elemzésre?

A PCR eredményének megbízhatósága közvetlenül függ attól, hogy pontosan mekkora a vizsgálati anyag szállítása. Az anyagot nem szabad szennyezni, különben a vizsgálat eredménye nem lesz objektív. A PCR-elemzés eljuttatása előtt a legfontosabb ajánlások a következő követelményeket tartalmazzák:

  1. A vizeletet reggel egy steril tartályban szállítjuk.
  2. A fertőzés vérvizsgálatát reggel üres gyomorra kell vinni.
  3. Nem szükséges a szexuális aktivitást egy nappal az elemzés előtt bemutatni.

Az elemzés eredményét a vizsgált eljárás után 1,5-2 napon belül elkészítjük. Vannak olyan helyzetek, amikor az eredmény ugyanazon a napon elkészíthető.

A KNK elemzésének magyarázata

A bemutatott kutatás értelmezési folyamatát az egyszerűség különbözteti meg. A PCR analízis eredményeit az anyag leadását követő 1,5-2 nap múlva érhetjük el. Egyes esetekben az eredmény készen áll az első napon, és ez az, amit jelenthetnek:

  • Negatív eredmény azt mutatja, hogy a keresett fertőző ágens nincs jelen a diagnosztizált anyagban.
  • A PCR pozitív azt jelenti, hogy a kórokozó DNS-je vagy RNS-je van az emberi szervezetben.

Bizonyos esetekben a mikroorganizmusok mennyiségi meghatározását végezzük. Ez különösen igaz az opportunista mikroorganizmusok által okozott betegségekre. Mivel ezek a baktériumok csak akkor mutatják negatív hatásukat, ha az összeg túlzott.

Emellett a kvantitatív PCR-analízis fontos a terápiás taktikák kiválasztásához és a vírusfertőzések, mint például a HIV és a hepatitis vírusok kezelésének szabályozásához.

Mennyire pontos a fertőzések PCR-diagnózisa?

A PCR-eljárást nagy pontosság, specifitás és érzékenység jellemzi. Ez azt jelenti, hogy ez az elemzés képes:

  • pontosan meghatározza a fertőzés jelenlétét vagy hiányát;
  • Pontosan jelezze, hogy pontosan mi ez a fertőzés (specifitás);
  • A fertőzés kimutatása még a mikrobák nagyon alacsony DNS-tartalmánál a biológiai anyagban,
  • amelyet vizsgáltak (érzékenység).

PCR elemzés: ár és időzítés

Egy konkrét elemzés ára attól függ, hogy milyen fertőzést kell tesztelni. Hozzávetőleges árak és feltételek:

  1. STI: 300-500 rubel, feltételek - 1 nap;
  2. Epstein-Barr vírus, humán papillomavírus, herpesz, citomegalovírus: 300-500 dörzsölés, terms - 1 nap;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: minőségi elemzés 650 rubel, kvantitatív elemzés 2000 rubel. Feltételek - legfeljebb 5 napig;
  4. A hepatitis C vírus elleni antitestek összesen (Anti-HCV) - 420 rubel;
  5. Antitestek a hepatitis C vírushoz, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 dörzsölés, feltételek - 1 nap;
  7. HIV (antitestek és antigének) - 380 rubel;
  8. HIV RNS, minőségi szempontból - 3 500 rubel;
  9. HIV RNS mennyiségileg - 11 000 rubel.

Pénzt takaríthat meg, egy fix tesztcsomagot választhat. Az ilyen szolgáltatásokat a klinikák többsége biztosítja, ahol az elemzés a PRC módszerrel (in vitro, onklinikus stb.) Átvihető.


Kapcsolódó Cikkek Hepatitis