PCR-vizsgálatok fajtái és szükségessége

Share Tweet Pin it

A hepatitis C vírus olyan vírus, amely RNS molekulát tartalmaz. Képes elkerülni a szervezet immunválaszát a magas mutációs képességek miatt. A vírus hat fő genotípusa és számos altípusa van. A régióban elsősorban az 1., 2. és 3. genotípusok gyakoriak.

A 75-80% a betegség krónikussá válik, ami a máj fibrózis - olyan állapot, amelyben a máj szöveteiben helyébe kötőszövet. A fibrosis viszont rákhoz vagy cirrhosishoz vezet. A betegség átvitelének fő módja a véren keresztül történik. Ha egy személynek van jelzése a hepatitis C-tesztre, akkor két alapvető vizsgálatot kell végezni. Határozza meg a vírus ellenanyagait, és távollétében úgy vélik, hogy nincs hepatitis. Ha a hepatitis vírus ellenes antitestek jelenlétét észlelik a vérben, a PCR-elemzést végezzük.

RNS Ezt a módszert a fertőzés után 10-12 nappal a vérben határozzuk meg, és azt jelzi, hogy a vírus aktívan szaporodik a szervezetben. Ebben az időszakban egyszerűen lehetetlen kimutatni a vírust más módon, mivel még nem termel specifikus antitesteket és a májkárosodások még mindig láthatatlanok a biokémiai analízisekben és biopsziákban.

A PCR módszerrel végzett kutatások fajtái

A polimeráz láncreakcióval végzett elemzésnek számos előnye van:

  1. Egy ilyen vizsgálattal maga a vírus határozza meg, nem pedig a létfontosságú tevékenységének termékeit. Ebben az esetben lehetséges meghatározni a kórokozó típusát.
  2. A technika nagyfokú specifikusságot mutat, mivel csak egy bizonyos DNS-területet vizsgálunk, a hibás eredmények elérésének valószínűsége csökken.
  3. Nagyon nagy érzékenységgel rendelkezik, még a vírus minimális mennyiségét is észleli a vérben.

A hepatitis C PCR-vel végzett vérvizsgálat két fő módszere: kvalitatív és kvantitatív PCR analízis. A vírus jelenlétének meghatározására kvalitatív módszert alkalmaznak. Mindazok számára, akik vércukorszint-ellenes antitesttel rendelkeztek, elemzés készül. Az eredmény csak kétféle lehet: "észlelt" és "nem észlelt", az utolsó érték a norma.

A pozitív vizsgálati eredmény azt jelenti, hogy a vírus RNS fragmensei megtalálhatók a mintában, ami viszont azt jelzi, hogy a beteg hepatitis fertőzött volt. Negatív eredmény esetén két lehetőség lehetséges: nincs fertőzés vagy koncentrációja olyan alacsony, hogy ezt a technikát nem észleli.

A mennyiségi módszer alapvetően különbözik a vizsgálatban a feladatai és a jelzések szerint. Nem minden hepatitisben szenvedő beteg van ilyen elemzésen. Ő, mint bárki másnak, konkrét célokkal rendelkezik. A vírus terhelésének vagy a PCR-nek a vírus RNS-ére vonatkozó mennyiségi elemzését alkalmazzák:

  • a vírus RNS-jének meghatározása a vérben és a "vírusos hepatitis" diagnosztizálása;
  • a krónikus májgyulladás és a betegség lefolyásának előrejelzése;
  • a vírusellenes kezelés nyomon követésére és annak eldöntésére, hogy meghosszabbítja-e, csökkenti vagy megváltoztatja-e a kezelés taktikáját.

A vizsgálatot akkor folytatják le, ha vannak ilyen jelzések:

  • a hepatitis C-t kvalitatív kutatások során észlelték, és a vérben megtalálhatók antitestek;
  • vegyes hepatitis;
  • ha vírusellenes terápiát terveznek;
  • a hepatitis C kezelés alatt és után;
  • krónikus és heveny hepatitis C jelenlétében.

A vizsgálatot a vírus egységek számának becslésére végzik egy adott térfogatban 1 cm3 vagy 1 ml vérmintán. Az eredményeket ábrákon adjuk meg. Az indexeket használjuk: IU / ml, ami azt jelenti, hogy a nemzetközi egység milliliterenként és ml / ml-enként, az 1 ml-es mintában lévő RNS-másolatok számát. Minél magasabb az elemzés mennyiségi mutatója, annál nagyobb a vírus más személyre való átvitelének valószínűsége.

A P-DNS egy elágazó DNS-eljárás. Egyszerűbb és olcsóbb módszer. Több minta esetében alacsony érzékenységgel rendelkezik, 500 NE / ml-től. Ilyen érzékenység esetén lehetséges, hogy nem érzékeli a vírust, még akkor sem, ha jelen van a vérben.

A TMA a transzkripciós amplifikáció módszere. Ez a technika nukleinsavakat tár fel a vérben. Alacsony költségű és ugyanakkor nagy érzékenységű, 5-10 NE / ml. Viszonylag új technika, amely lehetővé teszi a tesztelés költségeinek felgyorsítását és csökkentését.

A laboratórium által bemutatott, a vírus RNS meghatározásának kvantitatív elemzésének eredményeit a következőképpen értelmezik:

Mi a PCR elemzés és a vírusterhelés?

A polimeráz láncreakció (PCR) egy laboratóriumi módszer a DNS és RNS meghatározására. Az első alkalommal az amerikai Cary Mullis csaknem fél évszázaddal ezelőtt tesztelte. Ez a túlérzékenységi vizsgálat képes meghatározni a genom hordozóját a vérben, nyálban vagy bőrben található egyik forrásmolekulából.

A PCR-módszer nagyszerű kilátásokkal rendelkezik, nemcsak az orvostudományban, hanem a géntechnológiában és a kriminalisztika területén is. Segítségével klónokat hoznak létre és új típusú DNS-eket hoznak létre, meghatározzák a rokonság mértékét. A bűncselekményen talált epitéliumon bűncselekményt hozzon létre.

A hepatitis PCR elemzése - mi ez és miért csinálják?

Miért szükséges a PCR elemzés a hepatitis C gyanúja esetén, mi ez?

Hepatitis C vírus - Vírust tartalmazó RNS 6 genotípust és legfeljebb 500 altípust tartalmaz. A májgyulladás közül a vírusnak van a legmagasabb mutációs képessége, és leküzdeni az immunrendszer védő gátját. A hepatitis esetek összes számából a C-vírus okozta a krónikus esetek 70% -át és a májcukor és májrák 30% -át.

A módszer lényege: a vizsgált génnek a speciális enzimek és körülmények hatására történő kiváltására egy tesztcsőben van szükség. A PCR analízis lehetővé teszi a vírus törzsének meghatározását, amely nélkül nem lehet hatékony kezelést végrehajtani: minden genotípus másképpen érzékeny az antivirális szerekre. Kétféle PCR létezik:

A vírusellenes terápia folyamatos ellenőrzést igényel a kezelés megfelelő időben történő kijavítása érdekében, polimeráz láncreakciót is alkalmaznak erre a célra.

Minőségi és mennyiségi PCR

PCR kvalitatív a hepatitis C-re adott válasz: van-e a vírus C-törzse a beteg vérében, és melyik. A genotipizálás szükséges a betegség diagnózisának, prognózisának tisztázásához és a kezelés időzítésének meghatározásához.

Az elfogadott osztályozás szerint a gént egy szám jelöli, és az altípust egy kis latin betű jelöli.

A természetes anyagokon alapuló speciális gyógyszer

A gyógyszer ára

Visszajelzés a kezelésről

Az első eredmények egy hét múlva érkeznek

További információ a készítményről

Naponta egyszer, 3 cseppenként

Használati utasítások

A C vírus genotípusai táblázatának dekódolása:

  • Az 1a, 1b, 1c genotípus
  • 2a, 2b, 2c, 2d genotípus
  • A 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f genotípus
  • 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4j, 4j genotípus
  • Genotípus 5 a
  • Genotípus 6 a

A leggyakoribb genotípusok 1,2,3. Oroszországban a vírus 1a, 1b, 2 és 3 törzsei.

Az 1b vírus genotípusa nehezebb kezelni, mint mások, 90% -ában krónikus formába juttat, amelyből 30% regenerálódik a máj daganatos vagy májzsugorodásaként.

A 2a és 3a genotípusok 33-50% -os fokú chronizációs fokkal reagálnak az antivirális terápiára.

A vírus jelenlétének igazolásakor a PCR-t számszerűsíteni kell a hepatitis C-re, amely kiszámítja az RNS-molekulák számát a beteg laboratóriumi mintájában.

Az elemzés magyarázata

Minőségi PCR az elemzésnek két válasza van:

PCR negatív azt jelenti, hogy a kórokozót a vérmintákban nem észlelik.
pozitív a válasz az ellenkezőjét sugallja: a vírus egyik vagy másik genotípusának RNS-je.

Az eredmény megbízhatóságának valószínűsége 95%. A fennmaradó 5% hiba az ember hibája miatt. Ez a lehetőség a kutatás elvégzésének magas követelményei miatt megengedett:

  • a reagensek tárolására vonatkozó szabályok;
  • az orvosi személyzet megfelelő képzettsége;
  • a bioméret tisztasága.

A PCR készlet 100% -os diagnosztikai pontossággal rendelkezik.

Kvantitatív PCR A hepatitis C RNS-je lehetővé teszi a vírus terhelésének meghatározását a páciens testén. Használata:

  • a betegség állapota (akut, krónikus);
  • meghatározzák az antivirális kezelés hatékonyságát;
  • a májbiopszia szükségességét tisztázzák.

Bizonyos esetekben a beteg nem érez semmi jelét a betegségről, míg a PCR módszere HCV-fertőzést mutat. Ez azt jelenti, hogy a betegség a fejlődés korai szakaszában vagy krónikus formában van. A diagnózis tisztázása érdekében több kutatásra van szükség a vírusellenes kezelés lehető legrövidebb időn belül történő elindításához.

Vírusterhelés a hepatitis C-ben

A vírus terhelés mutatja a máj vírus aktivitását, milyen mértékben aktív a reprodukciója.

Mi ez?

A mennyiségi hepatitis C PCR-t Nemzetközi Egységben mérjük ml / IU / ml-enként, ami azt jelenti, hogy a C-vírus egy adott törzsének ribonukleinsavának hány példányát 1 ml vizsgálati vérben találtuk.

Mi tekinthető magasnak, milyen alacsony?

A vírusterhelés elemzése lehetővé teszi a vírus RNS jelenlétét 50 NE / ml koncentrációban. A vírus terhelése normális - ebben az esetben nem mutatható ki egyetlen HCV RNS molekula sem PCR-rel.

Vírus terhelés táblázat:

  • alacsony koncentráció 600 NE / ml 3 * 104 NE / ml;
  • átlagos - koncentráció 3 * 104 NE / ml-től 8 * 105Mm-ig;
  • Magas - több mint 8 * 105 NE / ml.

Alacsony vírus terhelés - ez jelzi, hogy a terápiás kezelés helyesen van megválasztva, és a hepatitis C gyógyulásának prognózisa kedvező.

Nagy koncentrációjú vírusos sejtek azt jelzi, hogy a betegség akut fázisban van. A páciens vér veszélyes fertőzésforrás.

A vírusterhelés, amelynek mutatói átlagos szinten jellemzik a melegvíz krónikus szakaszát, vagy két fejlődési tendenciája lehet: növelni vagy csökkenteni.

A végén - 6 hónap alatt ellenőrzési PCR-t végzünk.

A PCR-diagnosztika költsége

A következő tünetek aggodalomra adhatnak okot:

  • általános gyengeség;
  • a bőrszín megváltozása, a szem sclera, a mentesítés;
  • hányinger;
  • csökkent étvágy;
  • fájdalom az izmokban és az ízületekben;
  • súlyos a jó hipokondriumban;
  • emelkedett AST és ALT vérszintje.

A fertőzött betegekkel való érintkezés során a preoperatív periódus alatt a hemodialízis vizsgálatra is ajánlott.

Az állami klinikák vérvizsgálatot végeznek a PCR ingyenesen, ha fertőzéses betegségre vagy hepatológushoz fordulnak.

A PCR-diagnosztikára fizetett szolgáltatások minden nagyobb orosz városban rendelkezésre állnak. A költség függ a teszt típusától, az elérhető berendezésektől, az időzítéstől és egyéb tényezőktől.

A kvalitatív PCR elemzés Moszkvában és Szentpéterváron 600 és 900 rubel között lesz. A régiókban - 300-800 rubel.

A hepatitis C virális terhelés meghatározása 17,000-22,000 rubel lesz. Egyéb fertőzéstípusok esetében a mennyiségi vizsgálat ára 1200-10000 rub.

A PCR módszer előnyei és hátrányai

Milyen előnyei vannak a polimeráz láncreakciónak más diagnosztikai módszerekkel szemben?

  1. Széleskörű alkalmazások. A PCR használatával szabványos berendezés segítségével bármilyen vírust azonosíthat.
  2. A kórokozó kimutatásának pontossága. Az enzimek és analitikai módszerek különböző kombinációi alkalmazásával a megjelölt fertőzés 100% -os specifikus vizsgálata valósul meg.
  3. Nagy érzékenység. A technika lehetővé teszi a vírus egy molekula jelenlétének kimutatását a vérben.
  4. hatékonyság. Minőségi elemzés készen áll néhány óra alatt, mennyiségi - két nap múlva.
  5. A vírus diagnózisa az inkubációs időszakban. A PCR-ben a kórokozót nem az antitestek jelenléte határozza meg, hanem akkor is, ha már létezik a szervezet immunválasztja, de a kóros folyamat kezdete előtt, ami megkönnyíti a kezelést.

A PCR hátrányai az előnyei:

  • A vizsgálat tisztasága a legmagasabb tisztaságot igényli, beleértve a levegőt a laboratóriumban, úgyhogy "idegen" DNS nem lép be a mintába;
  • magas személyzeti követelmények, a bioméret mintavételének és elemzésének elvégzése.

A hepatitisz C-re vonatkozó PCR elemzése

A hepatitis diagnosztizálása magában foglal egy egész vizsgálati komplexet, amely meghatározza a vírus jelenlétét a vérben. A betegség kimutatásának egyik módja a hepatitis C-hez hasonló PCR-módszer alkalmazása. Mi ez az oka, miért fontos a hepatitis PCR-elemzése, hogyan történik és dekódolja?

Mi ez?

A polimeráz láncreakciót vagy a PCR-t gyomorfekély, vastagbélgyulladás, bélgyulladás diagnosztizálására használják. De a fő előnye, hogy segít a szervezetnek, hogy észleli a vírus maga a C hepatitis, és antitesteket is, amelyek képesek nem okoz reakciót az immunrendszer azon képessége miatt, hogy mutálódik.

A vizsgálat és annak lényege, hogy bizonyos feltételeket teremt, amelyek során a hepatitis RNS láncreakció lép fel. Ha a hepatitis C vírus nukleotidszekvenciájához viszonyítva véletlen egybeesést észlel, ez azt jelzi, hogy vannak vírusos részecskék a vérben, és a bomlás a májban történik. Ha a vírus mennyisége egy bizonyos szint alá esik, negatív diagnózis történik, ha magasabb - pozitív.

A hepatitis PCR-módszerrel kétféle vérvizsgálat létezik: mennyiségi elemzés és minőségi elemzés.

A mennyiségi PCR, ahogy fent említettük, meghatározza a hepatitis vírus RNS-koncentrációját. Ezenkívül képes információt szolgáltatni arról, hogy milyen intenzitású a patológia és az előírt kezelés hatékonysága. A hepatitis C mennyiségi elemzése rendkívül fontos, mivel ellenáll az antivirális hatóanyagok hatásának, és lehetővé teszi a terápia módosítását.

Miután a páciens egy kezelésen átment, a PCR segít meghatározni a receptek további sorrendjét. Bizonyos esetekben további felmérésekre van szükség. Például, ha a szint az ALP emelkedett (de nem több, mint 2-szer hat hónapon belül), és elemzése transzkriptum kifejezés egy vírusterhelés feletti 105 NE / ml, a beteg van rendelve biopszia. Ha a PCR mennyiségi analízise erős gyulladást és fibrózist mutat, akkor a pácienst vírusellenes gyógyszerek kezelésére írják fel.

Olyan esetekben, amikor nagyszámú vírusrészecskét kombinálnak magas ALT-értékkel, a beteget azonnal további diagnosztikai intézkedések nélkül kell kezelni.

Vegye ezt a tesztet, és megtudja, ha májproblémái vannak.

A hepatitis vérének mennyiségi elemzésére szolgáló mutatók minőségi értelmezése csak képzett és tapasztalt szakember lehet, és a modern technológia segít a vírus alacsony koncentrációjában a vérben.

A kvalitatív PCR-analízis célja a vírus tényleges jelenlétének meghatározása és megerősítése a szervezetben. Ez a vér hepatitis elleni antitestek kimutatásával történik. Ez egy minőségi teszt hepatitis garantálja a pontosságát az eredmény 100% -kal, és lehetővé teszi, hogy diagnosztizálni a korai szakaszában a betegség, ami lehetővé teszi, hogy a harcot a hepatitis B az első héttel a fertőzés után, és növeli annak az esélyét, teljes gyógyulás (abban az esetben, B típusú betegség).

A PCR előnyei

A PCR-módszer vizsgálata és a hepatitis vérvizsgálatának megfejtése érdekében lehetőség van a betegség kórokozójának genotípusának meghatározására is. A vírus 6 genotípusa és számos altípusa létezik, de a régióban az 1, 2 és 3 genotípus eloszlása.

Az ilyen típusú diagnózis további előnyei:

  • A vett indikátorok nagy pontossága és alacsony a hibák valószínűsége;
  • magas a vírus részecskékre való érzékenysége a vérben;
  • több kórokozó kimutatásának lehetősége;
  • a magas antigén variabilitású patogén intracelluláris mikroorganizmusok diagnosztikája;
  • a hepatitisz analízisének dekódolásával végzett munka lehetővé teszi a látens áramfertőzések felfedezését.

Kinek nevezzen

A hepatitiszre vonatkozó PCR-vizsgálat szükségszerűen a következő embercsoportokat veszi figyelembe:

  • terhes nők;
  • az egészségügyi intézmények alkalmazottai;
  • a vér és a szervek lehetséges adományozói;
  • azok, akiknek a betegség jellegzetes jelei vannak;
  • HIV-fertőzöttek;
  • drogfüggők;
  • a szexuális életet átélt személyek.

Hogyan történik az elemzés és a képzés szükséges?

Vérvételezést végzünk a vénából. Jellemző, hogy ez előtti reggel előfordul, mielőtt az ember evett, mert az étkezés után legalább 8 órát kell eltelnie. Szélsőséges esetekben nap vagy esti vérvizsgálat végezhető, de az analízis és az élelmiszerfelvétel között eltelt idő legalább 5 óra.

Az emberi tényezõ mennyiségi hatást fejthet ki az eredményekben: pontosságuk egyes esetekben 100% -ról 95% -ra csökken, ezért elõkészíteni kell a vér elõállítását. Az analitikai bioméret minősége megfelelő, ha a beteg az alábbi szabályokat követi:

  • Mielőtt vért adna, csak tiszta vizet inni;
  • két nappal a vizsgálat előtt el kell utasítani a sült és zsíros élelmiszerek bevitelét, valamint az alkoholtartalmú italokat;
  • egy nappal a laboratóriumi látogatás előtt hagyja abba a gyógyszeres kezelést. Abban az esetben, ha ez nem lehetséges, feltétlenül figyelmeztetni kell a laboratóriumi asszisztenst és a kezelőorvost;
  • a stresszes helyzetek és a fizikai erőfeszítések előestéjén;
  • Ne végezzünk ultrahangot, radiológiát és instrumentális vizsgálatokat röviddel a véradás előtt;
  • egy órával az elemzés előtt tartózkodnia kell a dohányzástól;
  • 20 perccel a vér szállítása előtt meg kell zavarni, nyugtatni és még lélegezni.

Ha a vizsgálatot egy 5 évesnél fiatalabb gyermek végzi, a szülőknek gondoskodniuk kell arról, hogy a bioméret mintavétele előtt fél órával 10 percenként inni is forralt vizet.

A kapott adatok magyarázata

Az elemzés szöveges formában (kvalitatív kutatás esetén), például "nem található" vagy "a változtatások alatti" lehet. Az első esetben ez azt jelzi, hogy a fertőzést nem észlelték. A második -, hogy a vírus jelen van, de kis mennyiségben. Ez a helyzet újbóli vizsgálatot igényel.

A vírusterhelést a fertőző RNS mennyisége határozza meg, és ME / ml-nek vagy másolatoknak felel meg.

A hepatitis C mennyiségi analízisének normál indikátora (normája) a 1,8x102 és 2,4x107 NE / ml tartományba esik.

A vírus koncentrációja a vérben lehet:

  • alacsony: 600 NE / ml-ről 3x104 / ml-re;
  • átlag: 3 óra 4 NE / ml-től 8 óráig 5 NE / ml;
  • magas: több mint 8 óra 10 NE / ml.

A hepatitis PCR mennyiségi és minőségi elemzése lehetővé teszi a vírus jelenlétének meghatározását a testben és koncentrációjának szintjét. A polidizált láncreakció korai stádiumban képes diagnosztizálni a betegséget, de ehhez szükség van arra, hogy a betegek a lehető leghamarabb forduljanak orvoshoz segítségért és szigorúan kövessék a kezelőorvos ajánlásait.

A hepatitis C PCR mennyiségi elemzése

A HCV számos altípusa létezik, ezért nem mindig lehetséges hatékony vírusellenes hatóanyagok kiválasztása és a kívánt eredmény elérése a kezelésben. A kórokozók sokféleségének köszönhető, hogy képesek megváltoztatni szerkezetüket, azaz mutálni. Ennek eredményeképpen az immunitásnak nincs ideje arra, hogy hatékony reagálást alakítson ki egy patogén szerrel szemben, és a gyógyszerek hatástalanok.

Gyakran a hepatitist diagnosztizálják a cirrhosisban, ami a klinikai tünetek hiánya miatt később felderíti a betegséget. Csak a laboratóriumi vizsgálaton keresztül lehet HCV-t kimutatni az inkubációs időszakban.

A hepatitis C mennyiségi elemzése lehetővé teszi nemcsak a kórokozó jelenlétének megállapítását a vérben, hanem a koncentráció kiszámítását is.

Ajánlások az elemzésre való felkészüléshez

A laboratóriumi diagnózisra külön előkészítésre nincs szükség. Elég, hogy tartsuk be az alábbi ajánlásokat:

  1. a mennyiségi elemzést üres gyomorra végezzük, az utolsó étellel - 8 órával a vérminta előtt;
  2. két napra el kell hagyni az alkoholt és a "nehéz" ételeket;
  3. Különös fontosságúak a gyógyszerek, amelyeket a beteg veszi. Ezek befolyásolhatják a vizsgálat eredményét, ezért az orvosnak tudnia kell róluk.

A vérminták előestéjén a nehéz fizikai terhelés és fizioterápiás eljárások sem kívánatosak. A hepatitis C mennyiségi elemzésének megfejtéséhez kiderült, hogy megbízhatónak kell lennie, ne hagyja figyelmen kívül a fenti ajánlásokat.

Gyakran előfordul, hogy a beteg az elemzés eredményét naponta megkapja. A kórokozó vérben való koncentrációjának meghatározására szolgáló vizsgálat ára a laboratóriumtól és a reagensek minőségétől függ, és elérheti a 4000 rubelt.

A hepatitis C laboratóriumi diagnózisa

Az elsődleges diagnosztikai módszerek közé tartozik az ELISA, vagy más módon enzimkapcsolt immunoszorbens vizsgálat. A HCV specifikus antitestek kimutatására van kijelölve. Hatékonysága eléri a 95% -ot. Ha a tanulmány átiratai pozitív eredményt adnak, akkor érdemes feltételezni, hogy egy anyag jelen van a vérben.

Meg kell jegyezni, hogy a "+" teszttel vizsgált alanyok fele a további diagnózis során nem észlel vírusos anyagot a vérben. Ebben az esetben az ELISA azt jelzi, hogy a múltban előzőleg HCV volt a kapcsolata, amelyet keringő antitestek igazolnak.

Pontosabb vizsgálat egy polimeráz láncreakció, vagy PCR. Lehetővé teszi a patogén RNS-koncentrációjának meghatározását a vérben. Miután felfedezte a vírus genetikai készletét biológiai anyagokban, az orvos megerősíti a hepatitis C-t.

PCR-t rendelnek a beteghez a diagnózis ellenőrzéséhez. Lehetővé teszi az RNS azonosítását olyan szakaszban, ahol az antitestek még nem állnak rendelkezésre. Számos genetikai vizsgálat létezik:

  1. a hepatitis C-re vonatkozó PCR mennyiségi elemzése, amely nemcsak a kórokozó jelenlétét hozza létre a vérben, hanem tájékoztatást nyújt a koncentrációjáról;
  2. minőség - megerősíti a fertőzést;
  3. genotipizálás - lehetővé teszi a patogén szer genotípusának meghatározását és a leghatékonyabb gyógyszerek kiválasztását.

Polimeráz láncreakció

Mint már említettük, számos laboratóriumi kutatás létezik:

  • minőségi analízis - a patogén szer jelenlétét jelzi a vérben. Az ilyen típusú diagnózisnak van egy bizonyos "válaszszintje", ezért nem mindig megbízható. Az eredmények helyes megfejtése és valódi indikátorok elérése érdekében javasolt legalább 50 NE / ml érzékenységű vizsgálati rendszert használni. Az analízis normája "negatív válasz" vagy "a vírus nem észlelhető". Ez azt jelzi, hogy nincs kórokozó-genetikai készlet a vizsgálati anyagban. Ha az eredmény pozitív, a beteg további vizsgálata szükséges;
  • A hepatitis C PCR mennyiségi analízise meghatározza a vírusterhelést, vagyis a patogén szer koncentrációját a vérben. A vizsgálat eredménye mutatja a RNS egységek számát a biológiai folyadék meghatározott térfogatában;

A vírus terhelés a fertőző RNS számát jelenti a kutató egy milliliterében. A mérési egységek ME / ml, de egyes laboratóriumok meghatározzák a "másolatok / ml" értéket, miközben az analízis standard üresét jelölik az összehasonlításhoz és az eredmények értékeléséhez.

  • genotipizáláshoz. Mivel a kórokozó képes megváltoztatni a hatékony antivirális gyógyszerek kiválasztását a terápiára, annak genotípusán kell alapulnia. Nem csak az eredményről, hanem a kezelés időtartamáról is függ. Tehát a HCV 1 hepatitis egy évig gyógyszert igényel, de az esetek 60% -a pozitív dinamikát mutat. Ami a második és a harmadik genotípust illeti, kevésbé ellenállnak az antivirális szerek hatásának, ezért a terápia hatékonysága meghaladja a 85% -ot. Ha a kutatás ilyen eredményét - "a vírust nem írják", akkor érdemes gyanítani egy olyan ügynök jelenlétét, amelyet a standard tesztrendszerek nem ismertek el.

Javallatok az analízishez

A hepatitis C mennyiségi elemzésének értelmezése a következő célokra szolgál:

  1. a beteg további vizsgálata, amikor a HCV ellenanyagokat ELISA-val detektálták;
  2. a diagnózis megerősítése;
  3. vírus terhelés megállapítása vegyes fertőzés esetén, amikor egy személy többféle kórokozóval fertőzött;
  4. a kezelési taktika meghatározása (vírusellenes gyógyszerek kiválasztása, terápia cseréje vagy befejezése);
  5. felmérni a betegség progressziójának dinamikáját, valamint a gyógyszerek hatékonyságát;
  6. a patológia (akut, krónikus) állapotának meghatározása.

A PCR a következő előnyökkel rendelkezik:

  1. jó érzékenység, melynek köszönhetően még csak kis mennyiségű vírust is lehet számolni;
  2. maga a kórokozó (RNS) meghatározása, nem antigének;
  3. a technika specifikussága - egy specifikus típusú patogén ágens létrehozása;
  4. az eredmények megszerzésének sebessége, mivel az elemzéshez nem szükséges növényi kultúrák termesztése tápközegben. A válasz készen áll 5 óra alatt;
  5. egyetemesség - lehetővé teszi a különböző kórokozók genetikai csoportjának azonosítását, mind RNS-t, mind DNS-tartalmú (hepatitis B);
  6. látens fertőzés kimutatása.

A laboratóriumi vizsgálat segít a diagnózis megerősítésében, és szerves részét képezi az átfogó vizsgálatnak (a klinikai tünetek elemzése, az ELISA és a biokémia eredményei).

Ezenkívül a PCR-t széles körben használják az allergológia, a genetika területén, valamint az apaság tényének megállapítására.

A hepatitis C vírus mennyiségi elemzésének dekódolása

A laboratóriumi diagnosztika eredményeinek értékelését egy orvos végzi, a kapott adatok összehasonlításával.

PCR diagnosztika használata

A polimeráz láncreakciót (PCR) a molekuláris biológiában a víruskeresés kísérleti módszerének nevezik. Lehetővé teszi a nukleinsav (DNS) bizonyos fragmenseinek koncentrációjának jelentős növelését a biológiai anyag mintáiban, ami lehetővé teszi számukra a felismerés és számlálást.

Az elemzés az alábbiak szerint történik. A genetikai anyagot (vérmintát), amely potenciálisan tartalmazhatja a kívánt gént, egy kémcsőbe kerül. Ezenkívül a primereket a kémiai úton szintetizáltuk a kívánt gén kis hosszán.

A DNS-hez vagy RNS-polimerázt is hozzáadják az edényhez, képes egy olyan nukleinsavláncot létrehozni, amely teljesen azonos az eredetivel. A kapott kompozícióba négy szabad nukleotidot, egy RNS-hez vagy DNS-hez speciális építőanyagot helyezünk, amelyek közül az egyik a foszfor radioaktív részecskéit tartalmazza.

A kapott elegyet 95-96 ° C-ra melegítjük, aminek következtében a szokásos állapotban összefonódott két DNS-helikát feloldjuk. Ezután a készítményt lehűtjük, ebben az időben a primerek a vírusgenom kívánt régiójához kötődnek anélkül, hogy az RNS (vagy DNS) kettős hélixet állítana elő ismét.

Hűtés közben a polimeráz egy nukleotidok szabad láncolatát keresi. Ennek az enzimnek a működéséhez egyetlen lánc nukleotidra van szükség. Mivel a polimeráz a DNS-szalag mentén csúszik (mint egy gyűrű egy kötélen), nem működhet kettős spirállal.

Ezután ismétlődő ciklusú melegítést végzünk, ami miatt a nukleotidláncokat elválasztjuk. Mindegyik PCR ciklus esetében a mintában lévő kívánt hepatitis gén mennyisége növekszik a geometriai progresszióban, és a genetikai anyag többi része lineárisan keletkezik.

A nukleotidmaradékok oldatának tisztítása és a DNS-szálak elektroforézissel történő molekulasúly-paraméterével történő elválasztása után könnyen meghatározható, hogy a kívánt gén létezik-e a vizsgálati mintában, vagy sem.

A PCR előnyei

A PCR módszerrel végzett laboratóriumi vizsgálat lehetővé teszi, hogy még több információt szerezzen, mint az RNS vírus jelenlétét. A radioaktív sugárzás szintjének meghatározásakor meghatározható, hogy a vizsgált mintában mely genetikai anyagot kezdetben tartalmaznak. Hepatitis esetén határozza meg a vírusterhelés szintjét.

Ennek a módszernek egy másik előnye a CR reakció nagyon nagy érzékenysége. Sokkal magasabb, mint a vírusok észlelésének klasszikus módszerei. Ideális esetben a kívánt gén azonosítása céljából csak egy mintában lévő vírus elegendő a PCR-hez.

Emellett a PCR teljesen specifikus. A primereket olyan módon hozták létre, hogy teljesen megfeleljenek a kívánt gének egyedülálló részeinek, amelyeknek nincs más szekvenciája. Mindkét ujjlenyomat egyedülálló, és minden génben egyedi nukleotidszekvenciák vannak.

Minõségi PCR analízis

A kvalitatív analízis csak a vírus jelenlétét mutatja a vérben. Ezt a vizsgálatot minden olyan betegnél el kell végezni, akikről kimutatták, hogy vérükben a hepatitis C elleni antitestek eredményei csak két érték közül választhatnak: "észleltek" vagy "nem észleltek". Egészséges ember esetében a normát (referenciaérték) "nem szabad észlelni".

Az elvégzett kvalitatív kutatás ilyen eredményeinek speciális értelmezése is van:

  • Az eredmény "felfedezett". Ez azt jelenti, hogy a mintában a biológiai anyagot hozott találtak egy olyan RNS-fragmens, amely specifikus a hepatitis C-vírus Következésképpen, ott van a tény, a beteg hepatitis B vírus fertőzés C. Ha az eredmény a kvalitatív PCR „felfedezte”, ez azt jelzi, hogy a vírus ismétlésben és ebben az időben új májsejteket fertőz meg a szervezetben.
  • Az eredmény "nem észlelhető". Az ilyen döntés azt jelzi, hogy a mintában a biológiai anyag kapott RNS-fragmentum nem mutatható ki a laboratóriumban, amely specifikus vagy HCV RNS azonos koncentrációban a patogén fertőzés a mintában határ alatt volt az a teszt érzékenységét.

A hepatitis C vírus RNS akut fázisában a PCR technikát alkalmazó kvalitatív vizsgálatok 1-2 hét után azonnal felfedezhetik a szervezet fertőzését, vagyis röviddel a hepatitis elleni antitestek megjelenését megelőzően.

Az ilyen vizsgálatok analízisének megbízhatatlan eredményei a következőkkel érhetők el:

  • szennyezett biomassza;
  • heparin jelenléte a beteg vérében;
  • a mintában lévő vegyi vagy fehérjeanyagok (inhibitorok) jelenléte, amelyek befolyásolják a PCR különböző komponenseit.

A PCR minőségi analíziséhez nem szükséges a beteg speciális preparálása a vizsgálat elvégzéséhez. A vénás vért anyagként használják.

Az eredmények értékelése

A kvalitatív PCR-tesztek bizonyos fokú érzékenységgel rendelkeznek, és a laboratóriumi pontosságtól és a laboratóriumi felszerelés mértékétől függően 10 és 500 NE / ml között változhatnak.

Ez azt jelenti, hogy ha a vírus a vérmintában nagyon alacsony koncentrációban van jelen (kevesebb, mint az adott laboratórium érzékenységi küszöbe), akkor a beteg páciensét "nem detektálják". Ennek következtében, ha minőségi PCR-elemzést végeznek alacsony vírusszinttel (vírus alacsony koncentrációja), például antivirális terápiában részesülő betegeknél, nagyon fontos tudni a diagnosztikai rendszer érzékenységi küszöbét.

Diagnosztikai rendszerek változatai

A virológiai válasz szabályozására ajánlott az antivirális kezelés legalább 50 NE / ml érzékenységi küszöbértékű diagnosztikai rendszerek alkalmazása. Ezek a kritériumok teljesülnek, például: Cobas Ampicolor VGS-teszt elemzők (50 IU / ml pontossággal), valamint RealBest HCV RNS (15 IU / ml érzékenységgel).

A WHO szerint ajánlásokat létrehozó végleges diagnózist a hepatitis C, meg kell kizárólag alapján hármas kimutatására RNS-vírus szérummintákon szenvedő beteg nincs más hepatitis marker faj.

A PCR-eljárások mellett TMA-vizsgálatot (transzkripciós amplifikációs módszert) is alkalmaznak HCV RNS kimutatására betegekben. A legjobb érzékenység küszöbérték (5-10 NE / ml), de hazánkban ez a tesztelési módszer még nem túl gyakori.

A vírusok észlelt módosításainak hatóköre

Ez a kvalitatív meghatározás a hepatitis C vírus RNS jelenlétében szérumban lehetővé teszi számos vírus genotípusának meghatározását. Jelenleg a tudomány több mint hat genotípust ismeri a vírusról, valamint a betegség mintegy 10 altípusairól.

Az 1, 2, 3 genotípusú vírusok gyakoriak országunkban. Laboratories képes észlelni a következő genotípusok: 1a, 1b, 2a, 2b és 2c és 3, 4, 5a és 6. függetlenül altípus. Minden vírusmódosítás esetében a detektálás sajátossága 100%.

PCR mennyiségi elemzése

Kvantitatív PCR-teszt segítségével megállapítják a vérminták hepatitis vírusának koncentrációját (vírus terhelés). Ez a viremia-teszt (a vírus koncentrációja) lehetővé teszi egy meghatározott genetikai anyag (a leginkább vírusos RNS) egységek számának meghatározását, amelyet egy bizonyos mennyiségben észlelnek. Ebben az esetben határozza meg a koncentrációját 1 ml-ben, ami megfelel 1 cu. cm.

Az analízis mennyiségi paramétereit számokban fejezzük ki, ezt a mérést nemzetközi egységegységként (IU) milliliterenként (ml), ME / ml-ként jelöljük. Néhány laboratóriumban a vírus mennyisége más egységekben is meghatározható: a példányok számát ml-enként, másolatként / ml-nek.

  • Időzítés A hepatitis C esetében a PCR ilyen kvantitatív analízise a terápia megkezdése előtt történik. Aztán az 1., 4., 12. és 24. hetet. A 12. héten végzett értékelés indikatív, lehetővé teszi a terápia hatékonyságának meghatározását.
  • Elemzés előkészítése. A PCR mennyiségi elemzéséhez nem szükséges a beteg speciális felkészítése a vizsgálathoz. A mintavétel előtt fél órával nem szabad dohányozni. Vénás vért használnak laboratóriumi anyagként.

Az eredmények értékelése

Különböző laboratóriumi vizsgálati rendszerek esetében ez a mutató különböző konverziós tényezőket mutat be IU / ml-ben. Átlagosan egy konverziós paramétert alkalmaznak, amelyben 4 kópia / ml = 1 NE / ml. Ez például, ha a laboratórium 2,4 * 10 6 kópia / ml PCR-analízist eredményez, akkor ezt a paramétert 4-gyel kell osztani, és 6 * 10 5 NE / ml-t kapunk.

A 800 000 NE / ml magas terhelési szint magasnak tekinthető, ami megközelítőleg 3 000 000 példány / ml index. Az alacsony viremia egyes szerzők szerint a kvantitatív PCR 400 000 NE / ml alatti paramétereinek felel meg.

A kvantitatív teszt eredményeként a végeredmény nem digitális érték formájában jeleníthető meg, hanem: "a mérési tartomány alatt" vagy "nem detektálható".

  • Értékelés: "a mérési tartomány alatt". Ez azt jelzi, hogy a mennyiségi vizsgálat nem tudta kimutatni a hepatitis C virális RNS-t, de maga a vírus igen kis koncentrációban jelen van a szervezetben. Ezt egy további kvalitatív vizsgálat is jelzi, amely igazolja a vírus jelenlétének tényét.
  • Értékelés: "nem észlelt". Ez az eredmény azt jelzi, hogy a mennyiségi vizsgálat nem észlelt vírust az RNS mintában.

A vírusterhelés paramétere elsősorban a betegség fertőzőképességének mértékét, a beteg fertőzőképességének mértékét határozza meg. Minél magasabb a páciens koncentrációja a vírusnak, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy más emberekre átruházzák. Például, amikor szexuális kapcsolatban áll egy beteg vagy egy függőleges út. Az ilyen mennyiségi mutató segít a páciens kezelésének hatékonyságának meghatározásában.

A PCC mennyiségi elemzésének elvégzése fontos az antivirális terápiához, értékeli sikerét és ütemezi a tanfolyam időtartamát. Tehát a test gyors reakciója a kezelés és alacsony mértékű viremia esetén a terápia időtartama csökkenthető.

A mennyiségi PCR paraméter lassú csökkenésével az antivirális terápiát ki kell terjeszteni vagy módosítani. Ha a vírusterhelés szintje alacsony, akkor ez a terápia kedvező tényezője, ha magas, akkor az alkalmazott kezelési módszer hatástalan, és a gyógyszereknek vagy azok használatának módszereit módosítani kell.

A hepatitis C PCR kvalitatív és kvantitatív elemzése: negatív, pozitív, dekódolás

A hepatitis C a máj vírusos megbetegedése, amelyet a flavonavírus HCV (angol hepatitisz C vírus) okoz, amely ribonukleinsav (RNS) molekulát tartalmaz. Az RNS hordozza a vírus genetikai kódját. Jelenléte lehetővé teszi a hepatitisz C-re vonatkozó PCR-analízist.

Az emberre nézve a HCV veszélye az, hogy az úgynevezett szerológiai ablak (a fertőzés és az immunrendszer reakciója megjelenése közötti időintervallum) nagyon hosszú lehet - több héttől hat hónapig.

Ez nem tárja fel a fertőzést és időben elkezdi a kezelést.

A gazdaszervezet sajátosságaitól függően a HCV akut formában jelenhet meg, és krónikus betegségként is kialakulhat, amely hosszú távú és drága kezelést igényel. A HCV elleni antitestek kimutatásakor számos laboratóriumi vizsgálatot végeznek, beleértve a hepatitisz C-re vonatkozó PCR-t is. Ez a vizsgálat minden olyan személy esetében történik, amelynek vérében a HCV ellenanyagok találhatók.

Mi a PCR elemzés?

PCR hepatitis C laboratóriumi elemzése - biológiai anyag vizsgálata a flavavirus jelenlétének azonosítására.

A polimeráz láncreakció (a rövidítéssel megfejtve) a szervezet vírusos károsodásának mennyiségi értékét, minőségi jellemzőit és az RNS-t tartalmazó vírus genotípusait mutatja.

Alapul véve, valamint további elemzések alapján meghatározták a terápia módját és időtartamát, valamint a járványtani tényezőt (a másik fuvarozó számára történő átvitel kockázata).

Mi az RNS analízis a hepatitis C-re?

A hepatitis C PCR-t RNS-analízisnek is nevezik (HCV RNS), mert nem ismert. A Flavavirus 30-60 nm virion méretű RNS részecskét tartalmaz. Ennek a mikroorganizmusnak az egyik jellemzője a mutációk nagy hajlama.

A vírus minden alfajának (genotípusai) eltérő rezisztenciát mutatnak, ami különböző kezelési módszereket és a beteg további prognózisának jellegét okozza.

Biológiai anyag (vénás vér) foglalkozik éhomi és általában tesztelték Real-Time PCR (nagyon érzékeny valós idejű diagnosztika, hogy meghatározzuk az alsó határ a 15 NE / ml-automatizált zárt rendszer módban).

Vannak más vizsgálatok is, például COBAS AMPLICOR, amelynek érzékenysége 50-100 NE / ml. Bármely laboratóriumi vizsgálat esetében az érzékenységi küszöb fontos, azaz a reagens képes a vírus minimális koncentrációjának kimutatására a biológiai anyagban.

A hepatitis C analízis típusai a PCR módszer alkalmazásával

A hepatitis C PCR-je három fontos elemet tartalmaz:

  • minőségi elemzés;
  • kvantitatív elemzés;
  • genotipizáláshoz.

Ezek a vizsgálatok meghatározhatják a viremia jellegét, valamint a kórokozó genetikai jeleit. A diagnosztikai rendszer érzékenységétől függően a tesztet egyszer elvégzik, és néha egy második vizsgálatot végeznek érzékenyebb reagenssel az eredmények megerősítésére vagy finomítására.

Kiváló minőségű hepatitis C PCR

A hepatitis C-re vonatkozó PCR-analízis a polimeráz-láncreakciós vizsgálat másik gyakori elnevezése. A vizsgálat standard érzékenysége, amely lehetővé teszi a vírusos elváltozás kimutatását, a 10-500 NE / ml tartományban van.

A hepatitis C-re vonatkozó PCR negatív elemzése azt mutatja, hogy a vírus koncentrációja a beteg vérében a diagnosztikai rendszer érzékenységének küszöbértékénél alacsonyabb.

Ha a minőségi PCR "nem észlelt" választ adott, akkor a későbbi kezeléshez fontos tudni a reagens érzékenységi küszöbértékét.

A proteinfrakciók a flavavirushoz sokkal később jelentkeznek.

Quantitative Hepatitis C PCR

A PCR hepatitis C mennyiségi mutatója a vírusterhelés, amely tükrözi a flavavirus RNS koncentrációjának szintjét a szervezetben. Ez egy mutató, amely megmutatja, hogy hány darab vírus RNS-t tartalmaz egy köbcentiméter vér. A hepatitis C PCR RNS eredményeit egy hagyományos rendszerben nemzetközi egységben (IU / ml) nevezik ki, és különböző módokon rögzíthetők, például 1,7 millió vagy 1,7 millió NE / ml.

A hepatitis C mennyiségi PCR-diagnózisát a vírusellenes terápia megkezdése előtt, a kezelés 12. hetében pedig a HCV elleni küzdelem kiválasztott módszerének eredményeinek értékelésére adják. A vírus terhelés lehetővé teszi a betegség három fontos mutatójának azonosítását:

  • fertőzőképesség, azaz a vírus egyik hordozótól a másikig terjedő kockázatának mértéke (minél nagyobb a flavavirus RNS koncentrációja, annál nagyobb a valószínűsége egy másik személy fertőzésére, például szexuális érintkezés esetén);
  • a kezelés módszere és hatékonysága;
  • időtartamát és prognózisát (minél nagyobb a vírusterhelés, annál hosszabb a kezelés).

A hepatitis C mennyiségi PCR-diagnózisa a laboratóriumi vizsgálat típusától és az érzékenység küszöbétől függ. A norma alsó határa rendszerint 600 000 NE / ml, az átlagérték 600.000-700.000 NE / ml. A 800 000 NE / ml és annál magasabb értékeket magas szintű RNS-tartalmú vírusnak tekintik.

genotipizáláshoz

Tekintettel a HCV magas mutációs aktivitására, fontos, hogy a vizsgálati stádiumban meghatározzuk, hogy a vírus genotípusa a beteg vérében van-e. Összesen 11 hepatitis C vírus genotípust jegyeztek fel a bolygón, amely számos alfajot tartalmaz. Az Orosz Föderáció területén 1,2-es és 3-as gyakoriak.

A hepatitis C PCR RNS-je a genotipizálással együtt nagyon fontos eleme az elemzésnek, mert lehetővé teszi az orvos számára a vírus rezisztenciájának (rezisztencia) meghatározását, megfelelő gyógyszerek kiválasztását és a kezelés lefolyását.

A genotipizálás lehetővé teszi a máj állapotának közvetett meghatározását is. Például a HCV 3 genotípusát gyakran steatosis kísérli, amelyben a zsír felhalmozódik a test sejtjeibe.

A PCR-nek a hepatitis C-ben végzett vérvizsgálatának olyan számot kell adnia, amely meghatározza a genotípust. A laboratóriumi válaszokban írható "nem gépelt" - ez azt jelenti, hogy az emberi vérben olyan vírus van, amelyet a tesztrendszer nem határoz meg. Ez azt jelezheti, hogy a genotípus egy adott földrajzi területen nem jellemző. Ebben az esetben szükség van az elemzés újbóli átadására a diagnosztikai rendszer nagyobb érzékenységével.

PCR analízis dekódolása hepatitis C-re

A hepatitis C PCR vizsgálatát a fenti adatok alapján számszerűsíthetjük. A laboratóriumi vizsgálatok eredményeinek átvételekor általában a következő adatokat írják fel:

  • "Found" / "not found" (magas minõségû PCR a hepatitis C esetében);
  • az RNS-t tartalmazó frakciók mennyisége, például 831.680 IU / ml (kvantitatív PCR-vizsgálat);
  • az a szám, amely meghatározza a HCV genotípust, például - 1, 2, 3, 4;
  • a teszt neve leginkább Real-time.

A legfontosabb a hepatitis C PCR-elemzésének megfejtéséhez a második tétel, amely a vírusterhelést mutatja a prognózis, a módszer és a kezelés időtartamának meghatározása céljából.

Ha a hepatitis C-re vonatkozó PCR-analízis negatív, és ELISA pozitív - mit jelent ez?

A laboratóriumi tesztek megfejtéséhez fontos, hogy kapcsolatba lépjen egy hepatológussal vagy fertőző betegséggel foglalkozó szakemberrel, aki megmagyarázza a kapott információkat a diagnosztikai rendszer típusának és az érzékenység küszöbének megfelelően. Az orvosi gyakorlatban sok vérvizsgálati adat van, amelyek az orvosi nevelés nélküli embert zavartsággá teszik.

Például, ha a vizsgálati HCV PCR negatív és pozitív ELISA, azt jelezheti, hogy ebben az időben a beteg vérében nem HCV, de mielőtt szenvedett akut formában a hepatitis C Úgy ​​tekinthető, hogy a pozitív-linked immunosorbent assay (ELISA) azt mutatja, hogy a vérben vannak olyan antitestek, amelyeket a múltban a vírus inváziója után állítottak elő. De a modern orvosi gyakorlatban ELISA elemzés nem eléggé megbízható, és gyakran ad szokatlan eredményeket, így az orvosok használni, mint egy elsődleges szűrés. A betegség diagnosztizálásakor a szakemberek pontosan PCR-tesztek segítségével irányulnak.

Hasznos videó

A következő videóban nagyon részletes és érdekes megmondani, hogy mi a lényege a PCR módszernek, hogyan történik az elemzés:

következtetés

A vénás vér általában a hepatitis C PCR analízisére vonatkozik. Leggyakrabban kettős mintavétel egy biológiai anyagból - ELISA-hoz, és közvetlenül egy PCR-teszthez. A helyes teszteredményekhez a biológiai anyag laboratóriumi mintavételének legfontosabb szabályainak betartása szükséges:

  • a vér az analízishez reggel egy üres gyomorban van;
  • az evés és a vérvétel között legalább 8 óra legyen;
  • A vizsgálat megkezdése előtt kizárnia kell az alkoholt és a sült ételeket is;
  • A vért megelőző napon a fizikai erőfeszítést elkerülni kell.

A vérvizsgálat eredményei általában másnap készen állnak.

PCR-vizsgálat a hepatitis C-re: típusok, indikációk, átirat

A vírusos hepatitis C súlyos betegség, amely májkárosodással jár. A betegek nyolcvan százalékában krónikus formában jár. A vírus szaporodik a májsejtekben - májsejtekben - és halálát okozza. A halott szövetet kötőszöveti foci váltja fel, a fibrózis kialakul.

A fejlesztés a máj fibrózis képtelen ellátni a funkcióját, kezdődik cirrhosis, ami veszélyes szövődményei: egyre nagyobb nyomás nehezedik a kapuvénában, gyomor-bélrendszeri vérzés, károsodott véralvadás mentális változások miatt kárt agyi magok mérgező termékeket.

A betegség oka a Flaviviridae családból származó vírusfertőzés, amely RNS-vírus egy típusa. Ez azt jelenti, hogy a genetikai anyag, amellyel a patogén fehérjéit szintetizálják, egy ribonukleinsav molekulában kódoljuk. A fertőzés a vérben, szexuális úton történik, és terhes nőtől a magzatig. Sajnos a fertőzés és az antitestek termelésének kezdete meglehetősen nagy mennyiségű időtartamot eredményezhet - két hétről hat hónapra. Ez nem teszi lehetővé a fertőzés meghatározását az enzim immunvizsgálat módszerével és a kezdeti kezelést a korai stádiumban.

Mi a PCR elemzés?

A PCR molekuláris analízis olyan módszere, amely lehetővé teszi a kórokozó genetikai anyagának kimutatását a fertőzés utáni első héten polimeráz láncreakcióval. A tanulmány nagyfokú specifitást, pontosságot és nem csak a vírus jelenlétének vagy hiányának meghatározását, hanem koncentrációját és genotípusát is meghatározza.

A vizsgálat elvégzéséhez vegye be a páciens vérét, amelyben potenciálisan megtalálható a vírus RNS-je. A vérben a primereket hozzáadjuk mesterségesen szintetizált részecskékhez, a kívánt gén kis hossza, és az RNS polimeráz egy speciális enzim, amely sokszorozza a kórokozó genetikai anyagának mennyiségét. Egy speciális berendezés segítségével több fűtési és hűtési ciklust hajtanak végre. Az anyagot ezután elemezzük és összehasonlítjuk az ismert vírusgénekkel, amelyek alapján következtetés születik a fertőzés jelenlétéről vagy hiányáról.

A hepatitis C PCR analízis típusai

A PCR-elemzés három típusa létezik:

  1. Minõségi PCR analízis. A tanulmány első szakasza. Lehetővé teszi a vírus genetikai anyagának azonosítását a vérben.

  • PCR mennyiségi elemzése. Lehetővé teszi a vírus terhelésének meghatározását - a patogén genetikai anyagának koncentrációját egy milliliter vérben. Ezt a vizsgálatot a terápia megkezdése előtt végezzük, majd az első, negyedik, tizenkettedik és (ha a tanfolyam hosszú) a kezelés huszonnegyedik hete annak hatékonyságának értékelésére.

  • genotipizáláshoz. A hepatitis C kórokozója gyakran és gyorsan mutál. A bolygón a vírus genotípusának hét variánsát találtam. Oroszországban az első, a második és a harmadik típus gyakori. A genotípusok mindegyike eltérő terápiás ellenállással rendelkezik, például az első típusú kezelés hatékonysága hatvan százalék, a második és a harmadik pedig nyolcvanöt. Ezért megfelelő gyógyszerek kiválasztása és megfelelő időtartamú kezelési eljárás meghatározása érdekében pontosan meg kell határozni, hogy a beteg milyen típusú vírussal fertőzött.
  • Javallatok a hepatitis C PCR analízishez

    PCR-vizsgálatot írnak elő a következő esetekben:

    • érintkezés egy beteg emberrel, ami fertőzéshez vezethet;
    • pozitív enzimkapcsolt immunvizsgálat;
    • a májcirrózis jelei: a májméret megváltozása, a megnagyobbodott lép, a szubkután vénás plexus megjelenése a hasra;
    • a májkárosodás tüneteinek megjelenése: fájdalom a hasüreg jobb oldalán, a bőr sárgulása;
    • az ALT és az AST fokozott aktivitása a biokémiai vérvizsgálatban;
    • a kezelés megkezdése előtt a vírusterhelés meghatározására;
    • az antivirális terápia hatékonyságának monitorozása;
    • a kezelés befejezése után a relapszus nyomon követése;
    • a diagnosztizált hepatitisz B jelenlétében, kizárva a vegyes májkárosodást.

    A hepatitis C PCR-vizsgálat dekódolása

    A hepatitis C-re vonatkozó PCR-analízis és enzim immunvizsgálat dekódolását egy hepatológus vagy fertőző betegség szakembernek kell foglalkoznia. A PCR eredményeinek elemzése biokémiai vérvizsgálattal, biopsziával és ultrahanggal kombinálva szükséges. Csak szakképzett orvos képes lesz elemezni a vizsgálatok eredményeit, és ezek alapján meghatározza a megfelelő kezelést.

    Minőségi elemzés dekódolása.

    A kórokozó genetikai anyagát az elemzett biológiai anyag tartalmazza. A fertőzés megerősítést nyert.

    Nincs fertőzés, vagy a patogén RNS mennyisége az érzékenységi határ alatt van.

    Kvantitatív elemzés dekódolása.

    Egészséges emberek számára normális szám. Ez azt jelenti, hogy nincs a hepatitis C RNS a vizsgálati anyagban, vagy koncentrációja a vizsgálat érzékenységi küszöb alatt van.

    Az RNS koncentrációja a mennyiségi tartomány alatt van. Az ilyen eredményeket nagyon óvatosan értelmezik, korrelálják más tanulmányok adataival, gyakran végeznek egy második vizsgálatot.

    A vírusterhelés szintje egy adott koncentrációban alacsony. Általában a vírus mennyiségének csökkenése azt jelenti, hogy a kezelés sikeres.

    Több mint 8 * 10 ^ 5 NE / ml

    A vírusterhelés szintje egy adott koncentrációban magasnak tekinthető.

    Több mint 2,4 * 10 ^ 7 NE / ml

    Az RNS mennyisége meghaladja a számszerűsítés tartományának felső határát. Lehetséges következtetéseket levonni a vírusterhelés mértéke miatt. Általában ilyen esetekben a tesztet megismétlik a vérminta hígításával.

    A genotipizálás dekódolása.

    Egy adott genotípus RNS-ét detektáltuk

    A biomateriában a hepatitisz C vírust kimutatják egy adott genotípus és altípus. Az eredmény latin számokkal és latin betűkkel van kódolva, például - 1a, 2b. Jelenleg hét genotípus és hatvanhét altípus van, de Oroszországban csak három első típus van.

    Hepatitis C vírus RNS-t detektáltunk

    A vérben az RNS egy ritka genotípust talál Oroszország számára, amely nem tulajdonítható az első, második vagy harmadik típusnak. Több kutatásra van szükség.

    Ez az eredmény azt jelzi, hogy a beteg egészséges vagy a kórokozó RNS szintje túl kicsi.

    Lehetséges a helyzet, ha a hepatitis C PCR-analízise negatív, és az enzim immunvizsgálat kimutatja a vírus ellenes antitesteket. Ez azt jelenti, hogy a beteg acut formában hepatitis C-t kapott és meggyógyult. Körülbelül húsz fertőzés esedékessé teszi a spontán gyógyulást, ha a páciens testének elegendő rezisztenciája van a fertőzésre.

    Annak ellenére, hogy a PCR nagyon pontos elemzés, annak eredménye az alábbi esetekben torzulhat:

    • a vért nem megfelelő körülmények között a laboratóriumba szállították, a hőmérsékleti rendszert megsértették;
    • a bioméret mintája szennyezett;
    • a vérben maradt nyomokban a heparin és más antikoagulánsok;
    • A vizsgált anyagban gátlók voltak - olyan anyagok, amelyek lassítják vagy leállítják a polimeráz láncreakciót.

    A PCR előnyei más módszerekkel szemben

    1. Diagnózis a korai szakaszban. A PCR detektálja a betegség kórokozójának genetikai anyagát. Az immunfluoreszcencia analízis segítségével csak immunglobulinokat lehet meghatározni, amelyeket a szervezet a fertőzésre adott válaszként termel. Hepatitis C fertőzés esetén a fertőzés és az immunválasz kialakulása között eltelt idő több hét és hónap lehet, mely időpontban az ELISA hatástalanná válik. A PCR már a fertőzés utáni első héten ad választ.

  • Alacsony hibalehetőség. A vizsgált anyagban meghatározzuk a genetikai anyagot, amely csak egyfajta kórokozóra jellemző. Ez lehetővé teszi a hamis eredmények kizárását. Az ELISA-val hibák léphetnek fel, mivel ugyanazok az antitestek felszabadulhatnak különböző vírusok ellen - ilyen antitesteket keresztreaktivitásnak neveznek.

  • Nagy érzékenység. A PCR a minimális mennyiségben is képes kimutatni a patogén RNS-ét. Ez lehetővé teszi a rejtett fertőzések azonosítását.
  • Hogyan készítsünk elő vérrátadást PCR kutatásra

    PCR analízis esetén a vénás vért gyűjtjük a hepatitis C-re. Általában két adag vért veszünk egyszerre a páciens vénájából: az első PCR-hez, a második az ELISA-hoz. Ez azért van így, hogy pontosabban felmérjük, mennyire rossz a páciensnek a vírussal fertőzött, és hogyan védekezik az immunitás.

    Általában az alábbi szabályok szükségesek a beteg számára:

    • reggel vérvizsgálatot végeznek;
    • az utolsó étkezés és a vérszállítás közötti szünetnek nyolc-tíz óra;
    • két vagy három nappal az elemzés előtt meg kell adni sült és zsíros ételeket, valamint alkoholt;
    • az elemzést megelőzően huszonnégy órával a betegnek kerülnie kell a fizikai erőfeszítést: ne hordjon súlyokat, ne vegyen részt edzőteremben vagy medencében.

    Kapcsolódó Cikkek Hepatitis