Hogyan történik a PCR elemzés: eljárás leírása

Share Tweet Pin it

A polimeráz láncreakció már 30 éve ismert. Sok területen széles körben használják, a régészetektől a genetikáig.

Ez az a PCR módszer, amely segít az apaság megállapításában, de leggyakrabban az emberi szervezet különböző fertőző betegségeinek azonosítására szolgál.

Hogyan történik a PCR elemzés, és mi az? Megpróbálunk részletesen megválaszolni ezeket a kérdéseket.

PCR elemzés - mi ez?

Polimeráz láncreakció (PCR) - precíziós molekuláris genetikai diagnózis, amely lehetővé teszi egy személy azonosítására különböző fertőző és örökletes betegségek, akut és krónikus szakaszában és jól, mielőtt a betegség megnyilvánulhat.

A PCR módszer teljesen specifikus, és helyesen hajtja végre a hamis pozitív eredményt. Vagyis, ha nincs fertőzés, az elemzés soha nem fogja megmutatni, hogy ez az. Ezért most nagyon gyakran a diagnózis kimutatására a PTSR analízis továbbadja a kezdeményező és annak természetét.

A polimeráz láncreakciót (PCR) 1983-ban Cary Muillis (USA) fejlesztette ki, amelyhez 1993-ban elnyerte a kémiai Nobel-díjat.

Mi a módszer előnye?

A módszerrel végzett diagnózis lehetővé teszi a kórokozó közvetlen megtalálását a génben, amelyet a vizsgált anyagok tartalmaznak. Ez a legpontosabb elemzés a szexuális fertőzésekre, rejtett fertőzésekre, különböző szexuális úton terjedő betegségekre.

A PCR-diagnosztika eltérései a laboratóriumi kutatás más módszereitől a következők:

  • a módszer célja a kórokozó felismerése;
  • a PCR módszerrel végzett diagnózis sokoldalú: a kórokozók felismerése több;
  • csak egy beteg biológiai mintája elegendő;
  • a módszer nagy érzékenységgel rendelkezik, és nincs más keresztreakció.

Emellett a PCR-diagnosztika előnye, hogy a páciens bármely biológiai anyaga alkalmas a vérben, a nemi szervekből, a vizeletből, a spermából származó váladékokból.

Milyen fertőzések képesek kimutatni a PCR kenetét?

A szervezetben számos fertőzés kórokozója lehet, ez magában foglalja a "rejtett", amely hosszú időn keresztül nem jelentkezik semmilyen módon.

A PCR kimutatásának vizsgálata ilyen fertőzésekre utal:

A PCR tesztanyaga általában köpet, nyál, vizelet, vér. Az elemzés előtt gondosan fel kell készülnie rá, miután előzetes konzultációt kapott az orvosával.

A PCR vérét általában üres gyomorban adják. Jó eredmények mutatják az elemzést, amikor a vizsgálat anyagát a cervicalis csatornából vagy a húgycsőből vettük. Ebben az esetben a PCR diagnosztikát legkésőbb egy nappal a nemi közösülés után kell elvégezni.

A PCR típusai

A PCR-t számos területen használják elemzéshez és tudományos kísérletekhez. Számos elemzési módszer létezik:

  1. Fordított transzkripciós PCR (RT-PCR) - ismert RNS-könyvtárból származó ismert szekvencia amplifikálására, izolálására vagy azonosítására használják.
  2. Invertált PCR (Inverse PCR (angol)) - akkor használatos, ha csak egy kis terület található a kívánt sorrendben. Ez a módszer különösen akkor hasznos, amikor szükséges a szomszédos szekvenciák meghatározása a DNS genomba helyezését követően.
  3. A beágyazott PCR (Nested PCR (English)) - a melléktermékek számának csökkentésére szolgál. Két pár láncindítót használunk, és két egymást követő reakciót hajtunk végre.
  4. Az aszimmetrikus PCR-t (angol aszimmetrikus PCR) végezzük, amikor szükségessé válik az eredeti DNS egyik láncának elsajátítása. A szekvenálás és a hibridizációs analízis néhány módszere alkalmazható.
  5. Kvantitatív PCR (kvantitatív PCR, Q-PCR (angol)) vagy valós idejű PCR-t alkalmazunk közvetlenül egy specifikus PCR-termék mennyiségének mérésére az egyes reakcióciklusokban.
  6. Step PCR (Touchdown PCR (angolul)) - ez a megközelítés csökkenti a nem specifikus primerkötés hatását.
  7. Csoportspecifikus PCR (PCR) - PCR a kapcsolódó szekvenciákon belül egy vagy különböző fajok között, konzervatív primerek alkalmazásával ezekhez a szekvenciákhoz.

Ha a mátrix nukleotidszekvenciája részben ismert vagy ismeretlen, akkor degenerált primerek alkalmazhatók, amelyek szekvenciája olyan degenerált pozíciókat tartalmaz, amelyekben bármely bázis megtalálható. Például a primer szekvencia lehet:... ATH..., ahol H jelentése A, T vagy C.

Milyen biológiai anyagokat vizsgálnak?

Számos biológiai folyadék és folyadék szolgálhat anyagként egy PCR-vizsgálatban, amelyben képes azonosítani egy idegen DNS-baktériumot vagy egy vírus DNS-ét vagy RNS-ét:

  1. Vizelet. Felhasználható a húgyúti fertőzés fertőzésére férfiaknál és a vizeletben a nőknél (férfiak esetében, vizeletanyagként alkalmazva, epitheliális kaparás helyett).
  2. Köpet. A tuberkulózis diagnózisára és ritkábban a chlamydia és mycoplasmosis légúti formáinak diagnosztizálására szolgál. A köpet 15-20 ml-es mennyiségét steril (egyszeri) injekciós üvegben gyűjtjük össze.
  3. Biológiai folyadékok. A prosztata lé, a mellhártya, a gerincvelő, a magzatvíz, az ízületi folyadék, a bronchoalveoláris mosás, a nyál a jelzések szerint kerülnek.
  4. A nyálkahártyák epitéliális kaparása. Általánosan használt diagnosztizálására szexuális úton terjedő betegségek (STD) mint a gonorrhoea, chlamydia, mikoplazmózis, ureaplasmosis, trichomoniasis, vaginosis, a herpesz és más érintő fertőzések nyálkahártyákat.
  5. Biopszia. Leggyakrabban a gyomor és a duodénum biopsziája a Helicobacter pylori fertőzés azonosítására.
  6. Vér, plazma, szérum. A hepatitis B, C, D, G, herpesz, CMV, HIV, humán gének PCR analízisére alkalmazható.

Hogyan készüljünk fel az elemzésre?

A PCR eredményének megbízhatósága közvetlenül függ attól, hogy pontosan mekkora a vizsgálati anyag szállítása. Az anyagot nem szabad szennyezni, különben a vizsgálat eredménye nem lesz objektív. A PCR-elemzés eljuttatása előtt a legfontosabb ajánlások a következő követelményeket tartalmazzák:

  1. A vizeletet reggel egy steril tartályban szállítjuk.
  2. A fertőzés vérvizsgálatát reggel üres gyomorra kell vinni.
  3. Nem szükséges a szexuális aktivitást egy nappal az elemzés előtt bemutatni.

Az elemzés eredményét a vizsgált eljárás után 1,5-2 napon belül elkészítjük. Vannak olyan helyzetek, amikor az eredmény ugyanazon a napon elkészíthető.

A KNK elemzésének magyarázata

A bemutatott kutatás értelmezési folyamatát az egyszerűség különbözteti meg. A PCR analízis eredményeit az anyag leadását követő 1,5-2 nap múlva érhetjük el. Egyes esetekben az eredmény készen áll az első napon, és ez az, amit jelenthetnek:

  • Negatív eredmény azt mutatja, hogy a keresett fertőző ágens nincs jelen a diagnosztizált anyagban.
  • A PCR pozitív azt jelenti, hogy a kórokozó DNS-je vagy RNS-je van az emberi szervezetben.

Bizonyos esetekben a mikroorganizmusok mennyiségi meghatározását végezzük. Ez különösen igaz az opportunista mikroorganizmusok által okozott betegségekre. Mivel ezek a baktériumok csak akkor mutatják negatív hatásukat, ha az összeg túlzott.

Emellett a kvantitatív PCR-analízis fontos a terápiás taktikák kiválasztásához és a vírusfertőzések, mint például a HIV és a hepatitis vírusok kezelésének szabályozásához.

Mennyire pontos a fertőzések PCR-diagnózisa?

A PCR-eljárást nagy pontosság, specifitás és érzékenység jellemzi. Ez azt jelenti, hogy ez az elemzés képes:

  • pontosan meghatározza a fertőzés jelenlétét vagy hiányát;
  • Pontosan jelezze, hogy pontosan mi ez a fertőzés (specifitás);
  • A fertőzés kimutatása még a mikrobák nagyon alacsony DNS-tartalmánál a biológiai anyagban,
  • amelyet vizsgáltak (érzékenység).

PCR elemzés: ár és időzítés

Egy konkrét elemzés ára attól függ, hogy milyen fertőzést kell tesztelni. Hozzávetőleges árak és feltételek:

  1. STI: 300-500 rubel, feltételek - 1 nap;
  2. Epstein-Barr vírus, humán papillomavírus, herpesz, citomegalovírus: 300-500 dörzsölés, terms - 1 nap;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: minőségi elemzés 650 rubel, kvantitatív elemzés 2000 rubel. Feltételek - legfeljebb 5 napig;
  4. A hepatitis C vírus elleni antitestek összesen (Anti-HCV) - 420 rubel;
  5. Antitestek a hepatitis C vírushoz, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 dörzsölés, feltételek - 1 nap;
  7. HIV (antitestek és antigének) - 380 rubel;
  8. HIV RNS, minőségi szempontból - 3 500 rubel;
  9. HIV RNS mennyiségileg - 11 000 rubel.

Pénzt takaríthat meg, egy fix tesztcsomagot választhat. Az ilyen szolgáltatásokat a klinikák többsége biztosítja, ahol az elemzés a PRC módszerrel (in vitro, onklinikus stb.) Átvihető.

PCR elemzés: mi ez?

A PCR-diagnosztika (polimeráz-láncreakció) a molekuláris biológiai kutatás egyik legmodernebb módszere, és van néhány előnye más módszerekkel szemben.

Nézzünk közelebb, PCR elemzés - mi ez?

A laboratóriumi vizsgálatok közül a PCR-módszert az egyik legpontosabbnak tekintik a vírusok vagy bakteriális szerek által okozott különböző betegségek diagnosztizálásához. Ezenkívül a PCR diagnosztika napról napra elérhetőbbé válik, és a fokozott specifikusság garantálja a pontos és helyes eredményeket, a hamis válaszok kivételével.

A polimeráz láncreakció egyszerûen megnövelheti a kórokozó DNS kívánt régióját a vizsgált anyagban.

A patogén DNS amplifikálásán túl ez a diagnosztikai módszer az apaság meghatározására, a gén klónozására, az örökletes betegségek és más betegségek azonosítására szolgál.

A polimeráz láncreakció egyszerûen megnövelheti a kórokozó DNS kívánt régióját a vizsgált anyagban

Milyen betegségek diagnosztizálhatók PCR-vel?

Tehát mi ez: PCR elemzés, és miért használják ezt a módszert? A szakember előírhat egy PCR-t a bakteriális vagy vírus eredetű, különböző fertőzések kimutatására. A PCR segítségével a krónikus vagy latens fertőzések felismerése is lehetséges. A PCR-analízis akkor is hatásos, ha az organizmus a kórokozó egyetlen sejtjét tartalmazza.

Abban az esetben PCR címzettjének azonosításához objektum genitális fertőzések lehetnek Chlamydia, Trichomonas, Candida, Mycoplasma, Ureaplasma, papilloma vírus és kórokozó gonorrhoea, Gardnerella.

A genitális traktus elváltozásai okozta kórokozó meghatározásához a PCR-elemzéshez használt anyagot a vaginából, a húgycsőből vagy a nyaki csatornából származó kenetet alkalmazzuk.

A nemi szerv traktusának károsodásaiban a kórokozó meghatározásához a PCR-elemzéshez szükséges anyagot a vaginából, a húgycsőből vagy a nyaki csatornából

A terhesség megtervezése előtt, vagy a leendő szülők esetében szükség van a PCR-diagnózis tesztelésére fertőző betegségek jelenlétére. Végtére is, a terhesség megtervezése egy nagyon fontos életszakasz egy jövőbeli anya és baba számára, ezért felelősséget kell vállalnia a fogantatásért. Ha azonban egy nő és egy férfi testében azonosították a fertőzés kórokozóit, jobb a terhesség tervezése a kezelés idején.

A genitális traktusfertőzéseken kívül más kórokozók is kimutathatók PCR-rel, például:

  • A B és C vírusok jelenléte a szervezetben: a PCR-analízis segít meghatározni a vírus típusát, amely a betegség klinikai megnyilvánulása előtt a hepatitisz okozója. a PCR módszer segíteni fogja a szakembert a betegség helyes kezelésének megválasztásában és annak hatékonyságának ellenőrzésében;
  • A tuberkulózis kórokozóinak jelenléte: ez a vizsgálati módszer azonosítja azokat a tuberkulózisformákat, amelyek nem képesek más laboratóriumi vizsgálatokat meghatározni; PCR előírása, ha egy személynek megfelelő tünete van, például a testhőmérséklet emelkedése, a gyulladásos folyamatok a légutakban kezdődnek, a tuberkulin tesztben pozitív reakció figyelhető meg;
  • Emberi immunhiány vírus;
  • Epstein-Barr vírus és cytomegalovírus;
  • Helicobacter.

A PCR használatával a B és C vírus kimutatható a testben

Hogyan történik a PCR elemzés?

A PCR-analízis bemutatásához meg kell tudnia, hogyan történik ez a vizsgálat.

A vizsgálat elvégzését követően az anyagot egy különleges készülékbe helyezzük, ahol speciális enzimeket helyezünk el, amelyek hozzájárulnak a genetikai anyag kialakulásához. Ezután a vírus DNS-jét és RNS-jét át kell másolni, amíg addig nem növekszik, amíg a betegség kórokozóját fel lehet azonosítani.

A vizsgálat anyaga elsősorban vér, de vizelet, garat tampon és egyéb anyagok is használatos.

A nők leggyakrabban reprodukálják a nyaki csatorna és a húgycső anyagát. Ebben az esetben a megfelelő eredmény érdekében nagyon fontos előkészíteni az eljárást. A képzés a következőket tartalmazza:

  • 3 nappal a PCR elemzését megelőzően egy nőnek tartózkodnia kell a nemi közösüléstől;
  • Az eljárás előtt ne vizelje;
  • A menstruáció vége után 4-5 nappal a vizsgálat előtt.

Érdemes megjegyezni, hogy nincs szükség speciális képzésre vérvételhez.

A vizsgálat anyaga elsősorban vér, de vizelet, garat tampon és egyéb anyagok is használatos

Válaszok a PCR-től

A válaszok dekódolása általában másnap készen áll. Csak két eredmény van: pozitív (ha van a fertőzés a szervezetben) és negatív (ha a kórokozó DNS-je nincs kimutatva).

A PCR-elemzés kérdésének megválaszolásakor egyértelműen kijelenthető, hogy a laboratóriumi vizsgálati módszer fontosságát nehéz túlbecsülni. Az ilyen diagnosztikák képesek szabályozni a vírusok és fertőzések előkészített kezelését, külön-külön hepatitis és HIV esetén.

Mi a PCR-re vonatkozó vérvizsgálat, és miért van szükség erre?

A fertőző betegségek - bakteriális és vírus - diagnosztizálása a kórokozók korai kimutatására irányul, amely lehetővé teszi számunkra, hogy korai és leghatékonyabb terápiát írjunk elő. A fertőzések diagnosztikájának legmodernebb módja a PCR vagy a polimeráz láncreakció. Tehát mi ez a módszer, és mi az?

A polimeráz reakció lényege

Bármely mikroorganizmus és vírus a szerkezetükben tartalmaz DNS-molekulákat vagy RNS-eket. Mindegyik vegyület egyedülálló, ezért ha nukleinsavat választ ki egy vérvizsgálat során gyermekeknél vagy felnőtteknél, abszolút pontossággal diagnosztizálhatja.

Sajnos a DNS koncentrációja vérmintákban vagy más biológiai anyagokban elég alacsony, és nem állapítható meg hagyományos diagnosztikai módszerekkel. Ennek a problémának a megoldására polimeráz láncreakciót találtunk.

A PCR lényege a vérminták speciális feldolgozása, aminek következtében nő a DNS-molekulák koncentrációja, amelynek meghatározása a jövőben lehetővé teszi a kórokozó típusának megállapítását és diagnosztizálását.

Hogyan vért adjanak a PCR-nek

Az elemzésre való felkészülés során be kell tartani az általános ajánlásokat: ne igyanak, és ne esznek közvetlenül a vérvizsgálat előtt. Bár lehetséges, hogy szigorúan tartsák be ezeket a követelményeket, hogy a vér ne vigye a PCR-hez, mivel a vizsgálat pontossága nem függ attól, hogy a vizsgált vagy az üres gyomrot vették-e.

Milyen betegségek mutathatók ki PCR-rel?

A PCR segítségével gyakorlatilag bármilyen vírusos és bakteriális betegséget azonosíthat. Az elemzéshez nemcsak vért, hanem más biológiai anyagokat is használnak: spermium, nyál, kenetek a húgycsőből és a méhnyakból. A vérvizsgálat tájékoztató jellegű lesz, ha egy adott betegség kórokozója egy személy vérébe kerül. Ezért a vér PCR-ét az alábbi betegségekre írják fel:

  • vírusos hepatitis A, B, C, D és TT;
  • citomegalovírus;
  • herpeszes fertőzés (herpes vírusok 1, 2 és 4 típusok);
  • HIV-fertőzés
  • enterovírusfertőzés;
  • herpes zoster;
  • rubeola;
  • toxoplazmózis;
  • fertőző mononucleosis;
  • listeriosis.

Ha figyelembe vesszük a biológiai anyagok PCR-vizsgálatának lehetőségét, akkor a PCR által kimutatott betegségek listáján a következőket kell tennünk:

Jelenleg különösen fontos a TORCH fertőzések terhes nő vérének PCR elemzése: citomegalovírus, toxoplazmózis, rubeola és herpeszvírus fertőzés. Ez annak köszönhető, hogy ezek a betegségek magzati fejlődési rendellenességekhez vezethetnek.

A PCR előnyei

  1. A diagnózis 100% -os pontossága - ha még több DNS-fragmens is van a vérben, akkor a PCR-t kimutatják, és pontos diagnózist fognak készíteni. Ez a módszer fő különbsége a diagnózis egyéb módszereitől - ELISA, általános vérvizsgálat és mások.
  2. Sajátosságai. A PCR lefolytatása során nincs olyan dolog, mint a hamis pozitív vagy hamis negatív eredmény. Ellentétben az enzim immunvizsgálattal (ELISA).
  3. A kórokozók egyidejű egyszerre több kórokozójának elemzésének lehetősége, amely a páciens számára kényelmes megoldást nyújt, nem kell többször elemezni.
  4. Gyorsaság. Nem szükséges izolálni és növekedni a kórokozó tápanyag-táptalajon, ahogyan azt bakteriológiai vizsgálatok során végzik. Az eredmény már készen áll az elemzés napján.
  5. A PCR segítségével a látens betegségek kórokozói azonosítottak, amikor a kórokozó jelen van a szervezetben, de még nem okozta a betegséget, vagy ha a páciens a fertőzés hordozója (hepatitis vagy HIV).
  6. Alacsony költség. A PCR analízis ára egy kórokozóra 250-500 rubel. Valamivel drágább a vírusok félkvantitatív elemzése - körülbelül 1000 rubel.

Az elemzés hátrányai

A PCR egy csúcstechnológiai kutatási módszer, és nagy igényeket támaszt a laboratórium felszerelésével szemben. A helyiség, ahol az elemzést elvégzik, feltétlenül biológiai szűrővel kell felszerelni, mivel a levegőben mindig vannak olyan bőrrészecskék, amelyek a DNS-molekulákat tartalmazzák. A bioméretekkel való munkavégzés technikájának be nem tartása téves eredményhez vezethet.

Vérvizsgálat - felnőttek dekódolása (PCR)

A tanulmány eredményeinek értelmezése nem nehéz, mert nincs PCR standard vérvizsgálati standard. Az eredményformában csak két kifejezés található:

  • negatív eredmény - az észlelt kórokozót nem sikerült kimutatni;
  • pozitív eredmény - a szervezetben van egy ilyen betegség.

Tudnia kell, hogy a PCR pozitív lehet még a betegség klinikai tüneteinek hiányában is! A PCR vérvizsgálatának értelmezése gyermekek esetében nem különbözik a felnőttekétól.

Ki kell tennie a PCR tesztet

Bármelyik ember adhat vért a kutatáshoz. A vizsgálat közvetlen jelzése a szexuális úton terjedő fertőzések gyanúja (chlamydia, gardnerellez, HIV-fertőzés). Szokatlan, nem védett szexuális együttlét esetén csak a PCR segíti a korai szakaszban történő diagnosztizálást, ha valaki betegségben szenvedett. A TORCH-komplex kötelező vérét terhes nők adják. És a nők is csak terhességet terveznek.

Bár a PCR a leghatékonyabb módszer a diagnózisra, nem érdemes arra összpontosítani. A beteg minden betegségének vizsgálatához integrált megközelítés szükséges. Ha a lánc-polimeráz reakció lehetővé teszi a kórokozó felismerését, a szerológiai vizsgálat lehetővé teszi a kezelés hatékonyságának, a szervezet kórokozójának és gyógyszerének reakcióját. Minden orvosnak meg kell adnia az összes vizsgát.

Ha meg szeretné nézni, hogyan történik a PCR vérvizsgálata, akkor megtekintheti ezt a videókeresést:

Gudkov Roman, újraélesztő orvos

17.400 összesen nézet, 1 megtekintés ma

PCR-diagnosztika: mi a bioméretű és preparatív alapú, hogyan csinálják, milyen betegségekre alkalmas?

PCR (polimeráz láncreakció) - a molekuláris biológia elérése, a klinikai laboratóriumi diagnosztika egyik legfontosabb módszere a 20. és a 21. század elején, ami nagy jelentőséggel bír az orvostudomány különböző területein.

Sokan megzavarják az ELISA-val (enzim immunoassay), amely általában érthető. Némileg hasonlítanak valamilyen módon, mivel egy feladatot végeznek - a fertőző ágenseknek az emberi testbe való behatolásával okozott kóros állapotok keresése. Mindazonáltal különbségek vannak közöttük. Az ELISA például mikroorganizmusok tartózkodásának nyomai, vagyis antitestek (AT), és A PCR megtalálja a kórokozó "szentségét" - DNS-t vagy RNS-t (nukleinsavak), amelyek életet adnak az emberi test mikroszkopikus lényeinek.

Az "ellenség" nukleinsavai, amelyek megtalálhatók minden biológiai folyadékban és testszövetben, rendelkezésre állnak a PCR módszerekhez, Ez az elemzés nem kötelezi Önt arra, hogy csak vénás vért alkalmazzon tesztként, nyálat, ürülést a nemi szervektől, a köpetből vagy más környezetből, a betegséggel kapcsolatos információkat hordoz. A kutatási anyag megválasztása továbbra is az orvossal történik, aki előírja ezt vagy azt a patológiát, és tudja, hogy melyik közeg sokkal informatívabb ilyen esetekben.

Mi a polimeráz láncreakció lényege?

A PCR-vizsgálat a molekuláris biológia eredményessége és nagyszerű eredménye. Ez egy olyan módszer, amely egy idegen genetikai anyag (genom) DNS vagy RNS kistérségeit felismeri, képes felismerni az egyéni mikroorganizmus-fajok sajátosságait, anélkül, hogy mással összekeverné. Hogyan működik a PCR módszer és hogyan képes visszaállítani a fertőző sejt viselkedésének képét az élő szervezetben?

PCR eljárás

Tehát a nukleinsav egy töredékét találjuk, de ez egy, és a reakcióhoz nyilvánvalóan nem elég, tehát kódolt (másolt). Azonban a további eljáráshoz nagyszámú ilyen kistérségre van szükség, amely biztosítja a sokszorosítását új DNS-szegmensek (replikáció) kitöltésével, amelyek megegyeznek a talált fragmentummal. A szaporodás egy nukleinsav természetes és szerves tulajdonsága, amelyet újra szaporítanak enzim polimeráz még az élő szervezeten kívül is (egy kémcsőben, amely lebomlik), és sok klónt alkot, vagyis megy láncreakció. A klónok egyre többen lesznek, de csak azok, amelyekben a kutató érdekli. Ezért fontos, hogy egy "tiszta", anélkül, hogy idegen anyagelemzést, és a vizsgálatot, hogy vezessen nagyon óvatosan.

Tekintettel a polimeráz-láncreakció felsorolt ​​képességeire, kitalálni, hogy miért különbözik ilyen könnyen az ureaplasmától a mycoplasmától, vagy mindegyiktől a klamiditól.

Így, még ha a több millió emberi test sejtek eltévedni nem az élő vírust, de csak egy kicsit az ő DNS-t, a PCR ha semmi akadálya annak, talán, hogy megbirkózzon a feladattal, és beszámol a jelenléte „kívülállók” a pozitív eredményt. Ez a PCR lényege és fő előnye.

Előnyök és hátrányok

A PCR diagnosztikát végző laboratórium rendelkezik a legmagasabb követelményekkel a berendezések, a tesztrendszerek és az orvosi személyzet képesítésével kapcsolatban. Ez egy olyan csúcstechnológiai laboratórium, amely rendkívül érzékeny és nagyon specifikus reagensekkel rendelkezik, így nincs különösebb hátránya. Hacsak nem ad pozitív eredményt a klinikai megnyilvánulások hiányában, és ezáltal a klinikát egy dilemma előtt teszi: érdemes kezelni a kezelést vagy sem?

Az orvos, aki figyeli a beteget, kétségbe vonja a vizsgálati eredmények megbízhatóságát, mivel nem látja a betegség jeleit. De mégis, a PCR-rendszer nagyfokú érzékenysége miatt nem szabad elfelejteni, hogy a kórokozót még a preklinikai szakaszban is felismeri, és ebben az esetben a pozitív eredmény sokkal előnyösebb, mint hátrány. Ebből kiindulva a kezelőorvosnak döntenie kell a terápia célszerűségéről, figyelembe véve az "érvelés" és "ellen" egyéb érveket.

A polimeráz láncreakcióval járó diagnosztika előnyei nyilvánvalóak:

  • Nagyfokú specificitás, elérve a 100% -ot, mivel a kiválasztott mintában jelen van egy adott szervezetben rejlő nukleinsav részecskék, de emberekre idegen;
  • Nagy teljesítmény, mert a PCR egy csúcstechnikailag automatizált technika, amely lehetővé teszi a vizsgálat elvégzését az anyag felvételének napján, és így a beteg megszabadul a felesleges aggodalmaktól;
  • A PCR, amely egyetlen mintán dolgozik, számos vizsgálatot végezhetszámos kórokozót felismerni, ha ilyen megbízatást kap. Például, a diagnózis az chlamydia-fertőzés, ahol PCR utal, hogy a alapvető módszerek, valamint a chlamydia, Neisseria lehet kimutatni, és (gonokokkuszt) - kórokozója a gonorrhoea. Ráadásul az eredmények megbízhatósága nem tükröződik negatívan;
  • PCR tesztelésveszélyes mikroorganizmusok az inkubációs időszakban, amikor még nem sikerült jelentős kárt okozni a szervezetben, vagyis a korai diagnózis figyelmeztet a kóros folyamat jövőbeli fejlődésére, ami lehetővé teszi, hogy felkészüljenek rá, és teljesen készen álljanak.

Ezen túlmenően, annak érdekében, hogy a félreértések elkerülése végett, ami néha a diagnózis, PCR védi magát az a tény, hogy az eredmények lehet rögzíteni (fotózás, számítógépes), annak érdekében, hogy használja őket, hogy szakértő, ha szükséges.

A PCR-válaszok normái negatívak, ami a külföldi nukleinsavak fragmentumának hiányát jelzi, a pozitív válasz a fertőzés jelenlétét jelzi a szervezetben, a számértékek a vírus állapotát és koncentrációját jelzik a vizsgálat idején. Az elemzés teljes átiratát azonban egy olyan orvos végzi, aki külön tanulmányt végzett a "PCR" témában. Az eredmények értelmezésének próbálkozása önmagában nincs értelme, mert lehetséges, hogy valószínűleg megtörténik, félreértik és előre aggódnak.

Mi a "fél" a PCR-től, mit tud, és hogyan készít fel erre a célra?

Mint minden más tanulmányban, néha a teszt eredmények hamis-pozitívak vagy hamis-negatívak, ahol a PCR nem kivétel. Ez a következő esetekben fordulhat elő:

  1. A folyamat zavarása a reakció egyik szakaszában;
  2. Az anyaggyűjtés, tárolás vagy szállítás szabályainak betartásának elmulasztása;
  3. Külföldi szennyeződések jelenléte az anyagban.

Ez arra utal, hogy a fertőzések PCR-diagnózisát óvatosan, gondosan és óvatosan kell megközelíteni, különben az anyag mintái megváltoztathatják strukturális szerkezetüket, vagy akár összeomolhatják.

A PCR diagnosztika szakaszai. A hamis eredmények a tanulmány bármely szakaszában jogsértéseket okozhatnak

A fertőzések PCR-diagnosztikája az egyéb laboratóriumi módszerek között az "arany standardok" kategóriájába tartozik, így számos betegség kórokozóinak keresésére használható, amelyek első látásra nincsenek közösek egymással:

  • Különböző lokalizációk tuberkulózisa, tüdőgyulladás (ideértve az atipikus, a klamidia okozta);
  • Gyermekek fertőzései (kanyaró rubeola, parotitis, kanyaró);
  • diftéria;
  • szalmonellózistól
  • Zoonózisos fertőző betegség - listerózis (a betegséget a nyirokcsomók, központi idegrendszer, belső szervek részvételével járó különböző tünetek jellemzik);
  • Az Epstein-Barr vírus (fertőző mononukleózis stb.) Behatolásával járó betegségek;
  • Papillomovírus fertőzés által kiváltott onkológiai patológia (HPV és típusai);
  • Borreliosis (Lyme-kór, kullancs-borús encephalitis);
  • Helicobacter pylori fertőzés, melyet a Helicobacter pylori mikrobák okoznak az emberi gyomorban. Bebizonyosodott, hogy a Helicobacter a gyomor vagy a nyombél daganatának kialakulását okozza;
  • A kandidiák és szinte minden STD.

PCR diagnózis fertőzések, szexuális úton terjedő betegségek, különös jelentőségű, mivel ezek a betegségek az általa okozott, gyakran hosszú ideig végzett nélkül semmiféle klinikai tüneteket, de a terhesség alatt egyre aktív, és így veszélyezteti egészségét, és még a gyermek életében. Hasonlóképpen viselkednek és TORCH-fertőzések. Néhány közülük ("fáklya") egyidejűleg kapcsolódik az STI-khez, ezért utóbbiak részletesebb megfontolásra szorulnak. Az olvasó képes lesz megismerkedni a legelterjedtebb módszerekkel a cikk következő részeiben.

Hogyan kell felkészülni a megbízható eredmény elérésére?

Egyszerre észre fogjuk venni, hogy a PTSR-re való felkészülés elég egyszerű, a páciens minden olyan különleges erőfeszítése, amely nem igényel. Csak három egyszerű feladatot kell elvégezni:

  1. Ne végezzen szexuális kapcsolatot 24 órával a vizsgálat megkezdése előtt;
  2. A vénák vérének összegyűjtésére és elemzésére üres gyomorra van szükség, és mellesleg nem is tudsz inni;
  3. A vizelet átadása az éjszaka után (reggel - a steril edényben, amelyet egy nappal a gyógyszertárban vásárolt).

A PCR bármely biológiai környezetben képes működni

A PCR módszer nem "vérszomjas", ezért elfogadja a feltételezett fertőző ágenset tartalmazó biológiai táptalajt. választás - mit kell keresni a kutatáshoz, az orvos marad.

Így egy vérvizsgálattól eltérő szerrel történő keresés (bár illeszkedik, és a legtöbb esetben egy másik anyaggal párhuzamosan történik), használhatja a következőket:

  • Kenet (az urogenitális traktus kiválasztódása);
  • Megkarcolása a száj nyálkahártyáján, kötőhártya, orr, a torok, a genitális traktus (nők venni a méhnyak és a hüvely, a férfiak - a húgycső);
  • nyál;
  • sperma;
  • Prosztata lé;
  • Placenta szövetek és magzatvíz (amniotikus folyadék);
  • Vizelet üledék (centrifugálás után), például bizonyos STI-k és mycobacteriumok tuberkulózisának azonosítására;
  • Köpet és pleurális folyadék ugyanarra a célra;
  • váladékok;
  • Cerebrospinalis folyadék CNS fertőző betegség gyanúja esetén;
  • Biopsziás anyag (biopszia), májból, 12 nyombélből, gyomorból stb.

A fenti szeretnék hozzátenni, hogy vizsgálati anyagot minden esetben, még a karcolások és a kibocsátás elég lesz, mivel a vizsgálat PCR nagy mennyiségű nem igényel elemzése hiányzik, és néhány mikroliter, amelyeket jellemzően egy mikrocsőhöz típus „Eppendorf”, és elküldte a tanulmány.

Betegségek és a PCR alkalmazása

HIV és polimeráz láncreakció

Általában, ha pozitív immunoblot eredmények esetén névtelen vizsgálatot végeznek, a HIV-fertőzés diagnózisát újra megismételjük. Ha a diagnózis megerősítést nyer, a betegnek további vizsgálatokra van szükség:

  1. A CD lymphocyták számának abszolút értékeivel végzett immunológiai reakciók meghatározása4 (Immunsejtek - T-segítők vagy asszisztens), aki megfertőződik az első helyen, akkor elveszítik az alapvető tulajdonságait és nem tud különbséget tenni a „saját” és az idegen”. A vírus vér RNS plazmájában keringenek, és a test normál sejtjeibe kerülnek, és nem reagálnak rájuk;
  2. A vírus RNS PCR-módszerrel történő kimutatása és a vírusrészecskék koncentrációjának kiszámítása a kóros állapot, a kóros folyamat súlyossága és a prognózis megállapítása érdekében, figyelembe véve ezeket az adatokat. Természetesen a "norm" szó ebben a tervben nem létezik, mivel a reakció mindig pozitív, és a digitális értékek értelmezése az orvos hatáskörébe tartozik.

PCR és hepatitis

A PCR módszere azonosítani tudja a hepatitisz kórokozókat, leggyakrabban a vizsgálatot a hepatitis C diagnosztizálására használják, amelyet más módszerek nem megfelelően definiálnak.

A hepatitis C vírusa (RNS-tartalmú) a HIV-nek az emberi testben tapasztalt viselkedését idézi. Kiékelődési genomba májsejtek (májsejtekben), ott is marad, várja a szárnyak, amelyek akkor is előfordulhat, 2 év után, legalább 20 éves, így az orvosok nevezte „szelíd gyilkos”. A hepatitis C rosszindulatú folyamat kialakulását eredményezi a máj parenchyma kialakulásában, ami a késői szakaszokban nyilvánul meg. Mindezek az események az immunrendszert nem veszik észre, a májgyulladás vírusát. Igaz, hogy bizonyos mennyiségben a vírus antitesteket termelnek, de nem adnak megfelelő védekezést. ELISA diagnosztizálására hepatitis C nem túl informatív, mert azt jelzi, hogy a vírus nyomait, mintha elment - nem ismert. A HCV esetében öngyógyító esetek ismertek, míg a vírus ellenes antitestek továbbra is fennmaradnak, és továbbra is életre keltik (immunológiai memória). PCR jóval antitestek képződését, és képes észlelni vírusrészecske után 1-1,5 héttel, míg az AT jelenhetnek meg a tartományban 2 és hat hónap

PCR diagnózis gyanúja mértéktelen hepatitis C vírus az emberi szervezetben a legjobb módszer a vizsgálat, mert egyedül képes felismerni a jelenléte a „Pályázat ellenség” a vérben vagy biopszia a máj a beteg.

Néha azonban vannak olyan esetek, amikor az AT-k pozitívak, és a PCR-eredmény negatív. Ez néha nagyon kevés vírussal fordul elő, vagy ha a májban "nyugvó", anélkül, hogy elhagyná a véráramot. Az igazság megtalálásához a pácienst újra elemzik, és néha nem egyedül.

Papillomovírusfertőzés

HPV (humán papilloma vírus), kivéve, ha van egy öngyógyító, akkor is, nem bizonyítja önmagában hosszú maradni a gazda, aki nem is tud róla, mert nem volt lehetséges, hogy nem a PCR, és a tünetek nem voltak jelen. Azonban a papillomovírus fertőzés jelenléte, bár látens, messze nem közömbös az emberi egészségre nézve, ahol a rákot okozó vírusok bizonyos típusa különösen veszélyes (16, 18 típus).

HPV gyakran szenved a női lakosságának fele, mivel a vírus szereti a női reproduktív rendszer, és különösen - a méhnyak, ahol bizonyos típusú vírusok hozzájárulnak diszpláziás folyamatok, majd a méhnyakrák, ha nem kezelik diszplázia és szabadítsa fel egy vírus. Tehát, a polimeráz-láncreakció kimutatására virális DNS, majd jelzi, „rossz” vagy „jó” (onkogén vagy nem-onkogén) típusú telepedett egy női test.

Egyéb STI és TORCH fertőzések

Nyilvánvaló, hogy a polimeráz-láncreakció megtalálható bármely idegen szerkezet, amely a nukleinsavak, így ez a vizsgálat kimutatására alkalmas a szexuális úton terjedő betegségek és TORCH-fertőzések, azonban ez nem mindig használják. Miért, mondjuk, ilyen drága tanulmányokat végez a Trichomonas vagy a gonorrhoea kimutatására, ha vannak megfizethetőbbek és olcsóbbak?

A TORCH fertőzések és az STI-k annyira összefüggenek egymással, hogy néha nehéz meghatározni, hogy melyik csoportot kell egy vagy másik kórokozónak tulajdonítani. Ezek általában nehéz lehet megérteni, mert ez meglehetősen változatos csoportját mikroorganizmusok, amelyek szexuális úton mindig, vagy csak bizonyos feltételek mellett (immunhiányos állapotok), és érdekes lehet csak a terhesség alatt, mert a lehetséges negatív hatása a pályán, és a magzatra.

A PCR a rejtett fertőzések kimutatásának fő módja

A klinikai megnyilvánulások kialakulásának középpontjában különböző kórokozók állnak rendelkezésre, amelyek csak PCR-kkel találhatók meg, ami fő feladata néha ELISA-val, és néha mint az egyetlen megerősítő teszt, különösen akkor, ha a betegség tünetei hiányoznak. Az ilyen nehéz helyzet polimikrobiális fertőzést okozhat, amely az explicit kórokozók mellett opportunista kórokozókat is tartalmaz.

A genitális terület gyulladásos megbetegedéseinél szenvedő férfiakban például urethritis, chlamydia, ureaplasma és mycoplasma gyakran észlelhető. Ugyanezek a fajok veszélyeztetik a női testet is. Azok, akik ismerik a hűtlenség a chlamydia és a szemébe nézett, emlékezni fog, hogy milyen nehéz ez, hogy megtalálja és felismeri, így az elemzés által gyártott PCR chlamydia, különösen megbízható, elrejtés után a sejtben nagyon kis méretű parazita viselkedése finoman és kárt okozott, hogy mindig titokban.

Az ureaplazmát gyakran kezelik mikoplazmával együtt. És nem véletlen. Ezek a fajok, mint a chlamydia, nem utalnak sem vírusokra, sem baktériumokra, sejteken belül élnek és STI-khez tartoznak, bár az egészséges testben való jelenléte szintén nem ritka. Így annak érdekében, hogy megkülönböztessük az egészséges hordozói egy beteg embernek szüksége van speciális technikák, amelyek PCR tekinthető a legmegbízhatóbb, mert köszönhetően a sajátosságait szerkezetének és viselkedésének ezen mikroorganizmusok, más tanulmányok hatástalanok.

Ami a herpeszvírust (1, 2) és a citomegalovírust illeti, amely szintén a herpeszvírus (5-ös típus) tartozik, a helyzet itt is kétértelmű. Fertőzés a világ népességének közel 100% -os, így ebben az esetben nagyon fontos, hogy a vírus azonosítása és az adagját, ami különösen fontos szerepet játszik a terhesség, mint egy felnőtt, a vírus gyökeret eresztett a testében, gyakran nem okoz gondot, és a betegség tünetei nem.

Ezért nem szabad figyelmen kívül hagyni az orvos által felírt, mint egy felmérést, mert bizonyos esetekben, a polimeráz láncreakció elengedhetetlen és szükséges eljárás a laboratóriumi diagnosztika, amely véd a súlyos szövődmények, és nem csak a nők, hanem a fiatal, meg nem született, ember.

Végezetül szeretném megjegyezni, hogy egy ilyen csodálatos módszer, mint a PCR, már több mint 30 éve szolgálja az emberiséget. Ugyanakkor a teszt feladatai nem korlátozódnak a fertőző ágensek felkutatására. A molekuláris biológia alapján született polimeráz láncreakció elválaszthatatlanul kapcsolódik a genetikához sikeresen használt kriminológia az identitás azonosításához, az állatorvos-orvoslásban az orvostudományban, az állatorvos-orvoslásban, ha az állatklinika lehetősége van költséges felszerelés beszerzésére, valamint más területeken (ipar, mezőgazdaság stb.).

Mi a PCR?

Polimeráz láncreakció (PCR, PCR) amelyet 1983-ban Cary Muillis (amerikai tudós) talált fel. Ezt követően megkapta a Nobel-díjat a találmányra. Jelenleg a PCR-diagnosztika az egyik legpontosabb és legérzékenyebb módszer a fertőző betegségek diagnosztizálására.

Polimeráz láncreakció (PCR) - a molekuláris biológia kísérleti módszere, amely a nukleinsav (DNS) egyes fragmenseinek kis koncentrációját jelentősen növeli egy biológiai anyagban (mintában).

A PCR módszer középpontjában a DNS specifikus régiójának többszörös megduplázása enzimekkel mesterséges körülmények között (in vitro). Ennek eredményeképpen a DNS mennyisége elegendő, elegendő a vizuális érzékeléshez. Ebben az esetben csak az adott körülményeket kielégítő részt másolják, és csak akkor, ha jelen van a vizsgált mintában.

Emellett egyszerűen számának növelése DNS másolat (ezt a folyamatot nevezik amplifikáció), PCR lehetővé teszi sok más manipuláció a genetikai anyag (a mutációk bevitelével, splice DNS fragmentumok), és széles körben használják a biológiai és orvosi gyakorlatban például, a diagnózis (genetikai, fertőző), az apaság megállapítására, a gének klónozására, mutációk bevezetésére, új gének izolálására.

Specifikusság és alkalmazás

PCR segítségével diagnosztizálják a jelenléte hosszú növekedési kórokozók, anélkül, hogy időigényes mikrobiológiai módszerekkel, ami különösen fontos a nőgyógyászati ​​és urológiai diagnosztizálására urogenitális fertőzések, nemi úton terjedő fertőzések (nemi betegségek).

Továbbá, ez a módszer végzik diagnosztizálására vírusos fertőzések, mint például a hepatitis, HIV, stb a módszer érzékenysége jelentősen felülmúlja a immunohomicheskih és mikrobiológiai módszerek, és a módszer elvét diagnosztizálására jelenlétében fertőzés jelentős antigenikus variációt.

A PCR PCR-specifikussága minden vírus-, klamidia-, mycoplasma-, ureaplasma- és a legtöbb egyéb bakteriális fertőzés esetében akár 100% -os is lehet. A PCR módszer lehetővé teszi akár egyetlen baktérium vagy vírus sejt kimutatását is. A PCR-diagnosztika felismeri a fertőző betegségek kórokozóinak jelenlétét abban az esetben, amikor más módszerekkel (immunológiai, bakteriológiai, mikroszkópos) nem lehetséges.

PCR eljárás különösen hatásos a diagnózist megnehezíti tenyésztjük, műveletlen és rejtett formák meglévő mikroorganizmusok, amelyek általában találkozott a látens és krónikus fertőzések, mivel ez a módszer elkerüli a nehézségeket tenyésztésével kapcsolatos E mikroorganizmusok in vitro.

A PCR-diagnosztika alkalmazása nagyon hatásos a nagy antigén variabilitással és az intracelluláris parazitákkal szembeni kórokozókkal szemben. PCR kimutatása nemcsak az lehetséges kórokozók klinikai anyagból kapott a beteg, hanem az anyagokból származó tárgyak a környezet (víz, talaj, stb. D.). Az urológiai és nőgyógyászati ​​gyakorlatban - kimutatására chlamydia, ureaplasmosis, gonorrhea, herpesz, gardnerelloza, Mycoplasma fertőzés, a HPV - humán papillomavírus; a pulmonológia - a vírus- és bakteriális tüdőgyulladás, a tuberkulózis differenciál diagnosztizálására; a gasztroenterológiában - a Helicobacteriosis azonosítására; a fertőző betegségek klinikáján - kifejezett módszerként szalmonella, diftéria, vírusos hepatitis B, C és G diagnosztizálására; a hematológiában - a citomegalovírus fertőzés kimutatására, onkovovusok.

A PCR specifitása a komplementer komplexek kialakulására alapul, amelyek a mátrix és a rövid láncú szintetikus oligonukleotidok között 18-30 betű hosszúságúak. Mindegyik primer összehasonlítható (komplementer) a kettős szálú mátrix egyik szálához, amely az amplifikált régió kezdetét és végét keretezi.

Miután a mátrixot hibridizáljuk a láncindítóval (lágyítás), ez utóbbi a DNS polimeráz primerjeként szolgál a mátrix komplementer szálának szintézisében.

  • DNS-templát, amely tartalmazza az amplifikálandó DNS-részt;
  • két, a kívánt fragmentum végeire komplementer primerek;
  • termostabil DNS polimeráz;
  • deoxinukleotid-trifoszfátok (A, G, C, T);
  • ionok Mg2 +, amelyek szükségesek a polimeráz munkájához;
  • pufferoldatot.

A PCR-t hőcserélőben végezzük, amely a csövek rendszeres hűtését és melegítését biztosítja, rendszerint legalább 0,1 ° C pontossággal. A reakcióelegy elpárologtatásának elkerülése érdekében a csőhöz magas forráspontú olajat, például vazelinolajat adunk. A specifikus enzimek hozzáadása növelheti a PCR-reakció hozamát.

Amikor a láncok elválnak, a hőmérsékletet le lehet csökkenteni úgy, hogy a primerek érintkezzenek az egyszálú sablonnal. Ezt a szakaszt nevezik hőkezelés. A lágyítási hőmérséklet a primerektől függ és általában 4-5 ° C-on az olvadáspontjuk alatt van kiválasztva. A színpadidő 0.5 - 2 perc.

A DNS-polimeráz reprodukálja a templátláncot, primer alkalmazásával. Ez a színpad nyúlás. A nyúlási hőmérséklet a polimeráztól függ. A leggyakrabban használt polimerázok a legaktívabbak 72 ° C-on. A nyúlási idő mind a DNS polimeráz típusától, mind az amplifikált fragmentum hosszúságától függ. Általában a nyúlási idő egy perc minden egyes ezer bázispárnak. Az összes ciklus befejezése után a végső megnyúlás további szakaszát végezzük az összes egyszálú fragmens kitöltéséhez. Ez a szakasz 10-15 percig tart.

szótár

DNS - dezoxiribonukleinsav - biológiai polimer, az egyik a két típusú nukleinsavak, amely tárolása, továbbítása generációról generációra és megvalósítása genetikai programja kialakítását és működését az élő szervezetek. A DNS fő szerepe a sejtekben az információ hosszú távú tárolása az RNS és a fehérjék szerkezetére.

RNS - Ribonukleinsav - biológiai polimer, amely kémiai szerkezetében közel van a DNS-hez. Az RNS molekulát ugyanabból a monomer egységekből - nukleotidokból, mint DNS-ből állítjuk elő. Természetben az RNS rendszerint egyetlen lánc formájában létezik. Egyes vírusokban az RNS a genetikai információ hordozója. A sejtben fontos szerepet játszik az információ átadásában a DNS-ről a fehérjére. Az RNS DNS-templáton szintetizálódik. Ezt a folyamatot transzkripciónak nevezik. A DNS tartalmaz-nak, ahol az információ szintéziséért felelős három típusú RNS különböző funkció szerint: információ vagy messenger RNS (mRNS), riboszóma (rRNS) és a közlekedési (tRNS). Mindhárom RNS-típus valamilyen módon részt vesz a fehérjeszintézisben. A proteinszintézisre vonatkozó információ azonban csak az mRNS-ben található.

nukleotidok - fő ismétlődő egységet a nukleinsav molekulák, kémiai vegyületek, nitrogéntartalmú bázis terméket, egy öt szénatomos cukor (pentóz), és egy vagy több foszfátcsoportot. A nukleinsavakban jelen lévő nukleotidok egyetlen foszfátcsoportot tartalmaznak. Ezek az úgynevezett a bennük nitrogéntartalmú bázisokkal - adenin (A), amely adenin, guanin (G) - guanin, citozin (C) - citozin, timin (T) - timin, uracil (U) - uracil. A készítmény magában foglalja a 4 típusú DNS nukleotid - A, T, G, C, az RNS típusú jól 4 - A, U, G, C Cukor álló összes DNS dezoxiribóz nukleotidból, RNS - ribóz. Amikor nukleinsavak képződnek, a molekulák cukor-foszfát gerincét képező nukleotidok kötődnek, amelynek egyik oldalán bázisok vannak.

alapozó - a mátrixlánc replikációjához használt katabátikus DNS. Mindegyik primer komplementer a kétszálú mátrix egyik szálával, amely az amplifikált régió kezdetét és végét keretezi.

PCR analízis - előnyei, dekódolása és a módszer leírása

A PTSR módszerrel végzett elemzés először 1983-ban kezdett beszélni. Ezt a technikát Carey Myullis és laboratóriumi személyzete fejlesztette ki. Azóta a kutatás népszerűsége folyamatosan növekszik, mert Számos előnye van számos más módszerrel szemben.

A mai napig a PCR-diagnózis a fertőzések és kórokozók azonosításának szabványa vagy standardja, különösen azok, amelyek tünetmentesek. Először is ez a preklinikai diagnózis.

PCR elemzés, mi ez?

Az elemzés elvégzése egy PCR-gépben

ÖSSZEFOGLALÁS PCR elemzés, hogy a klónozott in vitro (növekedés gyűjtőcső) nukleinsav-szekvenciák (DNS vagy RNS) specifikus az adott típusú kórokozók.

A PCR rövidítése polimeráz láncreakciót jelent.

E módszer fő megkülönböztető jellemzője az amplifikáció, azaz az amplifikáció. A szükséges gén nagyszámú másolatának vagy fragmensének létrehozása. Mindez a szervezeten kívül történik, azaz in vitro.

Tehát, ha 20 ciklus PCR-t hajt végre, akkor kb. 1 millió példányt vagy többet kapunk. Ez lehetővé teszi a fertőzés észlelését még a kis mennyiségben a forrásanyagban, amikor más analitikai módszerek erőtlenek. Ez határozza meg ennek a módszernek a nagy érzékenységét.

Egyszerű szavakkal tudjuk felhívni a következő analógia - egy kis homokszem a földön, akkor nem veszi észre, de miután számának növelése homokszem egymilliószor (PCR), egy marék homok hogy jól látható legyen.

A PCR diagnosztika előnyei

A PCR-fertőzés elemzésének fő előnyei a következők:

  • a legmagasabb érzékenység és specifitás a fertőző ágensek kimutatására használt egyéb módszerekhez képest;
  • a mikroorganizmusok különböző biológiai anyagok (vér, vizelet, hüvelyváladék, nyál stb.) azonosításának lehetősége;
  • azon képesség, hogy egyszerre több, okozó mikroorganizmust azonosítson, ha van ilyen. Összehasonlításképpen a bakteriológiai módszerek alkalmazása nem teszi lehetővé az ilyen lehetőségeket; Különböző kórokozók termesztésére különböző táptalajokat kell használni;
  • A biológiai anyag szállításának lehetősége, mert a kórokozó azonosítása, nem szükséges életben tartani;
  • az analízis sebessége;
  • az etiológiai diagnózis pontossága;
  • a kórokozók mennyiségi meghatározásának lehetősége - különösen fontos a feltételesen patogén mikrobák esetében, amelyek csak bizonyos koncentráció elérése után képesek a betegséget okozni;
  • képes kezelni a kezelés alatt a fertőzés folyamatát.

PCR analízis fertőzés céljából

Jelenleg a szexuális (és egyéb) fertőző betegségek nagy részét a polimeráz láncreakciós módszer határozza meg. A diagnózis széles körben elterjedt a magas érzékenység és specifikusság miatt.

Különösen népszerű a klamidia PCR-elemzése.

Ez annak köszönhető, hogy ezek a mikroorganizmusok intracellulárisan élnek, ami bizonyos nehézségeket okoz a felismerésükben.

A PCR-diagnosztika akár minimális mennyiségű klamidit is kimutat, amely általában nem vezet klinikai tünetek megjelenéséhez. Még csak a vizsgált anyagban lévő 2 molekula nukleinsav jelenléte teszi lehetővé a kórokozó fertőzés azonosítását.

És ez a sikeres kezelés kulcsa, amely a preklinikai szakaszban kezdődik.

A következő fertőzések is megjelentek:

  • HIV;
  • vírusos hepatitis;
  • tuberkulózis;
  • tick-hordozott encephalitis;
  • különböző nemi betegségek stb.

A PCR-diagnosztika számos más fontos feladat megoldását teszi lehetővé:

  • A terápia nyomon követése és hatékonyságának értékelése;
  • a "vírusok terhelése" meghatározása, amelynek alapján a dózis egyéni kiválasztása történik;
  • a mikroorganizmusok törzsek kimutatása, amelyek farmakológiai rezisztenciában különböznek (a gyógyszerekkel szembeni érzéketlenség).

Az elemzés előkészítése

A PCR-vel elvégzendő elemzés elvégzéséhez célszerűen felkészülni nem szükséges. Azonban nagyon fontos, hogy a szakorvos a gyűjtéshez szükséges anyagot a sterilitás összes szükséges feltételeinek megfelelően vegye fel.

Így például vérvételhez speciális vákuumrendszert kell használni, speciális csöveket kell használni a nemi szervek titkainak átvételére stb.

Bizonyos esetekben az anyagot a laboratóriumba kell szállítani. Ehhez helyesen le kell zárni a tartályt lezárt biológiai anyaggal. Ez megakadályozza a külső környezetben élő mikroorganizmusok behatolását.

A PCR eredmény dekódolása

A PCR analízis eredményei lehetnek két változatban:

  • pozitív - a kórokozót felismeri;
  • negatív - a kórokozó nem észlelhető.

Szükséges tudni - még klinikai tünetek hiányában is pozitív eredményt lehet elérni.

Ebben az esetben a polimeráz reakcióadatokra kell összpontosítani, mivel lehetővé teszi a betegség azonosítását a preklinikai szakaszban.

Néha kétes válasz érhető el, amikor az észlelt példányok száma megfelel a norma felső határának. A betegség okainak tisztázása érdekében meg kell ismételni az elemzést, különös figyelmet fordítva a biológiai anyag gyűjtésének feltételeire.

Mennyire pontos a PCR-diagnózis?

A PCR-diagnosztika legfontosabb előnyei több tézis formájában is megfogalmazhatók:

  • a kórokozó mikroorganizmusok nagyszámú példányának megszerzésének lehetősége;
  • nagyszámú példány a sikeres szekvenálás (észlelés) kulcsa.

Ez nagy pontosságú PCR-elemzést biztosít az intracelluláris kórokozók és a lassan növekvő mikroorganizmusok kimutatására.

Ezért a módszer különösen informatív a tuberkulózis mycobacteriumok és más hasonló fertőző ágensek kimutatására. A legmagasabb pontossággal bír, és nem kell újból ellenőriznie az eredményeket (kivéve a casuista eseteket).

A legmegbízhatóbb eredmények eléréséhez két alapvető feltétel szükséges, amelyek megakadályozzák az exogén (külső) fertőzést:


Kapcsolódó Cikkek Hepatitis