ELISA vírusos hepatitishez

Share Tweet Pin it

Szólj hozzá! 2,929

A vírusos hepatitis kimutatására a szervezet széles körben alkalmazza az enzim immunvizsgálat módszerét az antitestek és enzimek koncentrációjának és típusának kimutatására alapozva. Ezt lépésről lépésre, laboratóriumi kutatásokon keresztül végzik, nagy pontossággal jelzésekkel. Az antitestek mennyiségétől és osztályától függően megváltozik az ELISA-t használó enzim színe és koncentrációja, és ennek megfelelően az orvos diagnosztizálja a betegséget.

Mi az EIA?

A jelenléte a vírusos hepatitis a beteg testébe alkalmazásával határozzuk meg a szerológiai analitikai módszer a vér jelenlétére HCV-vírus és a markerek (szervek és antitestek), mutatva, hogy ez. Linked immunosorbent assay (ELISA) feltárja a különböző vírusok, kis molekulák, a makromolekulák, azok mennyiségi és minőségi mutatók segítségével a kifejezés a reakció az antigének. Ehhez az enzimet a jelregisztráció jeleként kell használni. Ez egyre inkább használják a gyógyászatban, mivel az ELISA nyilvánvalóan jól definiált antigének, keverés nélkül azokat más, van egy nagy érzékenységű a jelenléte a vírusos hepatitis fertőzés.

Az elemzést üres gyomorra kell adni.

Az ilyen diagnózis mínusz az a lehetőség, hogy felfedje a betegség okait, mivel a módszer csak a szervezet immunrendszerének reakcióját jelzi. Az elemzés eredményeit a korábban végzett vakcinázás befolyásolja. 8 órával az elemzést megelőzően javasoljuk, hogy tartózkodjon az evéstől, a nikotintól és az alkoholtól. Az ELISA teszt alapja az organizmus enzimatikus és immunválasztja a vírusnak. A biológiai molekulák a sejthez és annak elemeihez, mikroorganizmusokhoz, a vírus kimutatásához, majd az enzimek működéséhez kötődnek, amelyek lehetővé teszik az immunválasz kifejeződését egy látható és mérhető paraméterben.

Javallatok az analízishez

A vírusos hepatitis a szervezetben rákos és májzsugorodást okozhat. Az időszerű diagnózis fontossága tagadhatatlan. A diagnózis elsődleges módszere az ELISA teszt, amely pontosan meghatározza a HCV vírus (IgM és IgG) jelenlétét és a nyomelemek aktivitását. Hiba nélkül, a vírusos hepatitis tesztjeit benyújtják:

  1. A veszélyeztetett csoportokból (kábítószerfüggők, AIDS betegek, orvosi és bűnüldözési személyzet) tartozó emberek.
  2. Akut vagy krónikus hepatitis formájú betegek.
  3. Terhesség és terhesség nők tervezése.

Az ELISA bármely betegségben felismeri a betegséget. Az elemzés eredményei átlagosan 2 napig állnak rendelkezésre.

Az elemzés fontosságát meghatározó kritériumok

Az ELISA teszt meghatározza az IgG, IgM, IgA antitestek jelenlétét. A vírusos hepatitis diagnózisakor az orvos nem veszi figyelembe a típusát, mivel a HCV vírus bármely ilyen megnyilvánulásának jelenléte már a betegség akut vagy krónikus állapotát jelzi. A betegség korai szakaszában az IgM szintje nő (a fertőzés után 5 nappal); IgG antitestek jelennek meg a 15-20 napon belül és hosszú ideig lehetnek az emberi vérben a gyógyulás után is; Az IgA megjelenik 10-14 nap elteltével, a kezelés után csökken.

Abban az esetben, ha az IgG és az IgA kimutatása a gyógyszerek alkalmazása után, és szintje ugyanabban az indexben marad - a hordozó krónikus formája a hepatitisnek. A teszt szempontjából fontos kritérium az antitestek osztályának és számának egyértelmű meghatározása. Ennek alapján tudni nem csak a betegség jelenlétét, hanem fejlődésének szakaszát is. Az ilyen elemek kimutatása a páciens vérében lehetővé teszi a helyes és időben történő kezelést a súlyosabb következmények elkerülése érdekében.

Hogyan történik?

A közvetlen és nem közvetlen ELISA teszt izolálása. Közvetlen szakaszok:

  1. Biológiai anyagok gyűjtése és elhelyezése speciális kútba.
  2. 15-30 percen belül. antigének a kutak felületéhez kötődnek.
  3. Antitestek hozzáadása a kutakhoz a talált antigénhez. Hagyjon mindent 1-5 órára.
  4. A nem kapcsolt antigének eltávolítása (a kút tartalmának kiöntése).
  5. A lyukakat speciális megoldással öblítse le.
  6. Adjunk hozzá enzimoldatot a lyukakhoz. 30 percig 1 óráig hagyja.
  7. Használja a kolorimetriát (feltárja a kút tartalmának színét és koncentrációját, összehasonlítva azokkal a mutatókkal, amelyek közvetlenül arányosak a vírus koncentrációjával).
A közvetett ELISA módszer diagnózisának felhasználása pontosabb eredményt ad.

Az indirekt ELISA-eljárást úgy hajtjuk végre, hogy jelöletlen antitesteket alkalmazunk az észlelt antigénekkel, majd ezeket jelöltük hozzá. Először a vért veszik a páciensből, és a lyukakat 15-30 percig hordják. (az ellenanyagok a kútokkal vannak rögzítve). Ezután bennük jelöletlen antitesteket vezetnek be 1-5 órán át (az antitestek antigénekkel való kapcsolatának kialakulása - az immunrendszer). Továbbá nincsenek nyomelemek a kútból, és speciális oldattal mosnak. A következő lépésben a laboratóriumi asszisztens 15-30 percig hozzáadja a mikrotápanyagokat a lyukakhoz. (ebben az esetben, jelöletlen, antitest-antitest-antigén komplexet képező jelzés nélkül). A felesleg eltávolítása (laza), ha az oldatot leöblítjük és öblítjük, újra eltávolítjuk. Ezután egy enzimet viszünk be, amely 5-30 perc alatt megváltoztatja a színt. maradjon a lyukakon és a színadatokat ellenőrizzük az asztali indikátorok adatai alapján. A közvetett EIA módszer pontosabb.

Mit mutat az ELISA a vírusos hepatitisz elemzésében?

Immunoszorbens assay jelenlétét mutatja a fertőzés (hepatitisz vírusok, bármilyen típusú, a HIV, a herpesz, a szifilisz, a citomegalovírus, a kanyaró, rubeola, mumpsz vírus, Epstein-Barr-vírus), a marker az autoimmun betegségek, rákos sejtek. Azt jelzi, reproduktív rendszer károsodását (változás a tesztoszteron szintet, a prolaktin, az ösztradiol és progeszteron), hibás működés a pajzsmirigy, invázió bélférgek, chlamydia. Hatékony az ureaplazmózis, a hülyeső köhögés, a Dange-vírus, a Nyugati-Nílus vírus, a Borrelia kimutatására. A definíciók listája magas, számos címet tartalmaz.

Az eredmények megerősítése

A HCV antigén ELISA módszerrel történő meghatározása 98% -os pontosságot eredményez. A biológiai anyag ismételt tesztelésére is használják, fuzzy korábbi mutatókkal. Az IgM antigének jelenléte nem mutatója a hepatitisz akut formájának, és további kutatásokat igényel. Az ИФA ismételt elvégzésével a vizsgálati eredmények 90-100% -ban egyeznek. Minimális eltérés esetén az átlagérték mutatószámként szerepel. A mutatók maximális pontosságának elérése érdekében az orvosoknak ajánlott párhuzamos biokémiai vérvizsgálatot végezni. Az eredmények ellenőrzése az enzim immunvizsgálat után más diagnosztikai módszerek is alkalmazhatók.

A hepatitis B lényege és diagnózisa

Amint a színpad elhalad a citromsavban, a bőr kezd sárgulni, a nyálkahártyák, az egészségi állapota élesen romlik. Fontos hangsúlyozni, hogy a máj növekszik a méretben és kiugrik a tengerparti ív alatt. A bőr sárgás színének festése fokozatosan történik. A májenzimek száma nő a vérben, és a timol-vizsgálat nem változik.

A betegség diagnosztizálása: alapvető módszerek és fogalmak

A hepatitis B diagnózisát többféle módon végzik el:

1. Kezdetben az orvosnak össze kell gyűjtenie az anamnézist és alaposan meg kell kérdeznie egy személyt. Az interjú során nagy hangsúlyt fektetnek olyan pillanatokra, mint:

  • hogy kábítószerek vagy más gyógyszerek beadása intravénás volt-e;
  • voltak-e vérátömlesztés;
  • voltak-e sebészeti beavatkozások;
  • A bőr integritásának károsodása;
  • mi a szexuális kapcsolatok;
  • hogy a beteg kapcsolatba került-e a hepatitis B-vel vagy a hordozójával.

Ha ezen elemek bármelyike ​​bekövetkezett, meg van adva, hogy mennyi ideig. Tipikusan, a fertőzés akkor jelentkezik, ha 6 hetes vagy hat hónappal a hepatitisz első tüneteinek megnyilvánulása előtt lép fel.

2. A hepatitis B laboratóriumi diagnosztikája, ELISA vérvizsgálat antigénekre és a hepatitisz B ellenes antitestekre. Ez a vizsgálat a 3 antigén azonosítására irányul:

  • HBsAg (egy felületi felületű antigén),
  • HBcAg (belül található),
  • HBeAg (az előző antigénnel való kapcsolat). A betegséget az antigének korai felismerése jellemzi a vérben.

A hepatitis B-ben szenvedő és a vérben lévő antigéneket tartalmazó személyek nagyon ragályosak. Képesek megfertőzni más embereket. Ha egy személy vérében nincs HBsAg, ez azt jelzi, hogy egészséges. Ha egy beteg beteg, akkor a szervezet elkezdi felszabadítani a rendelkezésre álló antigének ellenanyagait.

3. A hepatitis diagnosztikája a PCR technikával a HBV DNS kimutatására szolgál a keringési rendszerben. Ha az eredmény pozitív, akkor a személy fertőzött hepatitisszel. A HBV DNS vizsgálatát kvalitatívnak nevezzük. Van egy kvantitatív PCR is. A kvantitatív PCR lehetővé teszi a terhelés azonosítását a májgyulladás jelenlétével. Mi a vírus terhelés? Ez a HBV DNS példányainak száma 1 ml vérben. A hepatitis mennyiségi elemzése a vírus aktivitását mutatja.

4. Biokémiai vérvizsgálat. Ez az elemzés magában foglalja a máj által termelt enzimek mennyiségének meghatározását. Ezek az enzimek közé tartozik az ALT, az AST. A májsejtek belsejében találhatók - májsejtek. Ha a májsejtek sérülnek, az enzimek felszabadulnak, és bejutnak a vérbe. Pozitív analízist csak akkor kell figyelembe venni, ha a májenzimek mennyisége meghaladja a normát. A vizsgálat azt jelzi, hogy vannak-e gyulladásos folyamatok a májban és aktivitásukban.

5. Ultrahangos vizsgálat, elasztometria stb. A hepatitis diagnózisát elvégezhetjük és a nem laboratóriumi módszereket. Ultrahang segítségével vizsgálják a hasüreg szerveit. Az ultrahang egyértelmű képet ad a máj és a hajó bármely gyulladásos folyamatáról. A máj elasztometriájának hatékony végrehajtása. Az elasztometriai módszer a májszövetekben a fibrózis mértékére vonatkozó elgondolást ad.

6. A legfontosabb elemzés a hepatitisz B antigének vörösvérsejt-tömegének jelenléte, és ha léteznek, ez azt jelzi, hogy a fertőzés az emberi szervezetben jelen van.

7. A hepatitis-diagnózis laboratóriumi típusa magában foglalja az antigének és antitestek meghatározását a vörösvérsejt-tömegben. A leggyakoribb HBsAg a keringési rendszerben már a hepatitis inkubációs időszakában jelenik meg. Egy személy nem tudja a betegségének fejlődését, és a vér már változik. Ha a hepatitis akut, a HBsAg elvész a vérből. Általában a HBsAg nincs jelen az icterikus periódus első hónapjában, és ezen antigén elleni antitestek a keringési rendszerben a fertőzés után 90 nappal jelentkeznek.

A pozitív antitest teszt nem jelenti azt, hogy egy személy hepatitis-fertőzött. Lehetséges, hogy korábban hepatitis volt D-szer nélkül. Ha a terápia után nincs a HBsAg a vérben, de vannak antitestek, ez jó prognózist jelez, ami jelzi a beteg helyreállítását. Ha a betegnek krónikus vagy súlyos májgyulladása van, akkor az antitestek már a korai periódusok első napjaitól is megjelennek.

Jelentős egyenértékű az anti-HBc IgM megnyilvánulása a vérben. Ezek azonosítottak az eltúrt periódus végén. Jelen vannak a nyilvánvaló megnyilvánulások időszakában. Ha az elemzés anti-HBc IgM-et tartalmaz, ez azt jelzi, hogy a vírus folyamatosan szaporodik. Ha az anti-HBc visszanyeri, az IgM eltűnik. A betegség akut fázisa adható az anti-HBc IgG analízisében. Egy személy egész életében kiderül.

Amikor a hepatitis (különösen az autoimmun) inkubációja idő telik el, a HBeAg is megjelenik a vérben. Értesülnek a fertőző részecskék aktív felosztásáról és növeléséről. Amint bekövetkezik a periódus, a HBeAg eltűnik. Ezt helyettesíti az anti-HBe. Az anti-HBe azt jelzi, hogy a fertőzés aktivitása csökken és hamarosan helyreáll. De a vírus szaporodása nem áll meg!

Az akut hepatitis krónikussá válhat. Ezt a HBeAg vérében feltárt kideríti. Ha jelen van, akkor nagy a valószínűsége annak, hogy a folyamatot krónikus formává alakítják. A HBeAg jelenléte a páciens magas fertőzőképességét jelzi.

Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a hepatitis B laboratóriumi diagnózisa, amely negatív eredményt ad a HBsAg számára, nem zárja ki a diagnózist. Fontos kritikus kapcsolat az anti-HBc IgM vérben való jelenléte. Ezek az ellenanyagok pontosan megerősítik a betegséget. Ha a vérvizsgálat nem tartalmaz anti-HBc IgM-t, akkor ez jelezheti az NDA szállítását, és ezen antitestek jelenléte fokozott fertőzést jelez.

A hepatitis B DNS kimutatása

A DNS-vírus jelenlétének meghatározására szolgáló legfontosabb teszt a PCR. Az elemzés a fertőző folyamat aktivitását jelzi. Ezzel a módszerrel megismerheti a betegség előrejelzéseit.

Ha a hepatitis előnyösebb, akkor a HBV DNS elvész a vérből a fertőző folyamat kezdeti időszakában. A laboratóriumi diagnosztika PCR formában ad információt a kezelés minőségéről (függetlenül attól, hogy a gyógyszer hatása).

Annak megértéséhez, hogy milyen taktikát kell alkalmazni a terápiás beavatkozások kijelöléséhez, kvantitatív PCR-eljárást kell végezni. A kvantitatív PCR adatokat szolgáltat a terápia pozitív reakciójáról.

A diagnózis alapja

A diagnózishoz a következő vizsgálatokra lesz szükség:

  1. Napi ellenőrzés, tapintás.
  2. A máj ultrahangja.
  3. Biokémiai vérvizsgálat (ismétlődően).
  4. HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc teljes, HBV DNS.
  5. A HBV és a HCV markerei (a vírusos hepatitis kizárt).
  6. A máj áttörése.
  7. Máj biopszia. A speciális tű segítségével a hasfal kiszakadása és egy kis máj darab eltávolítása szövettani vizsgálatra (egy darab legfeljebb fél gramm méretű) történik. A biopszia a hepatitis legutóbbi vizsgálati módszere. Hála neki, a legpontosabban beszélhetünk a fertőző folyamat aktivitási fokáról, a májfibrózisról. A biopszia sebészeti beavatkozás. Komplikációkhoz vezethet, ezért gyakran nem használják diagnosztizálására.
  8. Fibroelastografiya. Segítségével értékelheti a májszövet sűrűségét. Az eljárás hasonló az ultrahangvizsgálathoz. A tanulmány egy speciális érzékelőt használ, amelyet a bőrt elhelyezett a máj kivetítésének helyén.
  9. FibroTest. Ez bizonyos vérmutatók számításán alapul.

Krónikus hepatitis B

A krónikus hepatitis B fokozatosan lép fel:

1. fázis - a vírus replikációja. A vírus fokozódik a megnövekedett aktivitással.

Fázis 2 - integráció. A vírus megszűnik. A vírusgenomot a normális májsejtek - májsejtek DNS-ébe ágyazják.

A vírus progressziójának meghatározásához fontos megérteni a folyamat súlyosságát, az eredményt és a májsejtek megsértésének mértékét. A krónikus hepatitis laboratóriumi diagnózisa a következők azonosításán alapul:

Ha a hepatitis HBeAg-pozitív (pozitív elemzés), akkor a vörösvérsejtek tömege:

  • a szorzási fázisban - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (teljes), HBV DNS;
  • a hepatociták - HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (teljes), HBV DNS DNS-be történő beépítésének szakaszában.

Ha hepatitis szeronegatív, a vér tömeges jelen lesz HBsAg, anti-HBe anti-HBc IgM anti-HBc HBV DNS. És jelenlétük semmilyen módon nem függ a fertőző folyamat színpadától.

Differenciáldiagnosztika

Az orvos köteles különbséget hepatitis B más betegségek - hepatitis A, C, E, D. A végső diagnózis érhető el, csak a vér kimutatására a mennyiségben bizonyos markerek, amelyek az egyes, a hepatitis.

Hepatitis meg kell különböztetni, és más fontos betegségek: SARS, epekövesség, ételmérgezés, bélfertőzések, sebészeti betegségek a hasi szervek és sok más betegség.

Autoimmun hepatitis

Az autoimmun hepatitis esetében a diagnózis a következő legfontosabb vizsgálatokat tartalmazza:

  1. A vörösvérsejt-tömeg analízise (OAK). Magyarázat: Az autoimmun hepatitisben, vérszegénységben (normocitikus), csökkent fehérvérsejtszámmal, vérlemezkékkel, emelkedett ROE-vel a vérben megfigyelhető. De magasabb fokú vérszegénységet várhatunk.
  2. Vizelet. A vizelet általános analízisének dekódolása: fehérjét, eritrocitákat, bilirubint tartalmaz.
  3. Vérvizsgálat a biokémia számára. Nagyon aktuális elemzés. Dekódolás: megnövekedett bilirubin mennyisége, megnövekedett argináz, az albumin csökkentése, megnövelt y-globulin, timol vizsgálat. A vizsgálati minta lecsökken. Néhány mutatót 2 vagy több alkalommal lehet növelni. Ez pozitív teszt az autoimmun hepatitiszre.
  4. Immunológiai elemzés. Magyarázat: T-szupresszor limfociták csökken, a vörösvérsejt tömeg jelennek lupus sejtek növekvő száma immunglobulinok, antitestek eritrociták.

A hepatitisz pozitív analízise a szerológiai vizsgálati módszerrel azonosítható. Az autoimmun hepatitis egy heterogén betegség.

Az ELISA módszer a májgyulladás kimutatásában

A modern orvoslás sok májbetegséget ismer. A leggyakoribb és legveszélyesebb a HCV (vírusos hepatitis C), mivel ez a fertőzés gyakran aszimptomatikusan fejlődik ki, és kritikus komplikációkhoz vezet, halálos kimenetelig. Ezért nagyon fontos a különböző módszerek, köztük az enzim immunvizsgálat (ELISA) által a vírus elleni antitestek kimutatására a betegség időben történő diagnosztizálása.

HCV fertőzés a hepatitis diagnózisára

A laboratóriumi diagnosztikában kétféle módszert alkalmaznak a hepatitis C (HCV-fertőzés) kimutatására:

  1. A hepatitisz C vírus (anti-HCV) elleni antitestek detektálásán alapuló szerológiai vizsgálatok ELISA-nak (enzim immunoassay) is nevezik. Célja, hogy anti-HCV (IgM és IgG markerek) alkalmazunk a szűrés és diagnózis hepatitis C Mindkét markerek kimutathatók a vérben (plazma) különböző kombinációkban, amely megköveteli a helyes klinikai értelmezést. Az anti-HCV jelenlétének megerősítésére RIBA (rekombináns immunoblot) vizsgálatot végzünk.
  2. Molekuláris-biológiai, az RNS vírus kimutatására. A HCV RNS-teszt a következő betegcsoportokba tartozik:
    • azonosított anti-HCV-vel;
    • anélkül, hogy kimutatták volna az anti-HCV-t, hanem olyan meghatározott epidemiológiai és klinikai adatokkal, amelyek a HCV akut formáinak eltávolítását igénylik.

A vírus RNS-je a fertőzést követő 14 napon belül kimutatható a vérben, vagyis az anti-HCV megjelenése előtt, amely az első 2-3 hónapban jelentkezik.

A diagnózis végleges megerősítéséhez (különösen akkor, ha csak a HCV-fertőzés két markert mutatják ki) a szakértők azt javasolják, hogy a HCV HCV és a HCV RNS egy bizonyos idő elteltével megismételhető legyen.

A hepatitis azonosítása ELISA módszerrel

A korai diagnózis a vírusos hepatitis, különösen a tünetmentes, anicteric formák szérum jelenlétének kimutatására a virális fehérjék (antigének) vagy annak antitestjeit (által termelt immunrendszer során a behatolás a test vírusok) enzim immunassay (EIA). Ez egy univerzális módszer immunológiai diagnózis, a lényeg az, hogy tanulmányozza a kölcsönhatás a „antigén-antitest”. Ezt széles körben használják a világ számos országában.

Meghatározása HCV ELISA lehetővé teszi nem csak a pontos diagnózis, hanem, hogy értékeljék a betegség természete, valamint egyes, hozzáértő és hatékony kezelés a hagyományos gyógyszerek (interferon, ribavirin), gyógyszerek közvetlen kereset (sofosbuvir, Daklatasvir) és ezek generikus Indiában és Kínában.

Ha lehetséges, a vírusos hepatitis ELISA-val történő diagnosztizálását PCR (polimeráz láncreakció) egészíti ki, amely lehetővé teszi a hepatitis vírusok jelenlétét az RNS vérében.

Mennyire pontos az enzim immunvizsgálat módszere

A szakértők szerint az ELISA módszer pontossága 95%, azaz 100 betegből 95-nél, egy enzim immunvizsgálat segítségével képesek kimutatni a HCV antitestek - IgM és IgG jelenlétét és mennyiségét a vérben. Ha az eredmény pozitív, akkor a HCV-vel való kapcsolat a testtel diagnosztizálható (nem maga a vírus, hanem vérben található antitestek jelenléte, ami a már átadott betegség eredménye lehet).

Az enzimhez kötött immunszorbens (ELISA) magas érzékenységének ellenére azonban a pozitív eredményekkel rendelkező betegek 40% -a nem mutatható ki, ami kétes vagy hamis pozitív eredményre utal.

Az ELISA eredmények helyességének igazolására RIBA (rekombináns immunoblotálás) alkalmazható pontosabban a HCV elleni antitestek kimutatására.

Anti HCV mag teszt

Hatékony vizsgálatok a hepatitis vírusok elleni antitestek jelenlétének meghatározására anti-HCV mag, amely megerősítő tesztként szolgál a "bizonytalan" eredmények elérésében.

Ha az anti-HCV magot a vérszérumban 1: 1000 hígításban detektálják, nagyon valószínű, hogy pozitív eredményt lehet diagnosztizálni, vagyis a betegség jelen van.

Ha az 1: 1000 hígítású minták negatívak, az 1: 200 hígításban pozitívak, a vírus RNS jelenlétére van szükség. Ebben az esetben valószínűleg nincs HCV fertőzés.

Fontos megérteni, hogy a krónikus formái HCV antitesteket folyamatosan, és eliminációs (kiválasztódásának sejtek) vírus fennmaradhat 4-8 év vagy több. Mivel az anti-HCV nem mindig jelzi a fertőzés egy szervezet, és nem teszi lehetővé objektív következtetéseket az aktivitás protsessa.Dlya hogy pontos adatokat a vírusterhelés, a mértéke a májkárosodás, a fertőzés időtartama, és a különbségek az akut és krónikus formái a betegség akkor ajánlott, hogy használja a meghatározása a spektrum antitestek különböző HCV peptidek. Fontos figyelni a mennyiségi és minőségi dinamikájukat is.

Vírusos hepatitis kutatása az If módszer alkalmazásával

ELISA a vírusos hepatitis diagnózisában. Az enzim immunvizsgálat lehetőségei

fajlagos a vírusos hepatitis laboratóriumi diagnosztikája az immunokémiai és molekuláris biológiai kutatási módszerek használatán alapul. A legfontosabb immunkémiai módszerek a radioizotóp vagy radioimmunoassay (RIA) és immunoenzim (ELISA). A diagnózis immunkémiai módszereinek alapja az antigén-antitest specifikus kölcsönhatása, a komplex későbbi felismerésével speciális címkékkel. A leggyakoribb az enzim immunvizsgálat.

Első jelentések a enzim immunoassay. mint módszert meghatározására minden olyan anyagot, tették közzé 1971-ben egyszerre két kutatócsoport - V. Van Weemen, A. Schuurs és E. Engvall, P. Perlmann. Az immunvizsgálat alapján az elv, hogy a szilárd fázisban, amint főleg az a felülete, kutak egy polisztirol lemez rögzített antigén vagy ellenanyag patogén fertőzések (gyakran egy ellenanyag-keverék), hogy az antigéneket, hogy kimutatható. Ezt az antigént vagy ellenanyagokat, amelyeket a szilárd fázisban rögzítenek, immunszorbensnek nevezik.

Az inkubáció eredményeként immunoassay és a vizsgált szérumot detektálható szer jelenlétében, az antigén-antitest komplexhez kötődnek. A mosási eljárás után, amely során a nem kötődő antigéneket és antitesteket eltávolítjuk, a konjugátummal inkubáljuk. Mivel a konjugátum a kimutatására HBsAg anti-HBs, a antitestek kimutatását, hogy a hepatitis C vírus bispecifikus ellenanyagok humán immunglobulinok (fajra konjugátum) tormaperoxidázzal. Ennek az inkubálásnak köszönhetően a hozzáadott konjugátum antigén-antitestét hozzáadják a már meglévő komplexekhez. A nem kötött konjugátum eltávolítása után (mosás) egy hordozót viszünk be a lyukakba. Amikor a peroxidáz konjugátum a szubsztrát hidrogén-peroxidot használunk kombinációban a mutató a leggyakrabban használt orto-fenilén-diamin (OPD), vagy tetrametil-benzidin (TMB). Az eredményt fotometrikusan becsüljük.

Az analitikai minőség és megbízhatóság az enzim immunoassay lehetőségei számos kritérium jellemzi, beleértve az érzékenységet, a specifitást, a helyességet és a reprodukálhatóságot.

érzékenység - az enzim immunvizsgálatával kimutatható legkisebb anyagmennyiség. Ebben az esetben egy az érzékenység alsó határa ennek a módszernek az a koncentrációja, egy analit egy mintában, amely megfelel a legkisebb pozitív meghatározási eredmény, jelentősen eltérnek az ismert negatív minták között. IFTS érzékenység függ számos körülmény kapcsolódik mind a tervezés a vizsgálati rendszer (immunszorbens affinitásos minőségű extrakciós és puffer-rendszerek), valamint a felbontás és pontosság regisztrációs módszert.

sajátosság - a képesség, hogy azonosítani, pontosan azokat a komponenseket, hogy melyik az a ELISA vizsgálati rendszerben. Specificitás ELISA nagyban meghatározza keresztreakció antitestek vagy antigének (azaz készítményeket használunk immunoszorbens), hogy szorosan rokon vegyületek, valamint a készítmény az inkubációs közeg (mátrix hatás).

jobb - az azonos kontrollminta ismételt meghatározásaival kapott eredmények átlagértékének megfeleltetése a mért paraméter valós értékével. Az ELISA meghatározásának helyessége a tesztrendszer és a kontrollminta minőségétől függ. A jó enzimhez kötött immunoassay rendszerek esetében a helyességindexek 90-110% tartományba esnek. Az ELISA orvosi és biológiai kutatásának sajátossága a pontos érték megállapításának képtelensége, ezért az igaz érték több szakértői laboratórium átlagából származik. A helyességi statisztikai kritérium az aritmetikai átlag és az eltérés mértéke a valós értéktől, százalékban kifejezve.

reprodukálhatóság - a vizsgálati rendszer azon képessége, hogy ugyanazokat az értékeket mutassa az ugyanazon minta ismételt vizsgálatához. A reprodukálhatóság függ a véletlenszerű hibáktól (hibák) a reakció beállítása során, valamint a tesztrendszerek minőségétől és az eredmények rögzítésének módjától. Úgy véljük, hogy az egyes laboratóriumok egyikében végzett ellenőrzési minták reprodukálhatósága nem haladhatja meg a 15% -os eltérési tényező értékét.

Számos speciális program létezik IFA a vírusos hepatitis markereinek meghatározására: a) közvetlen immunoenzimatikus analízis; b) közvetett immunvizsgálat; c) versenyképes gátlás; c) "csapdázott" vagy "elfogó" módszer.

Molekuláris biológiai eljárásokból a vírusos hepatitis diagnózisa gyakrabban használt polimeráz láncreakció és hibridizáció. Ezek a módszerek, különösen a PCR lehetővé teszik a nagyon kis mennyiségű specifikus vírus DNS vagy RNS kimutatását, és így a replikáció megítélését, és egyes esetekben a replikációs aktivitást is.

A hepatitis C vérvizsgálata

Hepatitis C az egyik leggyakoribb betegségek, a máj, amely akkor jelentkezik, ha fertőzés hepatitisz C vírus (HCV), amely behatol a szervezetbe előnyösen vérrel a fertőzött személy. Megfelel a krónikus és akut hepatitis 70-80 százaléka betegek akut hepatitis C nem a betegség tüneteit, bizonyos esetekben csak egy bizonyos idő után a fertőzés után megnyilvánulása a betegség, amelyek kifejezett fáradtság, hasi fájdalom, étvágytalanság, sötét vizelet, hányás, hányinger, tisztázni széklet, sárgaság, ízületi fájdalom. Jellemzően a tünetek után 6-7 héttel a fertőzés után, de a kifejezés a betegség tünetei változnak a 2 hét és hat hónap. Ha azt tapasztalja, a fenti tünetek orvoshoz kell, fertőző betegségek, és a vérvizsgálat hepatitis C Hepatitis Diagnózis végzett egy időben észlelni tudja, a betegség korai szakaszában, és jelentősen növeli a gyógyulás esélyét.

Ha a hepatitis C-t elemzik

Olyan helyzetek, ahol a hepatitis C elemzés kötelező:

  • terhesség és családtervezés során;
  • krónikus vagy akut hepatitis tünetei;
  • az emberek veszélyben vannak. Ezek az orvosi dolgozók, a börtönök, a bűnüldöző szervek, a kábítószer-használók, a szexuális partnerek nagy száma, az AIDS-szenvedés, a hemodialízis és mások.

A hepatitis C analízis előkészítése

A hepatitis C-re vonatkozó speciális elemzésre nincs szükség. Az elemzéshez vért veszünk az erekből egy üres gyomorban, az utolsó étkezés legalább nyolc órát vesz igénybe.

A hepatitis C ELISA vizsgálata

Az első elemzés, amelyet rendszerint a hepatitis C - ELISA teszt (enzim immunoassay) diagnózisára írtak fel. A hepatitis C ELISA analízise lehetővé teszi a hepatitis C vírus (anti-HCVAb) elleni antitestek kimutatását a vérben. Ha az ELISA teszt eredménye pozitív, azt jelzi, hogy jelen van a szervezet a hepatitis C vírussal való érintkezésében, de pozitív ELISA-val rendelkező emberek 40% -ánál nem található vírusvizsgálat a vérben. Ezt a jelenséget hamis pozitív eredménynek hívják. Az ELISA segítségével is ellenőrizni kell a donor vérét.

A RIBA hepatitis C vizsgálata

A hepatitis C-re vonatkozó RIBA-analízist a pozitív ELISA eredmény megerősítésére használják. Módszer a rekombináns immunoblot (RIBA) pontosabb vizsgálata az antitestek jelenlétét a hepatitis C vírus jelenléte a szervezetben a hepatitis C-vírus pozitív eredménye ez az elemzés is meghatározza csak megerősíti az antitestek jelenlétét.

PCR analízis a hepatitis C-re

A hepatitis C vírusok (RNS HCV) vérben való jelenlétének kimutatása és a legáltalánosabban használt polimeráz láncreakció (PCR) vizsgálata. Ez a tanulmány lehetővé teszi nagy mennyiségű vírus jelenlétének kimutatását nagy pontossággal. A hepatitisz C PCR elemzése a fertőzés után már 5 nappal régen felfedheti a vírus jelenlétét, jóval az antitestek megjelenése előtt. Ha a PCR-analízis eredménye pozitív, akkor azt jelenti, hogy van aktív fertőzés.

A PCR analízisben ilyen változatok vannak:

  • kvantitatív PCR, amely nemcsak a vírus jelenlétének tényét, hanem a vírusterhelést is meghatározza (a vírus mennyisége). Ez a mutató nagy jelentőséggel bír a kezelés hatékonyságának meghatározása szempontjából;
  • amely meghatározza a hepatitis C vírus genotípusát, amely fontos a kezelés időtartamának és taktikájának meghatározásához. A Hepatitis C vírusnak több mint 10 genotípusa van, de a klinikai gyakorlatban elegendő meghatározni öt, a leggyakoribb típusokat: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

A PCR mennyiségi analízise:

  • kvalitatív pozitív vizsgálattal a hepatitis C vírus RNS-szérumának jelenlétére;
  • a kezelés hatékonyságának pontos értékeléséhez;
  • hogy meghatározzák a betegkezelés taktikáját.

Nincs közvetlen kapcsolat a hepatitis C súlyossága és a vér vírusának mennyisége között. A vírus koncentrációja befolyásolja a betegség fertőzőképességét, vagyis annál nagyobb a vírus mennyisége a páciens vérében, annál nagyobb a vírus átvitelének kockázata, például szexuális érintkezés vagy az anyától a gyermekéig. Továbbá a kezelés hatékonysága a vírus koncentrációjától függ. A terápia végrehajtása során kedvező tényező az alacsony vírusterhelés, és nagyon kedvezőtlen.

A genotipizálás elemzése:

  • kvalitatív pozitív vizsgálattal a hepatitis C vírus RNS-szérumának jelenlétére;
  • a kezelés hatékonyságának pontos értékeléséhez;
  • meghatározza a betegkezelés taktikáját;
  • a krónikus fertőzés előrejelzésére;
  • hogy meghatározza a betegség progresszióját.

A vírus genotípusának kimutatása nagy jelentőséggel bír a kezelés időtartamának meghatározásához, ami fontos, mivel az interferon számos mellékhatást és alacsony toleranciát jelent a betegek számára.

A hepatitis C analízis értelmezése

Normális esetben a vírus RNS-e, az ellenanyagok és az antigének teljesen hiányoznak. Az antitestek jelenléte a vérben krónikus vagy akut hepatitis C jelenlétét vagy egy gyógyulási időszakot jelzi. Ha a vér PCR-analízissel meghatározza a HCV RNS-t, ez azt jelzi, hogy vírus van jelen a vérben.

Ha a kutatási módszer helytelen, a szállítás és a vérmintavétel rendellenes, a PCR-elemzés néha hamis pozitív eredményt mutat. Az ELISA és a RIBA analízise a betegség korai szakaszában, amikor a szervezet még nem termelt elég antitestet, hamis negatív eredményt mutathat.

Amennyiben pozitív eredményeket kap a hepatitisz C analízisének megfejtése során, akkor további diagnózis és kezelés céljából konzultálni kell egy fertőző betegség orvosával és egy gasztroenterológussal.

A szegmentált neutrofilek csökkentek

A vérlemezkék egy gyermekben - normál, emelkedett, leengedett

Thyrotropic hormon THT

A hepatitis diagnózisa

Határozza meg, hogy a hepatitisták egyik formája jelenléte nem azonnal, mivel a betegség inkubációs ideje legfeljebb négy hétig tarthat. Amikor megjelenik a betegség első jele, a vérkompozíció radikális változásai az érintett szervezetben fordulnak elő: egy biokémiai analízis komoly egészségügyi problémát és egy patogén vírus jelenlétét jelenti. viszont a végleges diagnózis esetében nem elegendő a véradás a májgyulladáshoz, és a hepatitis részletes diagnosztizálása is szükséges.

A hepatitis laboratóriumi diagnózisa

Kívánatos az inkubációs időszak vége után, hogy az orvos abszolút pontossággal meghatározhassa a testben jelen lévő májbetegséget. Ellenkező esetben az előírt kezelés nem fogja előidézni a kívánt terápiás hatást, sőt súlyosbítja az uralkodó klinikai képet.

A hepatitis A diagnózisa

A hepatitis A diagnózisát rendszerint a páciens részletes megkérdőjelezésével és egy sor vizsgálattal kezdik, amelyet a lehető leghamarabb el kell végezni. Ezek a következők:

  • biokémiai vérvizsgálat;
  • teljes klinikai vérvizsgálat;
  • PCR módszer;
  • ELISA;
  • véralvadási.

Ha a Botkin-betegség előrehalad, akkor a biokémiai vérvizsgálat eredményei alapján abnormális ugrás van a bilirubinban, az ALAT és az ASAT, valamint a timol tesztben. Ezenfelül speciális anti-HAV IgM-eket fejlesztettek ki, amelyek tagadhatatlan tényezők a hepatitis A jelenlétében.
A vér általános analízisében meghatározzuk a leukociták csökkenését, az ESR és a limfocitózis ugrását. Mindazonáltal a legmegbízhatóbb a PCR módszer, amely meghatározza a patogén vírus RNS mutatóját.
Ezenkívül az orvos tanulmányozza a betegség tüneteit, majd végleges diagnózist készít, és a leghatékonyabb terápiához járul hozzá. Az instrumentális felmérés rendkívül ritka. A kórházi kezelés és a karantén körülmények között végzett sikeres konzervatív kezelés után a beteg végleges gyógyulást vár, és a hepatitis A ismétlődő megismétlődése nem ismétlődik.

A hepatitis B diagnózisa

A hepatitisz B vírus jelenlétének meghatározására laboratóriumi vizsgálatokból is beszerezhető, és ehhez az első dolog, hogy vért adjanak a hepatitisnek. A patogén vírus természetéből adódóan három fő antigén van - HBsAg, HBcAg és HBeAg, amelyekhez a szervezetben antitestek keletkeznek. A klinikai kép legfontosabb eleme az ELISA, amely specifikus hepatitis B markert azonosít.
Szükséges azonnal tisztázni, hogy a HBsAg antigénje még a hepatitisz első tünetei előtt is megjelenik a vérben, és megbízhatóan meghatározható a citoplazma időszakában. Azonban a negatív vizsgálat nem zárja ki a hepatitis B jelenlétét, ezért ugyanilyen hatásos polimeráz láncreakció (PCR) módszer szükséges.
Ha a feltételezett hepatitis kötelező biokémiai vérvizsgálat, melyet először ajánlani kell. A máj biopszia és a peritoneum-orgona ultrahangjának kivizsgálását külön-külön tárgyalja, de amikor a betegség története rendkívül egyértelmű, nincs szükség klinikai vizsgálati módszerekre.

A máj hegesztése autoimmun hepatitisben a krónikus hepatitisben

A hepatitis C diagnózisa

Ennek a diagnózisnak a megítéléséhez nem elegendő vért adni a májgyulladásnak, mivel a vírus latens formában túlsúlyban van a szervezetben. Mindazonáltal az alapvető laboratóriumi tesztek mind a fent bemutatott tesztek, valamint a további májbiopszia. Ez a biológiai anyag mikroszkópos vizsgálata (esetünkben egy májszövet) meghatározza a patológiás folyamat és a szöveti fibrózis mértékét. Az anyag kerítését a helyi érzéstelenítés alatt végezzük, az ilyen eljárások komplikációit rendkívül ritkán tárják fel az orvosi gyakorlatban.
A hepatitis C gyanúja esetén a klinikai vizsgálat fő módja a peritoneum ultrahangja. A magyarázat egyszerű: a betegség gyakran megjelenik az érintett máj vizuális változásával, szerkezeti és méretbeli változásaival. Így meghatározhatja a következőket:

  • a máj, a lép, a hasnyálmirigy és az epehólyag méretei;
  • kóros elváltozások e szervekben;
  • a teljes véráramlási állapot a peritoneum szerveiben;
  • optimális zónát a májbiopszia elvégzéséhez.

Ez a klinikai vizsgálat módja meghatározza a mikroszkópos szinten a szervezet összes focalis patológiáját. Ha a máj szürke léptékben jelenik meg, azonnali biopsziára van szükség, mivel a szürke szín megjeleníti az "emberi szűrő" érintett szöveteit.

A hepatitis megelőzése

Mivel a betegség nem jelentkezik azonnal, az azonnali kezelést nem kapják meg minden klinikai képen. A páciens egyszerűen nem tudhat a kórokozó vírus létezéséről a testben, ami viszont gyorsan terjed a véráramba, és hatással van az egészséges májsejtekre.
Az ilyen tragikus sors elkerülése érdekében ajánlott minden megelőző intézkedést betartani. Az ilyen éberség jelentősen csökkenti a megbetegedések kockázatát, és megőrzi a súlyos egészségügyi problémákat a jövőben. A megelőzés alapvető szabályait az alábbiakban ismertetjük:

  • mossa meg a kezét az utcán;
  • hogy a magas minőségű feldolgozást friss zöldségekre és gyümölcsökre helyezzük;
  • Az éves naptári tervben meghatározott megelőző védőoltások elvégzése;
  • szexuális partnerek szelektív kezelése;
  • kerülje a betegekkel való érintkezést;
  • Csak egyszer használatos fecskendőket használjon, és különös éberséget mutasson a vérátömlesztő állomásokon.

Javasoljuk továbbá, hogy rendszeresen (hathavonta egyszer) vért adjon a hepatitisnek, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a vírus nem hatolt be a szervezetbe, és nem befolyásolja az egyszer egészséges májsejteket. Ha a diagnózis meg van határozva, azonnal azonnal orvosi fiókra kell változnia, és követnie kell egy szakember ajánlásait.

A kiadvány szerzője:
Syropyotov Szergej Nikolaevics
Oktatás: Rostov Állami Orvostudományi Egyetem (RostMU), Gasztroenterológiai és Endoszkópos Intézet.
gasztroenterológus
Orvostudományi Doktor

A hepatitis B diagnosztikai módszerei

A vírusos hepatitis B (b) a fertőző májkárosodás egyik leggyakoribb típusára utal. Évente Oroszországban ez a vírus fertőzött mintegy 50 ezer ember, és a hordozók a krónikus fertőzés ma van körülbelül 3 millió.

A legtöbb esetben egy felnőtt férfi immunrendszere önállóan megbirkózik a HBV-vel. Az esetek 10% -ában a fertőzés jelentős tünetek nélkül jelentkezik, de krónikus állapotba kerül. Az esetek kb. Felét tünetmentes áramlás jellemzi, körülbelül egy negyed perccel, gyengén kifejeződő tünetekkel. Miatt a külső hasonlóság tüneti képet HBV más típusú hepatovirus, döntő a kiválasztási orvosi rendszerek területén diagnózis hepatitis B.

A különbség a hepatitis B és más fajok között

Mint minden más hepatitis, a HBV vírus által okozott betegség elsősorban a májra hat.

Ez bonyolítja a terápiás szerek kiválasztását, mivel az interferonok ebben az esetben csak felgyorsítják az autoimmun citolízist. Vannak különbségek a HBV és más típusú betegségek között.

  1. A HBV súlyos akut formáját az erőszakos, élénk tünetekkel jellemezhető fejlődés jellemzi, majdnem a fertőzés után. A betegség fulmináns (fulmináns) folyamata gyorsan kómás fejlődéshez és halálhoz vezet, de ezek az esetek szerencsére ritkák.
  2. Ha egy újszülött gyermek fertőzött a hepatitis B-vel, akkor 90% -ig biztos lehet benne, hogy a betegség krónikussá válik.
  3. Felnőtteknél viszont az esetek 90% -ában a fertőzés teljesen lokalizálható.
  4. Ha a betegség hosszú ideig tünetmentes, akkor általában krónikus formában végződik.
  5. A cirrhosis és májsejtes karcinóma (rák) leggyakoribb oka a HBV krónikus formája.
  6. A HBV vírus az egyik legnagyobb fertőzésnek számít, mivel a külső környezet rendkívüli stabilitást biztosít.
  7. A HBV vírus hasonlósága miatt a hepatitis B elleni vakcináció a HCV-vel ellentétben létezik.

A hepatitis B diagnózisa

Jelenleg a házi orvoslás számos alapvető laboratóriumi módszert alkalmaz a hepatitis B meghatározására. A HBV diagnosztikája magában foglalja:

  • immunszorbens vizsgálattal (ELISA) jelenlétének meghatározására antitestek a vérben, hogy a HBV-vírus (anti-HBV), amely ma tartják a leginkább megbízható, gyors és olcsó vizsgálati;
  • DNS-vírus jelenlétének vérvizsgálata polimeráz láncreakcióval (PCR), amely meghatározhatja a vírus jelenlétét és aktivitását (vírus terhelés);
  • vérelemző szintjén bilirubin, alkalikus foszfatáz, a májenzimek (ALT és AST), jelzi a gyulladás a májban.

Egyértelmű, hogy az irányt ezeket a vizsgálatokat megadott orvoshoz, ha tüneti képet a beteg és a tanulmány a történelem azt sugallja, HBV fertőzés vagy állapotának nyomon követéséhez krónikus folyamat.

További diagnosztikai módszerek

Egészen a közelmúltig a szerv biopszia volt a legmegbízhatóbb módszer a máj patológiás változásainak meghatározására. Ez a vizsgálat a máj darabjairól, amelyet a perkután módszerrel extrahált speciális tűvel.

Az eljárást helyi érzéstelenítésben végzik, és ritkán szövődményeket okoznak, bár sebészeti beavatkozásokra utalnak.

Ma már több modern és kevésbé traumatikus módszer létezik:

Az utolsó 2 vizsgálat egy speciális algoritmust használó mutatószámon végzett vérvizsgálaton alapul. A fibroelasztográfia lehetővé teszi a máj parenchyma sűrűségének meghatározását az ultrahanghoz hasonló módszerrel.

A hepatitis B rossz diagnózisú?

A hepatitis B diagnózisa számos ok miatt hibás lehet:

  • a biológiai anyag szennyeződése;
  • hibák az analitikai rendszerben;
  • laboratóriumi hibák.

Az utóbbi sajnos nagyon gyakori. Ezért a hepatitisz B diagnózisának vizsgálatára szolgáló vér egyszeri leadása nem elegendő.

A vizsgálat eredményeihez kapcsolódó külső hatások kizárására a következő szabályokat kell betartani az elemzés előestéjén:

  1. Ne élvezzen 12 órával a véradás előtt.
  2. A vizsgálat előtt fél órával hagyja fel a dohányzást.
  3. A vizsgálat előtt fél órával távol tartsa magát a túlzott érzelmi és fizikai stressztől.

Hasznos videó

Milyen vizsgálatokat kell benyújtani a hepatitis diagnózisához, lásd ezt a videót:

A vírusos hepatitis B és C laboratóriumi diagnosztikája

A laboratóriumi vizsgálatok eredményei jelentős szerepet játszanak a vírusos hepatitis diagnózisának megerősítésében és az etiológiájának megállapításában.

Biokémiai vérvizsgálat

A betegek vérének biokémiai elemzése régóta a klinikai laboratóriumok gyakorlatát mutatja. A bilirubin, a tejsavóproteinek és az enzimek árfolyamairól kapott adatok halmaza lehetővé teszi számunkra, hogy felderítsük az emberi szervezetben előforduló gyulladásos folyamatokat, és feltételezzük azok lokalizációját. Ezek a kritériumok nem specifikusak és nem jellemzik a vírusos hepatitis etiológiáját, ugyanakkor nélkülözhetetlenek a máj funkcionális állapotának megítéléséhez.

A bilirubin metabolizmusának mutatói.

A bilirubin metabolizmusának a beteg állapotának felmérése a vér, a vizelet és a széklet biokémiai elemzésén alapulhat. Az ingyenes bilirubin az eritrociták hemolízisében felszabaduló hemoglobin származéka. Élettani körülmények között a keringő vörösvérsejtek körülbelül 1% -a hemolizálódik minden nap, amelyből 200-250 mg bilirubin képződik. A bilirubin nagy része a lép és a csontvelő mononukleáris fagocita rendszerének sejtjeibe kerül a véráramba. A bilirubin vízben nem oldódik, ezért a vérben a transzfert nem specifikus transzport fehérjék - albuminok végzik. Az ingyen bilirubin egy toxikus vegyület, amely behatolhat a hemato-encefalis gátba, ami encephalopathiát okoz. A bilirubin méregtelenítése a máj sejtjeiben történik, ahol glükuronsavat adnak hozzá, és a bilirubin glükuronidjait alkotják. Ezek a vegyületek már nem toxikusak és vízben oldódóak, ami megkönnyíti azok eltávolítását a szervezetből az epében. A belekben az intézkedés alapján bakteriális enzimek vannak kialakítva két csoport bomlástermékek bilirubin - urobilinogén és sterkobilinogena, amelyek nagy része a széklettel ürül ki. A normál fiziológiás körülmények között a vesék nem vesznek részt a bilirubin kiválasztódásában.
Bilirubin az egészséges emberi vér tartalmazza koncentrációban 1,7 - 17,1 mmol / l, és tartalmazza a két frakció: oldhatatlan bilirubin albuminhoz kötött - indirekt bilirubin, és az oldható glükuronid bilirubin - direkt bilirubin. Általában arányuk 3: 1.
A hepatitis károsítja a májsejteket, és ennek következtében az epének termelése csökken. Ráadásul a máj parenchyma károsodása következtében az epének nemcsak az epevezetékekbe, hanem a vérbe is belépnek. Ezek a folyamatok mindkét frakciójának köszönhetően a teljes bilirubinszint növekedését eredményezik. Megjegyezték, hogy a pre-zhelto periódus végén a normál bilirubin betegek egy hányada elkezd növekedni a közvetlen bilirubin frakciójával, ami korai mutatója a citolitikus folyamatoknak a májban. A vizeletben a bilirubin és az urobilinok kezdenek megjelenni, és a stercobilin koncentrációja a székletben erőteljesen csökken (1. táblázat).
1. táblázat. A bilirubin árfolyamok aránya normális és a máj sárgaságának alakulása.

Teljes szérum bilirubin

1,7 - 17,1 μmol / l

Közvetlen szérum bilirubin

A vérszérum közvetett bilirubinja

Vizeletreakció a bilirubinra és az urobilinre

Szteroid reakció a strobobilinre

Meg kell jegyezni, hogy a vírusos hepatitis diagnózisának bilirubin árfolyamai csak a sárgaság kialakulásában játszanak szerepet. A sárgaság és a vírusos hepatitisz pre-sárgasági fázisa még mindig nem ismeretes.

Az enzimaktivitás értékelése.

Meghatározása szérum-aminotranszferáz-aktivitás (alanin-aminotranszferáz (ALT) és aszpartát-aminotranszferáz (AST)) egy rendkívül érzékeny mutatója citolízis hepatociták, amely meghatározza, vezető szerepét a diagnózis hepatitis A különböző eredetű. Amikor citolízis folyamat, fejlődő májban hepatitis beteg túlsúlyban „kimosási” ALT, AST fok növelése szignifikánsan alacsonyabb (2. táblázat).

2. táblázat. Az enzimaktivitás meghatározása a vérszérumban

A hepatitis értékei

A hepatociták specifitása

Lúgos foszfatáz (SHF)

31-115 U / l Gyermekek: Akár 350 E / L

* az értékeket a KLL NPF "Liteh" diagnosztikai tesztrendszerének ajánlásaival összhangban adják meg.

Annak további igazolására, gepatogennoy természete enzim aktivitás meghatározható pechenochnospetsificheskih enzimek -. Szorbit-dehidrogenáz, fruktóz-1-fosfataldolazy, urokináz, stb Ezek lokalizált elsősorban a májsejtekben, és a kimutatási vérben egyedi módon társítanak májbetegség. Azonban ezek a tesztek alacsonyabbak az ALT aktivitás meghatározására való érzékenység szempontjából. Az ALT és ACT aktivitása tükrözi a májban jelentkező gyulladás súlyosságát, de nem a májgyulladás etiológiáját.

Fehérje minták

Akut vírusos hepatitisben a plazmafehérjék teljes összetétele és összetétele gyakorlatilag változatlan. Kivételt képez egy timolminta, amely általában 4 egységnyi értéket és hepatitisenként 6-8 egységig növekszik.

Amikor a CPU lépésben hCG figyelhető csökkenést albumin szérumkoncentrációja, csökkenti a protrombin index (kevesebb, mint 70%), koncentrációjának csökkentése egyéb véralvadási faktorok belül szindróma hepatocelluláris hiány. További HCV aktivitása mutatók gyorsított ESR (і15 mm / h), koncentrációjának növelése a gamma-globulin szérumot.

A vírusos hepatitis szerológiai markereinek azonosítása

Telepítse vírus természetét hepatitis és információt szerezni etiológiája nem csak azonosítása révén szerológiai markerek a hepatitis vírusok. Ilyen markerek például virális fehérjék (antigének) specifikus antitestek által termelt a szervezet fertőzésre adott válasza, és a virális nukleinsavak (DNS vagy RNS) képviselő genomjában.

A készlet kimutatására szolgáló módszerek a biológiai szöveteket és folyadékokat specifikus virális vagy bakteriális fehérjék (antigének) vagy termelt antitesteket egy gazdaszervezetben a kórokozó jelenlétét, immunológiai módszerekkel említett laboratóriumi elemzés. Az elmúlt évtizedekben a kutatás immunológiai módszerei mindenütt jelen vannak. Ennek oka az volt, szoros fúziót az immunológia és biotechnológia, amely lehetővé tette, hogy dolgozzon, és a gyakorlatban széles körű vizsgálati rendszerek kölcsönhatásán alapul az antigén - antitest. Kapcsolatban a vírusos hepatitis, immunoszorbens assay utal közvetett módszerei kórokozó kimutatására, amely lehetővé teszi, hogy létrehozza a betegség etiológiája.

Viszonylag nemrég a gyakorlatban a klinikai diagnosztikai laboratóriumok tartalmazza genodiagnostic módszerek lehetővé teszik kimutatására és jellemzésére gének vagy értelmetlen DNS-szekvenciát és / vagy RNS. Fejlesztésük során ezek a módszerek a polimeráz láncreakció (PCR) elvének 1983-as fejlődésével magyarázhatók. Az első jelentések a gyakorlati alkalmazása PCR megjelent 1985-ben, és azóta a publikációk száma, amelyekben PCR használják kutatás módszere, az egyik az első hely a világon tudományos irodalomban. Ezek a megközelítések a fertőző ágensek genomjainak kimutatására és vizsgálatára, az onkológiai megbetegedések markereinek kimutatására és a különböző funkcionális rendellenességekhez kapcsolódó genetikai változások kimutatására szolgálnak az emberi genomban. Ellentétben az ELISA-val, a PCR-analízis a kórokozók kimutatására szolgáló direkt módszereket említi a klinikai anyagban, amely lehetővé teszi a vírus folyamat aktivitásának értékelését és a kórokozó terjedésének folyamatát különböző szervekben és szövetekben.

A vírusos hepatitis B szteroagnosisza

A Hepatitis B vírus (Hepatitis B vírus, HBV) a Hepadnoviridae családba tartozik. A vírus genomját 3200 bp méretű, részben kettős gyűrűs DNS molekula képviseli. Fénymikroszkópos HBV néz gömb alakú részecske átmérője 42 nm (Dane részecskék) álló mag - nukleoid amelynek ikozaéder alakú, átmérője 28 nm, amelynek belsejében egy kettős szálú DNS-terminális fehérje és a DNS-polimeráz enzim. A nukleoid fehérje HBcAg-ból és HBeAg-ból áll. A külső héjat (7 nm vastagság) a HBV-HBsAg felületi antigén alkotja (2., 3. ábra). A hepatitisz B vírus pszeudo-retrovírus, vagyis annak DNS-je részben beilleszthető a hepatocyták genomjába.

Ábra. 2. A HBV virion és a felületi antigén komponensek szerkezetének diagramja. A felszíni fehérje (HBsAg) felesleges termelése a beteg szérumában szabad formában van.

Ábra. 3. Dán részecskék a beteg szérumában (fénymikroszkópia)

Az OBH és a HC fokozódása esetén vírusrészecskék találhatók a beteg hepatocitáin és szérumában. A HGV integratív formájával és a remissziós fázisban a HBV szérumban nem észlelhető.

Az alapja a laboratóriumi HBV-fertőzés diagnosztikájának a meghatározása szerológiai markerek a fertőzés vírus: HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM osztály IgG és anti-HBe és anti-HBs, a HBV DNS, és az aktivitást a vírus DNS - polimeráz. A vírusos hepatitis B folyamatától függően a szerológiai markerek változásainak spektruma különböző (4, 5)

Ábra. 4. Az akut hepatitisz B szerológiai markerek változásának spektruma a felbontás színével

5. ábra A krónikus hepatitisz B szerológiai markerek változásainak spektruma

A HBsAg a HBV fertőzés fő markerje. Az akut virális Az esetek többségében (90-80%) a HBsAg mutatható ki az inkubációs időszakban, kezdve 3-5 hetes fertőzés. Az antigén keringés átlagos időtartama 70-80 nap. A gyors eltűnését HBsAg (sárgaság az első néhány nap alatt) az Advent antiNVs - rossz prognosztikai jel. Krónikus hepatitisz B esetén a HBsAg sok éven át képes a beteg vérében keringeni. Meg kell jegyezni, hogy a HBsAg meghatározására jelenleg alkalmazott módszerek, beleértve az ELISA-t is, érzékenységi küszöbértékkel rendelkeznek. Ezért a klinikai tünetek jelenléte a hepatitis és távollétében HBsAg szérum kell vizsgálni egyéb markerek HBV fertőzés. A HBsAg jelenléte a vérben azt jelzi, hogy a vírus jelen van a májban és nagy valószínűséggel a vérben. Nem minden szérumot tartalmazó HBsAg tartalmazza a hepatitis B vírus számos esetben a vírus-DNS integrálódott a DNS a hepatocita nem teljesen és részlegesen, csak azt a részét, amely kódolja a HBsAg szintézisét. Ezekben az esetekben a HBsAg szintetizálódik a virion egyéb komponensei nélkül (azaz más antigének nélkül). Úgy gondolják, hogy ez a helyzet a HBsAg "egészséges" hordozójával fordul elő.

A hepatitis B vírus HBeAg magas vérfertőzőképességet mutat, ami a HBV aktív replikációjának indikátora. A HBeAg a páciens vérében csak HBsAg jelenlétében kering. Az icterikus periódus első hetében a betegek 85-95% -ánál észlelhető. A HBeAg kimutatása két vagy több hónapig a krónikus hepatitisz kialakulásának prognosztikus jele. A krónikus hepatitisben szenvedő betegek többségénél a folyamat nagy aktivitása miatt a HBeAg hosszú ideig tart (több évig).

Antitestek, hogy a mag antigén hepatitis B vírus M osztályú (anti-NVC IgM) - a marker az aktív replikáció A HBV és akut fertőzés. A HBsAg kimutatása után 1-2 héttel észlelt és 2-18 hónapig fennáll. Az akut hepatitisz B-ben szenvedő betegek 4-20% -ánál az anti-HBc IgM az egyetlen fertőzési marker. A HBB esetében az anti-HBc IgM kimutatható néhány betegnél alacsonyabb titerekben, mint akut fertőzéseknél, az antitest titer pedig a hepatitis súlyosságát tükrözi.

A HBcAg G osztályú (anti-HBc IgG) antitestek szinte egyidejűleg anti-HBc IgM-vel jelennek meg. Mint prvilo, azok maradnak minden olyan személynél, akik hepatitis B-et szenvedtek életükért. A HBsAg hordozók 95% -ában a HBsAg mellett az anti-HBc IgG is kering.

A HBsAg elleni antitestek (anti-HBs) egy korábbi fertőzést vagy a védőoltás utáni immunitást mutatnak (a védelmi szint 10 NE / ml). Ezek a gyógyulási időszak alatt, a HBsAg eltűnését követő 4 héttel jelennek meg, és 1-2 év elteltével elérik a maximális koncentrációt, amit a korszerű diagnosztikai módszerekkel nem észlelhető szint fokozatos csökkenése követ. Bizonyos esetekben az anti-HB-k életre kelthetnek. Az anti-HB-ek megjelenése a hepatitis B-ben szenvedő betegek klinikai javulásának hátterében jó prognosztikai jel. Fontos megjegyezni, hogy az akut HBV-fertőzés dinamikájában van egy "ablak", amikor a HBsAg-t már nem detektálják, és az anti-HB-k még nem jelentek meg. Ebben az esetben anti-HBc IgM és IgG kimutatható. Ez azt a következtetést vonja le, hogy a HBsAg és az anti-HBs vizsgálatának negatív eredményeivel is meg kell vizsgálni az OBH-val szembeni anti-HBc IgM-t.

A HBeAg elleni antitestek (anti-HBe) a vérben megjelennek a HBeAg eltávolítása és a vírus replikáció befejezése után. A hepatitisz B akut periódusának 9. hetének végére a betegek több mint 90% -ánál van anti-HBe. A gyógyulási idő alatt az anti-HBe eltűnik. Az anti-HBe jelenléte azonban nem jelzi a specifikus vérszérum fertőzőképességének hiányát. Kimutatták, hogy a hepatitis B (körülbelül 10%) kifejlődése során a betegek "immunnyomásának" a vírus hatása alatt mutatkoznak olyan mutáns formák, amelyek "elkerülik" az immunrendszert és nem kerülnek el. Az anti-HBe hordozóként olyan mutánst izoláltunk, amely nem tud HBeAg-t termelni a precíziós régió hibái miatt, és megkapta a HBeAg-negatív jelölést. A HBeAg-negatív mutáns megjelenése a májváltozások progressziójához vezet, a vírus folytonos replikációjával (HBV DNS jelenléte a szérumban). HBeAg-negatív mutáns primer fertőzés esetén a fulmináns hepatitis kockázata jelentősen megnő.

A leírt hepatitis B markert ELISA vizsgálta. Spectrum antitestek (anti-HBe, anti-HBs, anti-NVC IgM, anti-NVC IgG) és az antigének (HBsAg, HBeAg) lehetővé teszi, hogy a diagnózis felállításához a hepatitis B, és határozzuk meg a betegség stádiumától (3. táblázat). A hátránya ennek a módszernek, hogy lehetetlen a használata megfertőzni mutáns formáit a vírus immunszuppresszió (rákos betegek, a kábítószer-fogyasztók, stb), és a mennyiségi meghatározására szer jelen a szervezetben. Ezeknek a problémáknak a megoldása a molekuláris biológiai módszerek klinikai diagnosztikai laboratóriumok gyakorlatba vételének eredményeként jött létre.

3. táblázat. A hepatitisz B vírusfertőzés szerológiai markereinek különböző kombinációi és azok értelmezése

antiNVc
IgM

antiNV
c összegek

gén diagnosztikai módszerek, amelyek tartalmazzák azokat a PCR, jelentősen bővítik a laboratóriumi diagnózisa vírus, amely lehetővé teszi önmagában azonosítani a kórokozót, hogy létrehozza a szöveti és sejten belüli lokalizációja a HBV, azonosítására és jellemzésére a mutáns formáit a vírus, hogy szintjének értékelése virémia során a betegség, ideértve - a háttérben a vírusellenes terápia.

Jelenleg van egy széles körű diagnosztikai tesztkészletek kimutatására DNS HBV in vitro, alapuló PCR módszerek - cég „Roche”, NPF „Liteh”, „DNS-technológia”, LCR (ligáz-láncreakció) - cég „Abbott”, bDNS (a "hígított" DNS próbák módszere) - cég "Chiron". Ezek a vizsgálati rendszerek lehetővé teszik egy anyag biológiai anyagban való jelenlétének minőségi meghatározását: szérum vagy plazma, májszövet, mononukleáris sejtek. Az egyik kiviteli alak szerint a minőségi meghatározása HBV DNS PCR technológia in situ (a hisztológiai szakaszban), amely lehetővé teszi, hogy létrehozza a szubcelluláris lokalizációját a vírus a májsejtekben.

A HBeAg-negatív hepatitis B differenciáldiagnózisának egyetlen kereskedelmi vizsgálati rendszere az Abbot LCR segítségével jött létre. Jelentős hátránya ennek a rendszernek felismerni csak egy a sok mutációk hiányához vezethet a szintézis NVeAg vírus. Azonosítása a teljes egészében a genetikai eltérések jellemző NVeAg-negatív hepatitis B vírus, míg a csak közvetlen szekvenálásával PCR-amplifikált fragmenseket a virális genom.

Mennyiségi jellemzése HBV DNS-tartalom a klinikai mintákban fontos hatékonyságának értékelése az antivirális terápia és prognosztikai jelentősége annak meghatározásában, krónikus HBV. Amikor kezdetben alacsony virémia (HBV DNS kisebb, mint 500 fg / ul) százalékában krónikus akut hepatitis-B közel nulla, míg a DNS-koncentrációja HBV 500 és 2000 fg / ul chronization folyamat figyelhető meg 25-30% -ánál, míg a magasabb szintű virémia a beteg (több mint 2000 pg / μl), az akut hepatitisz B leggyakrabban krónikussá válik.

Ismert kereskedelmi vizsgálati rendszerek a HBV DNS koncentrációjának becsléséhez megvalósítják a versenyképes PCR analízis elvét, amelyet követnek az amplifikációs termékek (Roche, NPF Liteh) meghatározására szolgáló hibridizációs séma. Ez a megközelítés az ismert koncentráció belső standardjának klinikai mintájába való bevezetésen alapul, amely minőségileg eltér a meghatározandó mátrixtól. PCR után a HBV DNS koncentrációját a vizsgálati anyagban a belső standard ismert koncentrációja és a belső standard és a meghatározandó mátrix amplifikációs termékeinek felhalmozódása alapján számítjuk.

Jelenleg, a fejlesztés a laboratóriumi diagnózisa hepatitis módszerek felé haladva a létrehozását kereskedelmi tesztkészletek azonosításához klinikailag releváns HBV mutáns törzsek, valamint az új optikai eszközök (bioszenzorok) átfogó HBV-fertőzés diagnosztikájának (virális fehérjék, ellenanyagok hozzá, és a HBV-DNS)

A hepatitis C serodiagnosisja

A hepatitis C vírus (hepatitis C vírus, HCV) olyan RNS, amely a Flaviviridae családba tartozó hepatotrop és limfotróp vírust tartalmaz. A vírus genomját egy RNS egyszálú molekula (+) képviseli, amely körülbelül 9500 bázist tartalmaz, strukturális és nem strukturális fehérjéket kódol (6. ábra).

Ábra. 6. A HCV genomiális RNS és a vírusfehérjék szintézise

A szerkezeti fehérjék közé tartozik a magprotein (mag) és a burok glikoproteinek (E1 és E2). A nem strukturális régió enzimatikus aktivitású fehérjék komplexe, elsősorban RNS-függő RNS polimeráz. A vírusfehérjék mellett a virion kívülről a kis sűrűségű lipoprotein organizmus lipid bevonata (7.

Ábra. 7. A hepatitis C vírus virion szerkezetének ábrája.

1990-ig CG audio G.-A-nem B továbbítva parenterális alapján diagnosztizálják emelkedett szérum ALT-aktivitás 6 hónapon belül, annak hiányában a más ismert markerek vírusos hepatitis. Néhány HCG-es betegnél azonban az ALT szintje nem növekszik. A hepatitis C modern diagnosztizálásában a HCV-antitestek meghatározása és a HCV RNS kimutatása meghatározó szerepet kap.

Ellentétben a hepatitis B-vel, amelyben a vírus antigénjei és a hozzájuk tartozó antitestek meghatározhatók, hepatitis C esetén az ELISA csak antitesteket észlel. A HCV antigének, ha bejutnak a vérbe, olyan mennyiségben vannak, amelyek gyakorlatilag nem rögzülnek. Ezek csak a májszövetekben kimutathatók immunhisztokémiai vizsgálati módszerekkel. Ez jelentősen korlátozza a fertőző folyamat folyamatának és aktivitásának értékelését.

Az anti-HCV nem jelez folyamatos vírus replikációt, és mind a jelenlegi, mind a fejlett fertőzés jele lehet. Azt is figyelembe kell venni, hogy a fertőzött vérrel átültetett recipiensek HCV-donorral rendelkezhetnek, amely nem feltétlenül jelenti a HCV fertőzést. HCG-ben szenvedő betegeknél az anti-HCV nem csak szabad formában, hanem keringő immunrendszer komplex formájában is megtalálható a vérben.

Az ellenanyagok a virális genom szerkezeti és nem strukturális régiójában elhelyezkedő vírusfehérjékhez vannak kialakítva. Ez határozza meg a különböző sajátosságukat és ennek megfelelően különböző diagnosztikai információkat. A hepatitis C szűrésére az ELISA módszert alkalmazzák, és az immunoblot-eljárást (RIBA) megerősítő tesztként használják. Az anti-HCV kimutatására számos genetikai diagnosztikai tesztrendszer létezik, amelyek érzékenységük és specifikusságuk szerint különböznek (4. táblázat).

4. táblázat A diagnosztikus immun-enzim tesztrendszerek különböző generációinak összehasonlítása a HCV antitestek kimutatására.

* A 4. generációs tesztrendszerek szintetikus és rekombináns vírusantigéneket tartalmaznak, amelyek mérete eltérhet a 3. generációs töredékektől.

A C-100-3 antitestek meghatározásán alapuló első diagnosztikai vizsgálati rendszert 1989-ben fejlesztették ki M. Houghton laboratóriumában, és gyorsan elterjedt disztribúciót kapott. Ez lehetővé tette az antitestek befogását az övezetben, amely a vírusfehérje csak 12% -át jellemzi a nem strukturális régióban (NS3, NS4). Ezenkívül a mesterséges rekombináns C-100-3 antigén nem teljesen egybeesik a természetes vírusfehérjékkel, ami előre meghatározza gyenge immunogenitását. A C-protein (Ag) antitesteket a C-100-3 antigén segítségével egyáltalán nem mutatják ki. Ez az előre meghatározott alacsony specifitását az anti-HCV, és a nagy számú téves negatív eredmények, különösen a krónikus hepatitis C súlyos hipergammaglobulinémiával ellenkezőleg, a vizsgálat a C-100-3 gyakran téves pozitív.

A 2. generációs tesztrendszerek, amelyek 1991-ben merültek fel, lehetővé teszik, hogy a genom különböző zónáiban fehérjéket ellenőrizzenek, nem csak a nem strukturális, hanem a strukturális területeken is. Előnyük elsősorban a nagyfokú specifitás, valamint a HCV antigének spektrumának teljesebb ábrázolása volt. A második generációs tesztrendszerek használata lehetővé tette a donorok kiválasztásának jelentős mértékű javítását és a poszttranszfúziós hepatitis C fenyegetésének csökkentését.

A második generációs tesztrendszerek használatával a hamis negatív eredményeket szintén nem zárják ki, különösen a régióban szokatlan HCV-genotípusok esetén. A legtökéletesebb tesztrendszerek a harmadik és a negyedik generáció, a klinikai gyakorlatban 1995 óta.

Vizsgálati rendszerek 3. és 4. generációs képes észlelni anti-HCV 99,7% -ában. Bizonyos esetekben, HCV-antitesteknek nem lehet kimutatni, például amikor a késés az immunválasz, a használata immunszuppresszív terápia a háttérben a immunszuppresszió vagy rák, az adagolás a narkotikus anyagok, stb Nagyon ritkán vannak hamis pozitív eredmények. Mert a kizárási megkérdőjelezhető szérum elemezzük RIBA és INNO LIA vizsgálatokat, hogy antitestek kimutatására HCV minden egyes egyedi fehérjére. Diagnózis felállításához a hepatitis C és ellenőrzése a betegek gyakran nehéz, ha kizárólag klasszikus módszerek laboratóriumi diagnosztika. Ez annak köszönhető, hogy a HCV-fertőzés perkolációs amelynek során lehet megfigyelni: tünetmentes a kezdeti szakaszában a betegség; alacsony, gyakran normális ALT-szint; az antitestek későbbi megjelenése (a betegség kezdetétől számított 2 évig); a virális fehérjék kimutatására szolgáló megbízható tesztrendszer hiánya. Molekuláris diagnosztikája hepatitis C vezető pozícióját a laboratóriumi HCV-fertőzés diagnosztizálására foglalnak genodiagnostic módszerek lehetővé teszik: közvetlenül érzékeli a genetikai anyag a vírus a szérumban és a szövetekben az emberi test (mononukleáris sejtek, hepatociták, csontvelő, stb); értékeli a replikatív aktivitását a vírus a szövetekben; számszerűsítse a vírus koncentrációját a vérszérumban; megállapítani a genotípus a vírus, és figyelemmel kíséri a változékonyság HCV. Kimutatása HCV RNS a szérumban a vér a „arany standard” diagnosztikai, amely tanúsítja, hogy a folyamatban lévő HCV-replikációt. A WHO szerint az ajánlások létrehozó diagnózisának hepatitis C alapján lehetséges a hármas HCV RNS-detektálás a páciens szérumában hiányában más hepatitis markerek. Az akut fázisú HCV RNS volt kimutatható a vérben 1-2 héttel a fertőzés után, azaz a jóval az anti-HCV megjelenése előtt. Annak ellenére, hogy a heterogenitás HCV népesség valamennyi genetikai variánsok a vírus egy konzervált régiót, 5'-régió a genom azon a megállapításon, hogy a legtöbb ismert alapú kimutatására szolgáló diagnosztikai készlet HCV RNS. Egészen a közelmúltig, a legérzékenyebb vizsgálati meghatározására HCV RNS tekinthető Amplicor HCV teszt cég „Roche”, amely lehetővé teszi, hogy észleli, 700 példányban RNS 1 ml. Az új meghatározható Abbott LCx 200 RNS kópia / ml volt. Kevésbé érzékeny, de széles körben elterjedt most a bDNS Quantiplex teszt (cég „Chiron”). A hazai tesztrendszer meghatározásán alapul HCV RNS klinikai mintákban RT-PCR-rel C használva célsejtekként amplifikációs konzervált 5 „nem transzlálódó régiót a virális genom (NPF»Liteh«DNS-technológiával). Levezetése PCR feltárja HCV RNS nem csak a szérumban, hanem a májban, fontos, hogy erősítse meg a HCV szerepet kialakulását a hepatocelluláris karcinóma. Ebben a csoportban a betegek HCV RNS jegyezni a hepatociták és hiányában az anti-HCV és HCV RNS szérumban. A megkülönböztető jegye a HCV-fertőzés lefolyására a fejlesztés több extrahepaticus megnyilvánulásai, amely előírja, nyomon követése a vírus terjedését a szervezetben. HCV-RNS PCR-eljárással meghatározott vér mononukleáris sejtekben, krioprecipitátum, sejt agyszövet biopszia máj és izomszövet. Van egy módszertani megközelítés, amely lehetővé teszi nem csupán jelenlétének kimutatására a vírus szövettenyészetben, hanem, hogy értékelje a replikatív aktivitását - a reakció a (-) RNS-szálat. Amikor nyomon krónikus hepatitis C fontos szerepet játszanak mennyiségi becslésére vírus szérum vagy plazma a beteg és meghatározása a HCV genotípus. A legkedvezőbb választ antivirális kezelés betegeknél figyeltek meg alacsony virémia és genotípus 2 vagy 3. Az alapja az ismert HCV diagnosztikai mennyiségi értékelését tartalmát a vizsgálati rendszerek megközelítésen alapul elvén alapuló versenyképes erősítés a HCV-RNS és a belső standard. Ez elsősorban diagnosticums "Amplicor HCV monitor kit" cég "Roche" és "NASBA HCV" ( "Organon"). Kvantitatív vizsgálati rendszerek cég „Chiron” bDNS Quantiplex, amelyek lehetővé teszik, hogy közvetlenül értékeli a koncentrációt a mintában mátrix a detektált jel intenzitását. Ezek a vizsgálati rendszerek megbízható, jobb reprodukálhatósága, de alacsonyabb szintű érzékenység képest az erősítés. Az alkalmazottak cégek Gen-Probe és a Bayer Diagnostics közzétett eredmények a mennyiségi meghatározását a HCV RNS TMA (transzkripció által közvetített amplifikáció) nagyon alacsony érzékenységi küszöbét - 50 kópia / ml. A legtöbb hazai laboratóriumok értékelésére koncentrációjú HCV RNS módszerrel határhígításos. Ez alapján a vizsgált rastitrovka mátrix eltűnő koncentrációját és kiszámítjuk a kezdeti koncentráció alapján eredményei amplifikáció összehasonlítva a kalibrációs görbe. Sajnos, ez a módszer nem kellően pontos, mivel nem veszi figyelembe a lehetőségét, elnyomja az amplifikációs reakció egy kémcsőben a minta. Ez az eljárás azonban meglehetősen egyszerű elvégezni, és még mindig használják számos laboratóriumban „belső használatra” (in house). A lényeges jellemzője, HCV jellemzők annak genetikai heterogenitása, megfelelő különösen gyors nukleotidok helyettesítését. Ennek eredményeként számos különböző genotípus és altípus jön létre. Minősítette Simmonds 11 behatárolják típusok (genotípusok 1-11), viszont osztva 70 altípusokhoz (pl altípusok 1a, 1b, 1c) HCV. Különösen sok a HCV altípusok felvett Afrikában és Délkelet-Ázsiában. Ez közvetve megerősíti a HCV jelenlétét ezen régiókban több évszázadon keresztül. Elismerem, hogy az Európában és Észak-Amerikában HCV később jelentek meg, amely megfelel a lényegesen kisebb számú altípusok. A klinikai gyakorlatban ahhoz, hogy különbséget 5 altípusú HCV: 1a, 1b, 2a, 2b, 3a. Alapítva földrajzi különbségek terjedésének különböző genotípusok. Például, Japán, Tajvan, részben Kínában, elsősorban a rögzített genotípusok 1b, 2a, 2b. Az 1b-t még "japán" -nak is nevezik. Az Egyesült Államokban az 1a - "amerikai" genotípus érvényesül. Az európai országokban uralta a HCV 1a genotípusú, Dél-Európában ez az arány az 1b genotípus jelentősen növekszik. A területén az Orosz Föderáció a domináns 1b genotípus, alkotó 80% -a a vírus populáció, majd csökkenő frekvencia - 3a, 1a, 2a. Hagyományos módszertani megközelítés HCV tipizálási van a kimutatási jellemző genetikai változások (mutációk) a konzervált régiók a vírusgenom - 5 „nem transzlálódó, Cor, NS5A régiók. HCV tipizálási a amplifikációja konzervált régiók a virális genom és az elemzés fajlagos nukleotidszekvenciák módszerek: közvetlen szekvenálásával az amplifikált fragmentumok majd PCR típusspecifikus primereket RFLP (elemzése az amplifikált fragmentumok restrikciós enzimmel) reverz hibridizációt típusspecifikus próbák (LiPA) SSCP (elemzés konformációs polimorfizmus egyszálú fragmensek DNS-t), hogy létrehozza a HCV genotípus létrehozott kereskedelmi InnoLiPA HCV vizsgálati rendszer ( „Innogenetics”), alakult ove elve alapján reverz hibridizáció típusspecifikus próbák (ábra. 8). 1- 1a 1b genotípus genotípus 2- 3- 4- 2a 1b genotípus + 3a genotípus 2c 5- 6- 1a genotípusú + 2a genotípusú amplifikációs 7- negatív kontroll ábra. 8. létrehozása genotípusa a hepatitis C vírus segítségével a teszt-rendszer „InnoLiPA HCV” Egyes nagy központok végrehajtani diagnosztikai eljárásokat az eredeti HCV tipizálási PCR típusspecifikus primereket, DNS-fragmenseket restrictase analízis (RFLP), egyszálú konformációs elemzés vagy DNS-fragmenseket (SSCP ). Így, a klinikai diagnosztikai laboratóriumi NPF „Liteh” genotípus meghatározása PCR-SSCP (ábra. 9), vagy a allélspecifikus amplifikáció a megfelelő primerekkel. 9. ábra: A genotipizálás HCV RNS SSCP vizsgálattal: 1-5 1b genotípus 6 - 1A7 - 2a8 - 3a létre, hogy a HCV populáció nem homogén az egyes betegek számára. HCV kering az emberi szervezetben, mint a heterogén keveréket a szorosan kapcsolódó tartozó mutáns törzseket, az azonos genotípusú, de amelynek genetikai különbségek a variábilis régiók a virális genom. Genetikailag különböznek egymástól változatai HCV kering a szervezetben egy gazda, már az úgynevezett „quasispecies”. Kivételes instabilitás jellemzi az E2 / NS1 régió, amely csak 80 nukleotid, és az úgynevezett hipervariábilis régiók (NVR1). Úgy véljük, hogy ez az antitest a fehérjék genomja által kódolt rész E2 / NS1, semlegesítő tulajdonságokkal. Kivételes illékonysága HVR1 vezet az a tény, hogy a vírus nem tudja megváltoztatni az antigén szerkezetét, és ezért az immunrendszer sejtek nem képesek felismerni antigének folyamatos fejlesztése. A jelenléte „quasispecies” jelenség asszociált vírus menekülni a immunválasz, nem hatékony eltávolítását a HCV, és ennek következtében, a hosszú távú megőrzését egy emberi test és egy nagy százaléka krónikus fertőzés. Értékelése heterogenitása HCV egyes populációk vett erőt alapuló nyilvántartási száma genetikai variánsok a vírus genom HVR1 módszerekkel vagy heteroduplex analízis SSCP. Egyesek szerint a külföldi kutatók, magas szintű heterogenitása HCV populáció egyes HVR lókusz okoz súlyosabb lefolyásához krónikus hepatitis C hullám-szerű jellegét az ingadozások a transzamináz-szintek és szöveti tolerancia az antivirális terápia. Saját kutatás, alapján végzik a Kutató Intézet Fizikai-kémiai gyógyszer azt mutatta, hogy a regisztrációs genetikai változások HCV lakosság akut hepatitis C nincs prognosztikai jelentősége, mert bizonyos esetekben a krónikus hepatitis C Így meg kell vizsgálni a genetikai heterogenitás, mint egy adaptív válasz a vírus élő változó feltételek a gazdaszervezet, amint azt a különbségek a HCV al-populációk hepatociták, mononukleáris sejtek és az emberi vérszérum. Szintén megfigyelhető a dinamikáját a genetikai variabilitás a HCV egyedi populáció, valamint a változások a vírus koncentrációját a páciens vérszérumában szolgálhat közvetett marker aktivitását replikatív folyamat a májsejtekben. Laboratóriumi diagnózis hepatitis C által kifejlesztett az új, fejlettebb vizsgálati rendszereket. Ortho Clinic Diagnosztikai elindított egy új enzim immunoassay meghatározására szolgáló kit a mag antigén a vérben. Az első lépés az antigének felszabadulása a sejtszerkezetekből szérum lízis útján, a második a specifikus monoklonális antitestekkel rendelkező antigének befogása. Ez a teszt különösen hasznos kimutatására a korai szakaszában a HCV-fertőzés, amikor volt a vírus-specifikus antitestek. Chiron cégtől és a Gen-Probe kínál egy új amplifikációs vizsgálatban - NAT assay -, hogy felfedje, hogyan RNS HCV, és a HIV, amely képes csapdába egyetlen példányban a vírus a vizsgált anyagot. Végül meg kell említeni, hogy szükség van egy átfogó vizsgálat a páciens közreműködésével a legújabb eredmények az orvosi és biológiai tudományok a megfelelő diagnózis a vírusos hepatitis és a kinevezését megfelelő terápia a beteg számára.


Kapcsolódó Cikkek Hepatitis